BACTERIAS DE IMPORTANCIA BIOTECNOLÓGICA:

BACTERIAS LÁCTICAS Y BACTERIAS DEL ÁCIDO ACÉTICO.

Trabajo Práctico N° 12

Carrera: Ingeniería en Alimentos

Cátedra: Microbiología General

Profesoras:
 María Mercedes Ferreyra
 Liliana Mabel Gerard

Alumnos:
 Garin Camila
 Pereira Nahuel
 Sangenis Melina

Año: 2017
 Microbiología General
Laboratorio

Objetivos

 Aislar bacterias del ácido láctico y del ácido acético.

 Caracterizar los microorganismos aislados
 Observar las características morfológicas e interpretar las reacciones bioquímicas y de
cultivo de las bacterias estudiadas.
Introducción

Microbiología industrial o biotecnología microbiana es el ámbito de la Microbiología orientado

a la producción de elementos de interés industrial mediante procesos en los cuales
intervengan, en algún paso, un microorganismo.
Entre los microorganismos utilizados biotecnológicamente a nivel industrial encontramos una
gran diversidad. Dentro de las bacterias se destacan dos grandes grupos llamados:
Bacterias lácticas: las BAL se utilizan en la elaboración de productos lácteos fermentados, las
fermentaciones secundarias de vinos (fermentación maloláctica) así como también en la
maduración de productos cárnicos. Son bacterias Gram (+), inmóviles, no esporuladas,
anaerobias aerotolerantes o microaerofílicas, oxidasa negativa, Constituyen un numeroso
grupo entre las bacterias donde hay organismos esféricos y bacilares. Su metabolismo
generador de energía es fermentativo y los sustratos fermentables son azúcares
(monosacáridos, disacáridos, polialcoholes, y a veces almidón).
Bacterias del ácido acético: la importancia de las BAA radica fundamentalmente en su
utilización para la elaboración de vinagres. Son bacilos Gram negativos, de forma elipsoidal o
cilíndricas, que pueden encontrarse solos, de a pares o formando cadenas. Son móviles por
flagelación polar o perítrica, no forman endosporas, aerobias, su metabolismo es respiratorio,
con el oxígeno como aceptor final de electrones, catalasa positiva y oxidasa negativa. Su
temperatura óptima de crecimiento oscila entre 25-30°C y su pH óptimo es de 5-6. Se las
encuentra en substratos azucarados y/o con presencia de alcohol tales como flores, frutas,
miel, vino, sidra, cerveza y vinagre.

Materiales

Agar MRS, caldo MRS, glucosa, cajas de Petri, agar GEY con CO3Ca, extracto de levadura,
purpura de bromocresol, manitol, glucosa, fructosa, etanol, tubos de ensayo, cajas de Petri,
ansa de inoculación, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus rhamnosus, Acetobacter
pasteurianus, reactivos de Gram, H2O2 al 3%.

Procedimiento

Comenzamos el trabajo práctico con la preparación de: agar MRS (300mL), caldo MRS (100mL)
este con campanitas, agar GEY (200mL) y caldo para oxidación de azúcares. Preparamos las
placas y los tubos, que posteriormente colocamos en el autoclave.
El siguiente paso que realizamos fue la siembra del Lactobacillus rhamnosus en el agar MRS,
mediante siembra en superficie por agotamiento del ansa. Luego sembramos Lactobacillus
bulgaricus en agar MRS mediante siembra por agotamiento del ansa y por vertido en placa, al
mismo lo incubamos a 42ºC durante 48hs.

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Por otro lado sembramos las muestras de Acetobacter pasteurianus en el agar GEY con CO3Ca
mediante siembra en superficie por agotamiento del ansa y en el caldo para la formación de
ácido a partir de azúcares y alcoholes. Además se prepararon 5 tubos de ensayo con glucosa,
lactosa, sacarosa y etanol. . Incubamos a 30 ºC durante 48 hs.

Técnica y Resultados

Bacterias lácticas
Sacamos las placas de las estufas y procedimos a realizarles un estudio microscópico
realizamos una tinción de Gram, donde pudimos apreciar que en las bacterias del ácido láctico:
tienen cadenas cortas de cocos, son G(+) y en ella no se aprecian bacilos. Además de esto se
les realizó la prueba de la catalasa, tomando una anzada de L. rhamnosus para luego colocarlo
en un portaobjetos, se le agregó H2O2 y confirmamos que dichas bacterias lácticas son catalasa
(-), también se realizaron la prueba de la fermentación donde L. rhamnosus y L. bulgaricus son
homofermentativos.

Fig1. Lactobacillus rhamnosus Fig2. Lactobacillus bulgaricus

Fig3. L. bulgaricus y L. rhamnosus

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Bacterias acéticas
Realizamos un estudio macroscópico donde vimos que estas bacterias forman velos de color
que solo crece en la superficie y en sedimentos del fondo. Microscópicamente a través de un
preparado en fresco, que nos permitió ver que son móviles y una tinción de Gram pudimos
divisar que son bacterias G(-) y que son cadenas largas de bacilos. Se realizó la prueba de la
catalasa con una gotita de H2O2 arriba de la anzada puesta sobre el portaobjeto y obtuvimos
que las bacterias acéticas son catalasa (+), también se realizó la prueba de la oxidasa y
obtuvimos que es oxidasa (-). Por último se utilizaron los tubos de ensayo con las azucares
anteriormente preparados para apreciar la formación de ácido a través de diferentes azúcares.
De esto obtuvimos que las bacterias acéticas producen ácido a partir de glucosa y etanol.

Fig4. Acetobacter pasteurianus (TG) Fig5. Acetobacter pasteurianus (PF)

Fig6. Producción de ácido con bacterias acéticas

Conclusión
Cabe destacar que la tinción de Gram realizada para L. rhamnosus fue excedida de safranina,
por este motivo las bacterias no quedaron de color violeta. Ya que son G(+).

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