Análisis'Instrumental'

Cromatogra2a'
Historia

1903: usó columnas de adsorción para separar

pigmentos vegetales

Fase
móvil
Pigmentos
vegetales

Fig.1

Tswett (1872-1919) Fase

estacionaria

Chroma: color
Graphein: escribir CROMATOGRAFÍA

3
CROMATOGRAFÍA

Separación de los componentes

de una mezcla (muestra),
disueltos en una fase móvil a
medida que se van desplazando
con diferente velocidad a través
de una fase estacionaria
 Clasificación

• Según la disposición de la fase estacionaria:

– Cromatografía plana:
• Cromatografía en capa fina
• Cromatografía en papel

– Cromatografía en columna
• Cromatografía de líquidos
• Cromatografía de gases
• Cromatografía de fluídos supercríticos
• Según el tipo de fase móvil:

• Cromatografía de líquidos (LC) En columna o en superficie plana

• Cromatografía de gases (GC)

En columna
• Cromatografía de fluidos supercríticos (SFC)

9
 CROMATOGRAFÍA PLANA

Papel Cromatografía en papel

Fase estacionaria
Adsorbente sobre soporte Cromatografía
en capa fina
Gel de sílice, poliamida….
Lámina de vidrio, de plástico o
metálica
Tapadera

METODOLOGÍA DE TRABAJO
Papel
Frente de
fase móvil

Fase
móvil

1 5 Fig.1
2 3 4
Sistemas cromatográficos
 Clasificación

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS EN COLUMNA

Método Técnica Fase estacionaria Tipo de equilibrio

LC Reparto Líquido adsorbido sobre un sólido Distribución entre líquidos
inmiscibles
Adsorción Sólido Adsorción

Intercambio iónico Resina de Intercambio Iónico Intercambio iónico

Exclusión por polímeros entrecruzados que forman Distribución/Exclusión

tamaños una red tridimensional porosa.

GC Gas-líquido Líquido adsorbido sobre un sólido Distribución entre gas y líquido

Gas-sólido Sólido Adsorción

SFC Especies orgánicas enlazadas a Distribución entre fluido

superficie sólida supercrítico y superficie
enlazada

18
 Los mecanismos de
separación cromatográficos

• Adsorción
• Repartición Las técnicas
cromatográficas se
• Intercambio iónico clasifican en base
• Exclusión dimensional a cual es el
mecanismo
• Afinidad principal de la
separación
• Quelación
(complejos)
El proceso cromatográfico

Muestra
(A+B)
Fase
móvil

B
Fase
estacionaria
A B

B
A
B
Detector
Señal analítica

t0 t1 t2 t3 t4 t5 t6
A
B

Tiempo, min t0 t1 t2 t3 t4 t5 t6
37
 CROMATOGRAFIA*
•  Con* la* primera* introducción* de* fase* móvil* nueva,* el*
eluyente' (la* parte* de* la* muestra* contenida* en* la* fase*
móvil)*avanza*hacia*abajo*por*la*columna,*donde*Cene*
lugar*un*reparto'o'distribución'entre*la*fase*móvil*y*la*
fase* estacionaria* (Cempo* t1).* El* reparto* o* distribución*
entre* la* fase* móvil* fresca* y* la* fase* estacionaria* se*
efectúa*de*manera*simultánea*en*el*siCo*de*la*muestra*
original.*A*medida*que*la*fase*móvil*limpia*fluye*por*la*
columna,* transporta* moléculas* de* soluto* hacia* abajo*
de*la*columna*en*una*serie*conCnua*de*transferencias*
entre* las* dos* fases.* Pero* como* el* movimiento* de* los*
solutos*sólo*puede*ocurrir*en*la*fase*móvil,*la*velocidad'
media* a* la* que* una* zona* de* soluto* migra* hacia* abajo*
en* la* columna* depende' de' la' fracción' de' 4empo' que'
per7'manece'o'reside'en'dicha'fase.**
 Dilución(del(analito(*
•  La*figura*ilustra*una*importante*caracterísCca*común*al*
proceso*cromatográfico,*a*saber,*la*dilución*del*analito*
siempre*acompaña*a*la*separación*cromatográfica.*Por*
tanto,*el*tamaño*de*la*banda*original*que*conCene*los*
analitos* en* la* figura* es* notablemente* más* pequeña*
que*cualquiera*de*las*dos*zonas*que*llegan*al*detector,*
lo* cual* significa* que* se* produce* una* importante*
dilución* de* los* analitos* mientras* están* siendo*
separados.*En*consecuencia,*los*detectores*empleados*
para* los* analitos* separados* con* frecuencia* deben* ser*
más*sensibles*que*los*que*se*requerirían*si*el*proceso*
de*separación*fuera*innecesario.**
 Cromatogramas(*
•  Si*al*final*de*la*columna*se*coloca*un*detector*que*resT*
ponde* a* la* concentración* del* soluto* y* se* registra* su*
señal* en* función* del* Cempo,* o* del* volumen* de* fase*
móvil*añadido,*se*obCene*una*serie*de*picos*como*se*
muestra* en* la* parte* inferior* de* la* figura* .* Este* gráfico*
denominado* cromatograma,* es* úCl* tanto* para* los*
análisis* cualitaCvo* como* cuanCtaCvo.* La* posición* de*
los*picos*en*el*eje*del*Cempo*puede*servir*para*idenCT*
ficar*los*componentes*de*la*muestra;*las*áreas*bajo*los*
picos*proporcionan*una*medida*cuanCtaCva*de*la*canT*
Cdad*de*cada*componente.**
 Mejoramiento(del(rendimiento(de(la(columna(*
•  En*la*figura*se*observan*los*perfiles*de*concentración*para*las*bandas*que*
conCenen* los* solutos*
SKOOG_CAP_26_4tas 3/25/08A* y*9:52
B* en*AMla* Page
figura*765
* en* el* Cempo* t1* y* en* el* Cempo*
posterior* t2.2* Como* la* especie* B* es* retenida* con* más* fuerza* por* la* fase*
estacionaria* que* A,* se* retrasa* durante* la* migración.* Observe* que* en* el*
descenso* por* la* columna* aumenta* la* distancia* entre* las* dos* bandas.* Sin*
embargo,* al* mismo* Cempo* Cene* lugar* un* ensanchamiento* de* ambas*
zonas,* lo* que* disminuye* la* eficacia* de* la* columna* como* sistema* de*
separación.* Aunque* el* ensanchamiento* de* banda* es* inevitable,* por* lo*
común* se* pueden* encontrar* condiciones* en* las* que* ocurra* con* más*
lenCtud.**
** ambas zo
t1 na como
miento d
encontra
Concentración

t2 titud. Po
B A guras 26
clara dis
B A
columna
Diver
Distancia migrada velocida
chamien
 El proceso cromatográfico

Muestra
(A+B)
Fase
móvil

B
Fase
estacionaria
A B

B
A
B
Detector
Señal analítica

t0 t1 t2 t3 t4 t5 t6
A
B

Tiempo, min t0 t1 t2 t3 t4 t5 t6
37

Por*consiguiente,*tal*como*se*muestra*en*las*figuras*,*con*frecuencia*es*posible*tener*una*
clara*disCnción*de*las*especies*siempre*y*cuando*la*columna*sea*lo*suficientemente*larga.**
 stintos en su migración se pueden lograr mejores separaciones controlando las
os tiempos t1 y t2 se variables que 1) incrementan la velocidad de sepa-
ración de la banda y 2) disminuyen la velocidad de en-

Mejoramiento(del(rendimiento(de(la(columna(*
notablemente más pe-
sanchamiento de la banda. Estas opciones se ilustran
en la figura 26.3. Las variables que influyen en la ve-
locidad de migración relativa de las zonas de soluto a
os zonas que llegan al
e produce una impor- través de una fase estacionaria se tratan en la siguiente
mientras están siendo sección. En la sección 26C se consideran los factores
Diversas* variables* químicas* y* Ysicas* influyen* en* las* velocidades* de*
detectores empleados que influyen en la velocidad de ensanchamiento de las
frecuencia deben ser bandas.
separación* de* las* bandas* y* en* el* ensanchamiento* de* las* mismas.* Por*
querirían si el proceso
.
consiguiente,* 26B a*VELOCIDADES
menudo* DEse*MIGRACIÓN pueden*DE lograr* mejores* separaciones*
LOS SOLUTOS
controlando*La eficacia
las* variables* que* 1)* incrementan* la* velocidad* de*
de una columna cromatográfica para se-
ca un detector que res-
oluto yseparación*
se registra su de*
parar la* banda*
dos solutos y* de2)*
depende en parte disminuyen* la* velocidad* de*
las velocidades
el volumen de fase mó- relativas con las que se lavan o se purifican las dos es-
rie de ensanchamiento*
picos como se de*velocidades
pecies. Esas la* banda.* Estas* opciones*
están determinadas por la se* ilustran* en* la* figura*
siguiente.**
a figura 26.1. Este grá-
, es útil tanto para los
tativo. La posición de
ede servir para identi-
stra; las áreas bajo los a)
Cromatogramas* de* dos* componentes*
cuantitativa de la can- que*ilustran*dos*métodos*para*mejorar*
la*separación:*
a)*cromatograma*original*con*los*picos*
Señal del detector

de la columna
os perfiles de concen-
b) traslapados;* b)* mejora* producida* por*
tienen los solutos A y un* aumento* en* la* separación* de* las*
1 y en el tiempo poste- bandas,* y* c)* mejoramiento* por* una*
tenida con más fuerza disminución*de*la*anchura.**
e retrasa durante la mi-
censo por la columna *
os bandas. Sin embar- c)
un ensanchamiento de
Tiempo
 VELOCIDADES*DE*MIGRACIÓN*DE*LOS*SOLUTOS*

•  La*eficacia*de*una*columna*cromatográfica*
para*separar*dos*solutos*depende*en*parte*de*
las*velocidades*relaCvas*con*las*que*se*lavan*o*
se*purifican*las*dos*especies.*Esas*velocidades*
están*determinadas*por*la*magnitud*de*las*
constantes*de*equilibrio*para*las*reacciones*
mediante*las*cuales*los*solutos*se*distribuyen*
entre*las*fases*estacionaria*y*móvil.**
El proceso cromatográfico

ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
Columna

Comienzo

Fig.1

Perfil de concentración

Fig.2 Tiempo

38
 26B.1 Constantes de distribución dentro
amb
es posib
A 26B.1 Constantes dededistribución den
menudo,
tografía
Constantes'de'distribución'*
se
los equilibrios
expresan mediante
distribución en la croma-
ecuaciones sencillas que es p
A menudo, los equilibrios de distribución en la croma-
suponen la transferencia de un analito entre las fases 26B.2
tografíalos*
•  A*estacionaria
menudo,* se expresan
equilibrios*mediante
de* ecuaciones
distribución* en* sencillas
la* que se*
cromatograYa*
suponen laytransferencia
móvil. Entonces, de para
un la especie
analito entre Alasdel
fases Aunqu 26B
expresan* mediante* ecuaciones* sencillas* que* suponen* la*
soluto se puede escribir: para la
estacionaria
transferencia* y móvil.
de* un* Entonces,
analito* entre* las*parafases*laestacionaria*
especie A del y* móvil.* Aun
medir
soluto se puede escribir:
Entonces,*para*la*especie*A*del*soluto*se*puede*escribir:**
Amóvil ∆ Aestacionaria par
cantida
med
Amóvil ∆ Aestacionaria ción de
La constante de equilibrio Kc para la distribución de la can2
figura
especie A entre las dos fases se denomina constante de
La*constante*de*equilibrio*Kc*para*la*distribución*de*la*especie*A* ción
La constante de equilibrio K para la distribución de la cos. El
distribución y se define como c
entre*las*dos*fases*se*denomina*constante*de*distribución*y*se* cie figu
especie A entre las dos fases se denomina constante de que
define*como* muestrcos.
distribución y se define como 1aA 2 S
Kc ! (26.1) queda cie
1aA 2 M
1aA 2 S mue
especie
donde (aA)S es la actividad Kc del
! soluto A en la fase esta- (26.1) de los quep
donde*(a 1a 2
A)S*es*la*acCvidad*del*soluto*A*en*la*fase*estacionaria*y*(a A)M*rete
A M
cionaria y (aA)M es su actividad en la fase móvil. Cuan- no esp
es*su*acCvidad*en*la*fase*móvil.*Cuando*las*concentraciones*son*bajas*
dodonde
las concentraciones
(a ) es la son bajas
actividad del osoluto
cuando A intervienen
en la fase esta- se deno
o* cuando* intervienen* especies* no* aniónicas,* los* coeficientes* de*de l
A S
especies
cionaria noy (aaniónicas,
) es su los coeficientes
actividad en la de móvil.
fase actividad
Cuan- de la nove
acCvidad*se*acercan*a*la*unidad.**
A M
(véase apéndice 2) se acercan a la unidad. En estas
condiciones,Constantes'de'distribución'*
se sustituyen las actividades cS, por la con-
centración analítica molar del soluto en la fase esta-
cionaria y por cM,se*sususCtuyen*
En* estas* condiciones,* concentración analítica
las* acCvidades* cS,* por* la*molar en
concentración*
laanalíCca* molar* del*
fase móvil. soluto* en* la* fase*
Entonces, estacionaria*
es posible y* por* cM,*la
escribir su*ecuación
concentración*
analíCca* molar* en* la* fase* móvil.* Entonces,* es* posible* escribir* la* ecuación*
26.1 como
anterior*como**
*
cS nS /VS
Kc ! ! (26.2)
cM nM /VM

donde nS y nM son las cantidades de moles de analito

donde*nS*y*nM*son*las*canCdades*de*moles*de*analito*en*las*dos*fases*y*VS*y*
enVlas dos fases yVS y VM son los volúmenes de las dos
M*son*los*volúmenes*de*las*dos*fases.*En*una*situación*ideal*la*constante*de*
fases. En una situación ideal la constante de distribu-
distribución,*a*veces*llamada*razón*o*coeficiente*de*reparto*o*distribución,*
es*constante*a*lo*largo*del*amplio*intervalo*de*concentraciones*de*soluto;*es*
ción, a Sveces
decir,*c llamada razón o coeficiente
*es*directamente*proporcional*a*cM.**
de reparto o
distribución,
** 3 es constante a lo largo del amplio inter-

valo de concentraciones de soluto; es decir, cS es direc-

 Constantes'de'distribución'*
•  La* cromatograYa* en* la* que* se* aplica* la* ecuación*
reordenada* se* denomina* cromatogra:a' lineal' y* da*
como* resultado* caracterísCcas* tales* como* picos*
simétricos* Cpo* Gauss* y* Cempos* de* retención*
independientes*de*la*canCdad*de*analito*inyectado.*
•  Observe*que*Kc'es*la*canCdad*fundamental*que*afecta*
la* distribución* de* los* componentes* entre* las* fases* y,*
por* tanto,* las* separaciones.* Para* una* elección*
adecuada*de*la*fase*móvil,*de*la*fase*estacionaria*o*de*
ambas,* la* constante* de* distribución* se* puede*
manipular*dentro*de*límites.*Si*se*ajusta*el*volumen*de*
una*fase,*es*posible*modificar*la*relación*molar*en*las*
dos*fases.**
 Tiempo'de'retención'*
•  Aunque* la* constante* de* distribución* es* fundamental* para* las*
separaciones*cromatográficas,*no*se*puede*medir*con*facilidad.*En*
cambio,* es* facCble* medir* la* canCdad* llamada* 4empo' de' retención'
que*es*una*función*de*Kc.*Para*ver*cómo*se*hace*esto*refiérase*a*la*
figura*del*siguiente*slide,*que*es*un*cromatograma*sencillo*de*dos*
picos.*El*pico*pequeño*de*la*izquierda*es*para*la*especie*que*no'es*
retenida* por* la* columna.* A* menudo,* la* muestra* o* la* fase* móvil*
conCene* una* especie* que* no* se* queda* en* la* columna* Cuando*
ocurre*así,*este*Cpo*de*especie*puede*añadirse*para*facilitar*
la*idenCficación*de*los*picos.*El*Cempo*tM*necesario*para*que*
la* especie* no* retenida* alcance* el* detector* en* algunas*
ocasiones* se* denomina* 4empo' muerto' y* proporciona* una*
medida*de*la*velocidad*promedio*de*migración*de*la*fase*móT*
vil,*por*lo*que*es*un*parámetro*importante*para*idenCficar*los*
picos*del*analito.**
 de la derecha en la figura 26.4 es el de una especie del
analito. El tiempo Tiempo'de'retención'*
requerido para que esta zona llegue
al Todos*los*componentes*pasan*un*Cempo*t
detector después de la inyección de la muestra se
M*en*la*fase*móvil.*El*pico*más*
denomina tiempo de retención y se le simboliza con tR.
grande*de*la*derecha*en*la*figura*es*el*de*una*especie*del*analito.*El*Cempo*
requerido*para*que*esta*zona*llegue*al*detector*después*de*la*inyección*de*la*
El muestra*se*denomina*Cempo*de*retención*y*se*le*simboliza*con*t
analito es retenido porque pasa un tiempoR.*El*analito*es* tS en la
fase estacionaria. Entonces,
retenido*porque*pasa*un*Cempo*t
_4tas 3/25/08 9:52 AM Page 767 S*o*t(r’)el tiempo de retención es
*en*la*fase*estacionaria.*Entonces,*el*
Cempo*de*retención*es*
tR ! tS " tM (26.3)
767
26B Velocidades de migración de los solutos

La velocidad lineal promedio de la migración

FIGURA' del solu-
' Cromatograma* caracterísCco* de*
una* mezcla* de* dos* componentes.* El* pico*
to a lo largo de la columna n (por lo regular,
pequeño*
tR en representa*
de* la* izquierda* cm/s) es un*
tM
soluto* que*
FIGURA 26.4 no* está* retenido*
Cromatograma en* la* columna,*
característico de una
tS
Señal del detector

por* lo*
mezcla que*componentes.
de dos llega* al* Eldetector*
pico pequeñocasi* de*
de la
L izquierda
inmediato*representa
después* un soluto que no está
de* empezar* la*retenido
elución.*
n! (26.4)
en la columna, por lo que llega al detector casi de
Por*consiguiente,*su*Cempo*de*retención*tM*
t inmediato después de empezar la elución. Por
es*casi*igual*al*Cempo*que*se*requiere*para*
R consiguiente, su tiempo de retención tM es casi igual
que*una*molécula*de*la*fase*móvil*pase*por*
al tiempo que se requiere para que una molécula de la
la*columna.**
donde L es la longitud de la columna rellena. De ma-
Tiempo fase móvil pase por la columna.
*
nera semejante, la velocidad lineal promedio u de las
 después de la inyección de la muestra se R
empo deEldenomina
analito
retención y tiempo
es
se le de retención
retenido
simboliza porque
con yt se
pasa
. le simboliza
un tiempoconttRen
. la
) Elporque
analitopasa es retenido porque
R
pasa un tiempo tS en la
S
6.2)
s retenidofase estacionaria. un tiempo
Entonces, tS enel latiempo de retención es
naria. Entonces,
o
Tiempo'de'retención'*
fase estacionaria.
el tiempo de Entonces,
retención
tR!!t t"
el estiempo de retención es
tM (26.3)
alito t S" t (26.3)
t ! t " t R S(26.3) M
s
dos
R S M
LaLa velocidad
velocidad lineal
lineal promediodede
promedio la la migración
migración del del solu-
solu-
u-
d linealLa*velocidad*lineal*promedio*de*la*migración*del*soluto*a*lo*largo*de*la*
ibu- promedio de la migración del solu-
totoa alololargo
largo de la columna
columnan n(por
deregular,
la
columna******(por*lo*regular,*en*cm*/s)*es:*
(por lo lo regular,
regular, en cm/s)
en cm/s) es es
ode
to o la columna n (por lo en cm/s) es
r-ter- L LL
! n n! !
(26.4) (26.4)
(26.4)
rec-
c- n t RtR
tR
que
e dondeLLes
donde es la la longitud
longitud de
de lalacolumna
columna rellena. De ma-
rellena. De ma- la*
la
afíalongitud
donde* deL* la
es* columna
la* longitud* rellena.
de* la* De ma-
columna* rellena.* De* manera* semejante,*
a nera semejante, la velocidad lineal promedio u de las
velocidad*lineal*promedio*u*de*las*moléculas*en*la*fase*móvil*es**
ante,
omo la nera
velocidad semejante,
lineal promediola velocidad
u de las lineal promedio u de las
o la fase moléculas en la fase móvil es
* móvil
nnin- moléculas es en la fase móvil es
n-En L
L u! L (26.5)
onde u! u !(26.5)
tM (26.5)
e t M
tM
26B.3 Relación entre la tasa de flujo
ación entre la tasa de flujo
enda- volumétrico
26B.3 y la velocidad
Relación del flujo lineal
co y la velocidad
ía de del flujoentre
lineal la tasa de flujo
a-
e dis- volumétrico y de
la vista
velocidad del flujo lineal
Desde el punto experimental,
e o de vista experimental, en la cromato- en la cromato-
unto
to”
 26B.4 Relación entre tiempo de retención el factor d
y constante de distribución 26B.5 La
El factor de
Relación*entre*Cempo*de*retención*y*constante*
26B.4 Relación entre tiempo de retención
Para relacionar la velocidad de migración de un soluto
el factor
importante
y constante de distribución
de*distribución**
con su constante de distribución, su velocidad se expre-
sa como
Para una fracción
relacionar de la velocidad
la velocidad de migraciónde ladefase
un móvil:
soluto
El velocida
las factor d
lumnas. 4 La
importante
conla*
Para* relacionar* suvelocidad*
constantede* de distribución,
migración* de*suun* velocidad
soluto* con*se expre- pende
lasde*
su* constante* de la
velocid
distribución,* su* (fracción
! use*fracción
sa velocidad*
comonuna "expresa* de de tiempo
la velocidad
como* quedeelde*
una* fracción* lasoluto
fase volumétrico
móvil: de* la*
la* velocidad* lumnas.
fase* 4 L
móvil:** permanece en la fase móvil) nación
pende dadade l
* n! u " (fracción de tiempo que el soluto cualquier
volumétric c
Sin embargo,permanece
esta fracción eneslaigual al número prome-
fase móvil) anación
cualquier dad
dio de moles de soluto en la fase móvil en cualquier factor
cualquierde re
instante
Sin embargo,dividido entre la cantidad
esta fracción es igual altotal de moles
número de
Sin*embargo,*esta*fracción*es*igual*al*número*promedio*de*moles*de*soluto*en*la*fase*
prome- de retenció
a cualquie
móvil*en*cualquier*instante*dividido*entre*la*canCdad*total*de*moles*de*soluto*en*la*
soluto
dio en la columna:
de moles de soluto en la fase móvil en cualquier factor de r
columna:**
instante dividido entre la cantidad total de moles de de retenció
* moles del soluto en la fase móvil
soluto enn!laucolumna:
"
moles totales del soluto donde KA e
moles del soluto en la fase móvil Si se sustitu
n! u "total de moles de soluto en la fase móvil es
El número
moles totales del soluto donde KA
igual a la concentración molar, cM, del soluto en esta
fase multiplicada por el volumen, VM. De manera si- Si se sustit
Elmilar,
número total de moles de soluto en la fase móvil es
la cantidad de moles del soluto en la fase esta-
igual a la está
cionaria concentración
dada por el molar,
producto , del
cMde soluto en esta
la concentración,
4 En la bibliogra

fase
cS, multiplicada
del soluto en por el volumen,
la fase estacionaria . Desumanera
VMpor volumen, si- se simbolizaba c
la IUPAC reco
milar, la cantidad de moles del soluto en la fase esta-
 K !
FIGURA 26.4 Cromatogramac característico
R
de una
(26.1) queda en la colum
tM
1aA 2 M FIGURA 26.4 Cromatograma característico de una
tS
mezcla de dos componentes. El pico pequeño demezcla la de dos componentes. especie puededeaña
Señal del detector
Relación*entre*Cempo*de*retención*y*constante*
El pico pequeño la
izquierda (aA)S es launactividad
donderepresenta soluto que delno soluto A enizquierda
está retenido la faserepresenta
esta- un solutode que
losno picos. El tie
está retenido
en la columna, por lo que llega al detector casi de
en lacionaria
columna,
inmediato
do las después
por
y (a
de*distribución**
A)loM que
es sullega
de empezar
concentraciones
al detector
actividad
sonlabajas
en lacasi
elución.
fasede móvil.
inmediatoCuan-
Por consiguiente,
o cuando
no retenida
después de empezar
intervienen su tiempo dese
la elución. Poralcan
denomina
retención tiemp
tM es casi igual
al tiempo que se requiere para que una molécula de
consiguiente,
especies su notiempo
aniónicas,
Tiempo
de retención
los t es
coeficientes
M casi igual
de actividad de la velocidad pr
fase móvil pase por la columna.
al tiempo
(véaseque se requiere para
El*número*total*de*moles*de*soluto*en*la*fase*móvil*es**
apéndice 2) se que unaa molécula
acercan la unidad. de Enla estas vil, por lo que es u
fasecondiciones,
móvil pase por se la columna. las actividades c , por la con-
igual*a*la*concentración*molar,*cM,*del*soluto*en*esta**
sustituyen tificar los picos d
S
fase*mulCplicada*por*el*volumen,*VM.*De*manera*siT**
la columna. En el casoanalítica
centración de una columna molartubular
delabierta,
soluto en lan !fase cMVM 1
u " esta- pasan
! u " un tiempo tM
milar,*la*canCdad*de*moles*del*soluto*en*la*fase*estaT**
F está relacionada con la velocidad lineal en la salida cM VM # cSVS 1 # cSVS /cMVM
cionaria
de la comuna uo y por c M , su concentración analítica molar en de la derecha en l
cionaria*está*dada*por*el*producto*de*la*concentración,** Al sustituir la ecuación 26.2 en esta última ecu
la fase móvil.
c Entonces,
V es
c*,*del*soluto*en*la*fase*estacionaria*por*su*volumen,*S**
2
posible escribir
1 la ecuación analito. El tiempo
F ! uM oA ! M uo " pr (26.6) ción se obtiene una expresión para la velocidad
n! 26.1 u" como !u" al detector despu
VS*.*Por*tanto,** c M V M # c S V S 1 # cS V S /cM
migración
V M
del soluto en función de su constante de d
donde A es el área de la sección transversal del tubo
* (pr 2). En el caso de una columna rellena, no se dispo- tribución y de los volúmenes denomina tiempo
de las fases estacionar
Aldelsustituir la ecuación 26.2 nS /VSúltima
cS en esta y móvil:
ecua- (26.2) El analito es reten
ne volumen completo
Al*susCtuir*la*ecuación** de la K columna
c ! para
! el líqui-
ción se
do, por loobtiene una
que la ecuación 26.6 se tiene c
expresión Mpara
que nMla/Vavelocidad
modificar M de fase 1 estacionaria.
* v ! u "
1 # KcVS /VM
(26.
migración del soluto F ! en pr 2ufunción de su (26.7)
constante de dis-
en*esta*úlCma*ecuación*se*obCene*una*expresión*para*la*velocidad*de*migración*del*soluto*
e
donde nS y nM sono las cantidades de moles Los dos devolúmenes
analitose pueden calcular a partir del m
tribución y de los volúmenes de las fases estacionaria
en*función*de*su*constante*de*distribución*y*de*los*volúmenes*de*las*fases*estacionaria*y*
donde ene eslas dos fases
la fracción yVS ytotal
del volumen VM deson los volúmenes
la columna todo por deellas
cualdos
se prepara la columna.
y móvil:
móvil:*
disponible para el líquido (porosidad de la columna). La velocidad linea
fases. En una situación ideal la constante de distribu-
Los*dos*volúmenes*se*pueden*
26B.5 to a lo largo
La velocidad de migración de la c
del soluto:
ción, a veces llamada razón 1 o coeficiente de reparto o
26B.4 Relación v entre
! u tiempo
" de retención (26.8)
elcalcular*a*parCr*del*método*por*el*
factor de retención
distribución,
y constante
3 es constante
de distribución 1 # KcVaS lo /VMlargo delElcual*se*prepara*la*columna.**
amplio inter-
factor de retención k es un parámetro experiment
valo de concentraciones de
Para relacionar la velocidad de migración de un soluto soluto; es decir, cS es direc-
Los dos volúmenes se pueden calcular a partir *
importante
del mé-
que se usa con frecuencia para compar
con su tamente
constante deproporcional a cM. La
distribución, su velocidad cromatografía
se expre- en la que
las velocidades de migración de los solutos en las c
todo poruna
sa como el cual sedeprepara
fracción la velocidad la de
columna.
la fase móvil: donde L es la lon
lumnas. La razón por la cual k es tan útil es que no d
4
 izquierda representa un soluto que no está retenido
El factor26B.5 de retención
La velocidad k es unde parámetro
migración experimental
del soluto:
ederetenciónLa'velocidad'de'migración'del'soluto:'el'factor'
un soluto importante
en la columna, por lo que llega al detector casi de
que de
elinmediato
factor se usa con
retención
después
frecuencia para comparar
de empezar la elución. Por
dad se expre-
a fase móvil:
de'retención'*
las velocidades
El
lumnas.alLa
consiguiente,
4 factor
razón
de migración
de su tiempo
retención
porselarequiere
k
de
es
cual k es
los
deun solutos
retención
parámetro
tanqueútiluna
tMen
es que
las
casico-
esexperimental
igual
no de-de la
ación de un soluto tiempo que para molécula
pende importante
de la forma quede se
la usa
columnacon frecuencia
o de la tasa para
de comparar
flujo
El* factor' fase móvil pase por la columna.
de' retención' k' es* un* parámetro* experimental* importante* que* se* usa* con*
elocidad se expre-
solutofrecuencia* para* las velocidades de migración de los una
solutos en las co-
volumétrico.
comparar*Esto las* quiere
velocidades*decirde*quemigración*
para combi-
de* los* solutos* en* las*
d) de la fase móvil: naciónlumnas. dada
4 La razón por la cual k es tan útil es que no de-
de soluto, faseúCl*
móvil y fase estacionaria
columnas.La* razón* por* la* cual* k' es* tan* es* que* no* depende* de* la* forma* de* la*
cualquierpende de la forma
columna de la columna
de cualquier forma oque de funciona
columna*o*de*la*tasa*de*flujo*volumétrico.*Esto*quiere*decir*que*para*una*combinación* la tasa de flujo
aue
mero el prome-
soluto
tubular abierta, a cualquiervolumétrico. de EstocMVquiere
flujo M fase decir
de móvil que
dará para
dada*de*soluto,*fase*móvil*y*fase*estacionaria*cualquier*columna*de*cualquier*forma*
tasa el1mismo
una combi-
n!u" !u"
neal
móvil) en la salida nación dada cde V soluto,
que*funciona*a*cualquier*tasa*de*flujo*de*fase*móvil*dará
en cualquier factor de retención.MEn # c
M el casoS S delmóvil
Vfase yA,faseVS estacionaria
1*el*mismo*factor*de*retención.*
soluto # cSel /cMVM
factor
de moles de cualquier
de retención kA columna
En*el*caso*del*soluto*A,*el*factor*de*retención*k
se define de cualquier
como forma que funciona
A*se*define*como**
Al sustituir la ecuación 26.2 en esta última ecua-
al número prome- a cualquier tasa de flujo de fase móvil dará el mismo
(26.6) ción se obtiene una expresión KAelVScaso para la velocidad de
móvil en cualquier factor de retención. En del soluto
kA !en función de su constante A, el factor
(26.9)
migración del soluto V de dis-
total
móvil de moles
nsversal del tubo de de retención k A se define M como
tribución y de los volúmenes de las fases estacionaria
ena, nodonde*
o se dispo- donde
KA* es* KA es lade*
y móvil:
la* constante* constante de distribución
distribución* del* K
soluto* del soluto A.
AVS A.* Si* se* susCtuye* la* ecuación*
mna paraanterior*en*la*ecuación**
el líqui- Si se sustituye la ecuación 26.9 kA ! en laV 26.8 se obtiene (26.9)
aease
fase móviles a
quemóvil
modificar 1
M
* v!u " 1 (26.8)
soluto
oluto en* esta donde KA es nla! constante
u" 1 # K V
c S /V
de distribuciónM del soluto A.
(26.10)
e manera (26.7)
si-
se*obCene* Si se sustituye la ecuación 1 # 26.9
kA en la 26.8 se obtiene
Los dos volúmenes se pueden calcular a partir del mé-
enla la fase
fase móvil es
esta-
tal de la columna 4 En latodo por el cual se prepara la columna.
bibliografía vieja, esta constante se llamaba1factor de capacidad y
del soluto en esta
ncentración, n!u" (26.10)
de la columna). se simbolizaba con k$. En 1993, la Comisión de 1 # kA
Nomenclatura Analítica de
Vsu. volumen,
M De manera si- la IUPAC recomendó que esta constante se denominara factor de reten-
to en la fase esta- ción y26B.5 La velocidad
que se simbolizara con k. de migración del soluto:
 deal la constante de distribu-después de la inyección de la muestra se
al detector
to a lo largo de la columna n (por lo regular, en cm/s) es
zón o coeficiente de o
reparto tiempo
denomina de retención y se le simboliza con tR.
La'velocidad'de'migración'del'soluto:'el'factor'
te a lo largo
(26.2) del amplio
de soluto; es decir, 768
fase
inter-
El analito es retenido
Capítulo Entonces,
cS esestacionaria.
direc-
porque pasa un
SKOOG_CAP_26_4tas
26 Introducción
el tiempo de a las
t L
tiempo 9:52
3/25/08
n !S
en AM la Page 768
separaciones
retencióntR es
(26.4)
cromatográficas
M. La
cles de analito
2 sededenomina
de'retención'*
cromatografía en laPara que mostrar tR ! L
donde tS "cómo
estM
se puede
la longitud de la(26.3)
obtener kA ama-
columna rellena. De
partir de
nes las dos cromatografía
un cromatograma, semigración
lasustituyen las ecuacionesu de las 26.4 y
do características La velocidad
tales como linealnera semejante,
promedio
768 de la
Capítulo 26
velocidad
Introducción
lineal
del solu-
a las
promedio
separaciones cromatográficas
e de distribu-
uss
Para*mostrar*cómo*se*puede*obtener*k
de yreparto
tiempos 26.5
to aPara
o de retención en
lo largo
in-
de la moléculas
ecuación
la columna
mostrar cómo en lo
n (por sela faseA*a*parCr*de*un*cromatograma,*se*
26.10:
regular,
puede móvil es es
enobtener
cm/s) kA a partir de tener un
idad
ampliodesusCtuyen*las*ecuaciones************************y******************en*la*ecuación*anterior:**
un cromatograma,
analito inyectado.
inter- En seLmostrar
sustituyen las L ecuaciones 26.4 y a partir
ir, cS es *direc-
!
nPara cómo u !
se (26.4)
puede (26.5)
obtener kA a partir de tener una ecuad
estringe al estudio teórico de M 1
tR
26.5 en la ecuación L
26.10:
un cromatograma, L t
se sustituyen las ecuaciones 26.4 y a partir de un c
afía en la que
donde L es la longitud26.5 de enla columna# $
rellena.
la ecuación 26.10: De ma- (26.11)
romatografía 26B.3 tR promedio
Relación
nera semejante, la velocidad lineal tM lau de
entre 1tasa
% de
las kAflujo
as tales 1993,
como Les Ly la velocidadL 1L
l. Chem., 65, p. 819 las recomenda- volumétrico del
moléculas de en la fase móvil 1 flujo lineal
clatura
retención in-Se*Cene*
Analítica para cromatografía # $ # $ (26.11)
(26.11)
Al
a el empleo del término constante
nyectado. En reordenar
de dis- Desde testa
Rel L ecuación
punto tR tMse
kAtiene en la cromato-
1 %experimental,
tM de vista 1 % k A En
En la la
secció
o más antiguo “coeficiente de reparto” o u! (26.5) factores de sele
dio teórico de
cuenta que ambos términos se hallan en grafía,
Al el flujo
t
reordenar
M
en la
estafase móvil
ecuación está
se caracterizado
tiene por la factores
poder de resolu
rafía. Al reordenar esta ecuación
tasa de
Al*reordenar*esta*ecuación*se*Cene*
se tiene
flujo volumétrico
tR
(cmt3/min) en la salida de
F!
M poder de
tR ! tM
(26.12) (26.12) ENSAN
26B.3 Relación entre la tasa de flujo
kA #kA # 26C
19 las recomenda- volumétrico y la velocidad del flujo lineal t tM Y EFIC
tR ! tM M E
La26C
cromatografía de
o constante de dis- Desde el punto de vista Tenga ken #
experimental,
A cuenta en laelcromato-
que tiempo que pasa en (26.12)
la fase es- eficiencia d
ente de reparto” o tMse denomina Y
afectada por la
minos se hallan en Tenga
grafía, el flujoen
en lacuenta
fase móvil que !eltM,tiempo
estátRcaracterizado
tacionaria,
3
que
por la pasa
algunas vecesen la
tiempo fase es-ocurre a m
que
tasa de flujo volumétrico F (cm /min) en la salida de
de retención ajustado y su símbolo es t"R.
tacionaria,
Tenga en cuentaRque t ! tMel,setiempo
se denomina
que pasa algunas
entRla veces
fase es- tiempo La eficie
columna. Ante
Como muestra en la figura 26.4, y tM se obtie-
en afectada
términos m
de retención
tacionaria, t ! t ajustado
nen , se
con denomina
facilidady su símbolo
algunas
a partir es t"
veces
del cromatograma.
R . tiempo
Cuando*el*factor*de*retención*es*del*orden*de*20*a*30*o*tal*vez*mayor,*los*Cempos*de*elución*son*
R M
El fac-
nes por las cu
tor de retención se calcula a partir de estas cantidades que ocu
excesivamente* Como
de retención
largos.* sees*con
Lo* ideal* muestra
ajustadoque* y
las* su en la
símbolo
separaciones* figura
es
se*
la ecuación 26.12. Un factor t" 26.4,
.
realicen* en* t y t
condiciones*
R de retenciónR mucho M se obtie-
en* las* que*
bajan los*
por la co
factores*de*retención*para*los*solutos*de*una*mezcla*oscilen*entre*1*y*10*
Como se muestra enalalapartir
figura 26.4, y eltMsoluto
tRque se obtie- columna
nen con facilidad
menor que unidad del
quiere cromatograma.
decir emerge El fac- 26C.1 Teoría
nentorcon facilidad
de la columna en un tiempo cercano al tiempo muer-
a partir del cromatograma. El fac- en térmi
cromatografí
de retención se calcula
to. Cuando el factor dearetención
partiresde del estas
orden decantidades
20 a
 ponentes de interés. bandas y cuáles
ciencia de la colu
Velocidades'de'migración'relaBvas:'el'factor'de'
26B.6 Si examina lo
ParaVelocidades
mostrar cómo de migración
se puede relativas:
obtener kA a partir de
el factor de selectividad selecBvidad'* este capítulo y e
un cromatograma, se sustituyen las ecuaciones de 26.4
elucióny se ve
El factor de selectividad a de una columna para los dos
26.5 enAlay Becuación 26.10:
•  El*factor'de'selec4vidad'a*de*una*columna*para*los*dos*solutos*A*y*B*se*
solutos se define como
nas o de error
define*como** muestra en el ap
KBL error normal pu
L
a# 1 (26.13)
#KA $ (26.11) a
incertidumbre
tR tM 1 % kA vidual es la sum
donde*K B*es*la*constante*de*distribución*para*la*especie*más*fuertemente*retenida*
donde KB es la constante de distribución para la es- incertidumbres,
cas B,*y*KApecie
*es*la*constante*para*la*especie*A*menos*retenida,*o*que*es*eluida*o*lavada*
Al más fuertemente
reordenar esta retenida
ecuación B, y se es la constante
KA tiene tables, cada una
con*más*rapidez.*De*acuerdo*con*esta*definición,*α*siempre*es*mayor*que*la*unidad.**
para la especie A menos retenida, o que es eluida o la- de ser positiva o
*
vada con más rapidez. De acuerdo con esta definición, forma caracterís
a siempre es mayor que lakunidad.
Al*susCtuir*la*ecuación**
t R ! tM gráfica se atribu
tener # (26.12)
Aluna ecuación que26.9permite tM a para
su vez
el so-determinar a al
* A
sustituir la ecuación y la análoga movimientos
a partir
luto B en dela un cromatograma
ecuación 26.13 se obtieneexperimental:
una relación en- medida que desc
tre el factor
Tenga de selectividad
en cuenta que elpara los dos que
tiempo solutos y susen laanálisis
pasa fase se supon
es-
factores de retención: 1tR 2 B ! tM gosta de modo
tacionaria, tR ! tM,ase#denomina algunas vecesfactor
Se**obCene* (26.15)
tiempo
limitante
1t
kB R A 2 ! tM
de retención ajustado a# y su símbolo es(26.14)
t"R. banda que eluye
En la sección 26D.2 kse A muestra cómo se utilizan
Como se muestra en la figura 26.4, t y t se obtie- losde la
los anchos
Parámetros fundamentales

Respuesta del detector

CH4 Octano No
identificado Nonano

Tiempo
Inyección
Tiempo de retención: Tiempo que
transcurre desde el momento de la
inyección de la muestra hasta la
aparición de la máxima concentración del
compuesto eluido
tr´ = tr - tm
la diferencia entre el tiempo de retención
y el tiempo muerto, representa la
interacción del soluto con la fase
estacionaria y tiene el nombre de tiempo
de retención corregido tr’
4. Parámetros fundamentales
describe las velocidades de migración de
los analitos en las columnas
Factor de retención (k)
k << 1: elución demasiado rápida
tr tm k~ 20-30: elución demasiado lenta
t´r
k “ensanchamiento de las bandas”
tm tm 2 < k < 10: elución ideal

relación entre los factores de retención de los dos picos de

Factor de selectividad ( α) interés, apareciendo en el numerador el factor de retención de la
especie más fuertemente retenida y en el denominador el de la
especie que eluye con más rapidez

kB α = 1: Los compuestos no están separados

 α > 1: Los máximos de los picos cromatográficos
kA están separados

Volumen de retención ( Vr)

es el volumen de fase móvil necesario para
eluir a un soluto determinado de la columna
Vr t r ur
ur : velocidad de flujo de la fase móvil
Teoría'cinéBca'de'la'cromatogra2a*
•  La* teoría' ciné4ca' de' la' cromatogra:a' explica* las*
formas*y*anchos*de*las*bandas*de*elución*en*términos*
cuanCtaCvos* con* base* en* un* mecanismo* de* avance*
aleatorio*para*la*migración*de*moléculas*a*través*de*la*
columna.*
•  El* ensanchamiento* de* una* zona* aumenta* a* medida*
que* desciende* por* la* columna* porque* ha* habido* más*
Cempo* para* que* haya* dispersión.* Entonces,* el* enT*
sanchamiento* de* la* zona* está* relacionado* de* manera*
directa*con*el*Cempo*de*residencia*en*la*columna*y*de*
manera* inversa* con* la* velocidad* de* flujo* de* la* fase*
móvil.**
 Teoría'cinéBca'de'la'cromatogra2a*
SKOOG_CAP_26_4tas 3/25/08 9:52 AM Page 769

26C Ensanchamiento de banda y eficiencia de la columna 769

•  Como* se* puede* ver* en* la* figura*

Es ilustrativo 26.5,*
considerar una solaalgunos*
molécula de so-
luto mientras pasa por miles de transferencias entre las
picos* cromatográficos* son*
fases estacionaria no*
y móvil ideales*
durante la elución. Ely*
tiem- Frente Cola

presentan*deformación'hacia'la'cola'o*hacia'el'
po de residencia en cualquiera de las fases es muy irre-
gular. La transferencia de una fase a otra requiere
frente.* En* el* primer* caso*
energía la* cola*
y la molécula del*
la debe pico,*
tomar que*
de los alrededores.
Por consiguiente, el tiempo de residencia en una fase
aparece* a* la* derecha*
dada aen*
vecesel* cromatograma,*
es momentáneo después de algunase*
trans-
ferencia y relativamente largo después de otra. Re-
alarga* y* el* frente*cuerde
se*queacorta*
el descenso bruscamente.*
por la columna ocurre sólo
mientras la molécula está en la fase móvil. Por tanto,

Señal del detector

Cuando* la* deformación* es*viajan
ciertas partículas hacia* el* gracias
con rapidez frente*a su in-

ocurre*lo*contrario.*Una*causa*común*de*estas*
clusión accidental en la fase móvil la mayor parte del
tiempo, mientras otras se retrasan a causa de que están
d ef o rma ci o n es* incorporadas
es* u n en a*la co n s t a n t e* d e*
fase estacionaria por un tiempo
mayor al promedio. El resultado de estos procesos
distribución*que*varía*con*la*concentración.*La*
aleatorios individuales es una dispersión simétrica de
velocidades alrededor del valor medio, lo cual repre-
asimetría*o*deformación*del*frente*también*se*
senta el comportamiento de la molécula de analito
promedio.
presenta* cuando* se* introduce*
El ensanchamiento de unademasiada*
zona aumenta a medi-
da que desciende por la columna porque ha habido
muestra* en* una* columna.*
más tiempo para Las* distorsiones*
que haya dispersión. Entonces,de*el en- Tiempo

este* Cpo* son* indeseables* porque* ocasionan*

sanchamiento de la zona está relacionado de manera
directa con el tiempo de residencia en la columna y de
FIGURA 26.5 Ilustración del frente y de la cola de los
picos cromatográficos.
separaciones* deficientes*
manera inversa y*
móvil.
a*velocidad
con la Cempos* de flujo dede*
la fase

elución*menos*reproducibles.*En*el*análisis*que*
Como se puede ver en la figura 26.5, algunos picos donde L es la longitud (por lo regular en centímetros)
cromatográficos son no ideales y presentan deforma-
sigue* se* supone* que* las*
ción hacia distorsiones*
la cola o hacia el frente. En el en*
primerel*
caso la
del relleno de la columna. La eficiencia de la columna
cromatográfica aumenta cuanto mayor es el número
cola del pico, que aparece a la derecha en el cromato-
frente*y*en*la*cola*son*mínimas.**
grama, se alarga y el frente se acorta bruscamente.
de platos N y cuanto menor es la altura H del plato. Se
han encontrado enormes diferencias en las eficiencias
Cuando la deformación es hacia el frente ocurre lo
debido a diferencias en el tipo de columna y en las fa-
contrario. Una causa común de estas deformaciones
ses móvil y estacionaria. Las eficiencias en términos
es una constante de distribución que varía con la con-
del número de platos varían desde pocos cientos a va-
centración. La asimetría o deformación del frente
 26C.2 A Descripción cuantitativa de la fuera simil
Descripción'cuanBtaBva'de'la'eficiencia'
eficiencia de la columna viera const
tos, distint
de'la'columna*
Dos términos afines se utilizan ampliamente como
medidas cuantitativas de la eficiencia de una columna platos teór
Dos*términos*afines*se*uClizan*ampliamente*como*medidas*cuanCtaCvas*de*
cromatográfica: 1) la altura de plato H y 2) el número tablecía el
la* eficiencia* de* una*
de platos columna*teórica
o cantidad cromatográfica:*
de platos,1)*
N.la'Los
altura'
dosde' plato' H' y*y2)*
están estaciona
el'
número'de'platos'o*can4dad'teórica'de'platos,*N.*Los*dos*están*relacionados*
relacionados por la ecuación se trataba
por*la*ecuación** pas de fase
L
N! (26.16)
H 6 A. J. P. Marti

donde* L* es* la* longitud* (por* lo* regular* en* cenjmetros)* del* relleno* de* la*
columna.*La*eficiencia*de*la*columna*cromatográfica*aumenta*cuanto*mayor*
es*el*número*de*platos*N*y*cuanto*menor*es*la*altura*H*del*plato.*El*origen*
de*los*términos*“altura*de*plato”*y*“canCdad*de*platos*teóricos”*proviene*de*
uno* de* los* * estudios* realizado* por* MarCn* y* Synge* en* que* trataron* a* una*
columna*cromatográfica*como*si*fuera*similar*a*una*columna*de*desClación*
que*estuviera*consCtuida*por*numerosas*capas*angostas,*o*platos,*disCntos*
pero*conCguos,*a*las*que*denominaron*platos'teóricos.*
*
 Descripción'cuanBtaBva'de'la'eficiencia'
de'la'columna*
•  La*teoría'del'plato'explica*de*manera*saCsfactoria*
la*forma*gaussiana*de*los*picos*cromatográficos*y*
su* velocidad* de* desplazamiento* por* la* columna.*
Pero* la* teoría* se* abandonó* en* favor* de* la* teoría'
de'la'velocidad,*debido*a*que*la*primera*fallaba*al*
intentar*jusCficar*el*ensanchamiento*de*los*picos*
de* una* manera* mecanicista.* No* obstante,* los*
términos* originales* para* la* eficiencia* se* han*
incorporado*a*la*teoría*de*velocidad.**
 gráfico y se prolongan
en movimiento constante. SKOOG_CAP_26_4tas 3/25/08 9:52 AM Page 770
Definición'de'altura'de'plato'* línea base del cromato
el área de este triángu
ición de altura de plato
Esta* definición* de* la* eficiencia* de* la* columna* se* ilustra*
SKOOG_CAP_26_4tas 3/25/08 9:52 AM Page 770

en* la* figura* ,* donde* se* muestra* una* columna* con* un*
jo el pico,
770 Capítulo 26 Introducción si éstecromatográf
a las separaciones es ga
o se muestra en la sección a1B.1 del Apéndice 1, apéndice 1 se indica qu
relleno* de* L* cm* de* longitud.* Encima* de* este* esquema*
chura de muestra*
(b)* se* una curva una*gaussiana
gráfica* que*está directamente
representa* la* 770 Capítulo 26 Introducción a las separaciones cromatográfica
gaussiano se encuentra
onada con su desviación estándar s o su varianza extremo
distribución*de*las*moléculas*a*lo*largo*de*la*columna*en* Perfil del analito en el
dido entre más o me
final del relleno
el* momento* en* que* el* pico* del* analito* alcanza* el*

Cantidad de moléculas
menudo se supone que las bandas cromatográfi-
extremo* final* del* relleno* (es* decir,* en* el* Cempo* de* b) Perfil del analito en el

enen una forma gaussiana, lo cual es conveniente extremo final del relleno

Señal del detectorCantidad de moléculas

(L # 1s) (L " 1s)
retención).*La*curva*es*gaussiana*y*la*ubicación*de*L'︎ +1σ*
definir la eficiencia de una columna en términos
y*L7︎*1σ*se*indica*mediante*líneas*verCcales*disconCnuas.* b)
(L # 1s) (L " 1s) 2
Observe*que*las*unidades*de*L'son*cenjmetros*y*las*de* H = s
––– tR
varianza por unidad de longitud de la
σ2* son* cenjmetros* cuadrados;* entonces,* H' representa*
columna. L
s
H = –––
2

cir,una*distancia*lineal*en*cenjmetros*(ecuación*).**
la altura de plato H viene dada por
L L
Distancia migrada
L
* a) tDistancia
Relleno
M migrada
2
*
s a) Relleno
L
H! (26.17)Entrada de la muestra L Detector
* L Entrada de la muestra Detector
FIGURA 26.6 Definición de la altura de plato H ! s 2/L. 2
FIGURA 26.6 Definición de la altura de plato H ! s /L.
De*hecho,*puede*pensarse*en*la*altura*de*plato*como*la* En a)En la longitud de la columna es la distancia desde el
definición de la eficiencia de la columna
longitud* de* columna* que* conCene* una* fracción* de* se ilustra
punto de
a) la longitud de la columna es la distancia desde el
entrada
punto de entrada 0 dedela lamuestra hasta el detector. En b)
muestra hasta el detector. En b)
se muestra la distribución
la distribucióngaussiana
gaussiana de las moléculas
moléculas
figura 26.6a,
analito* dondeentre*
comprendida* se muestra una columna
L' y* L' T* σ.* Debido* a* que* el* decon se muestra
lade
muestra.
la muestra.
de las

área*de
lleno bajo*Luna*cm curva*
denormal* de* error*
longitud. limitada* por*
Encima de una*
este es- 0
desviación* estándar* (︎±1σ)* es* de* alrededor* de* 68%* del* La La teoría
teoría del del plato
plato explicade
explica demanera
manera satisfactoria la la
satisfactoria
Tie
a (figura
área* total,*26.6b)
la* altura*se
de*muestra unase*gráfica
plato,* tal* como* queforma
ha* definido,* re-
forma gaussiana de los picos cromatográficos
gaussiana de los picos cromatográficos y su ve- y su ve-
locidad de desplazamiento FIGURApor26.7
locidad de desplazamiento por la columna. Pero la
Determina
la columna. Pero la
ntaconCene*34%*del*analito.**
la distribución de las moléculas a lo largo de
teoría se abandonó en favor de la teoría de la velocidad,
teoría se abandonó en favor de la teoría2de la velocidad,
debido a que la primera fallaba al intentar justificar el t
 puntos de inflexión a los dos lados del pico cromato-
tado de equilibrio nunca se puede alcanzar con la fase
de error limitada por una desviación estándar ($1s) gráfico y se prolongan para formar un triángulo con la
aluación
uación experimentalde
experimental deHHyyNN
móvil en movimiento constante. línea base del cromatograma. Se puede demostrar que
es de alrededor de 68% del área total, la altura de pla-
La*evaluación*experimental*de*H*y*N**
el área de este triángulo es casi 96% del área total ba-
Definición de altura de plato
ura
rato,26.726.7
tal como ilustra
ilustra
se haun un cromatograma
Comocromatograma
definido, característico
contiene 34% característico
se muestra en la sección a1B.1
del analito.
del Apéndice 1,
jo el pico, si éste es gaussiano. En la sección a1B.1 del
apéndice 1 se indica que casi 96% del área bajo un pico
tiempo
iempo
La evaluaciónenenlalaabscisa.
abscisa.
experimental La
relacionada
La varianza
convarianza
de H y N estándar
su desviación
delspico
del pico
la anchura de una curva gaussiana está directamente
delso-
del
o su varianza
so- gaussiano se encuentra dentro del intervalo compren-
dido entre más o menos dos desviaciones estándar
que sesefigura
puede obtener porun un procedimiento grá-
2

ueLa puede 26.7obtener

ilustra un por
cas tienen cromatograma
una forma procedimiento
gaussiana, cual es convenientegrá-
s . A menudo se supone que las bandas cromatográfi-
característico
lo
ncillo,
con el tiene
ncillo, tieneunidades
tiempo enunidades
lapara
abscisa. de
La
de
definir la
segundos
varianza
segundos
eficiencia de unadel picoal
al
columna
cuadrado
del
en so-
cuadrado
términos
de la varianza por unidad de longitud de la columna.
t R

luto, que se puede Es obtener pordeun procedimiento

2H2 viene dada por grá-
lo
o ficoregular,
regular, se
sencillo,setiene
designa
designa como
como
decir, la altura
t para
plato
t para distinguirlot
distinguirlo

Señal del detector

unidades de segundos 2
s al cuadrado M

alay,cual
cual
por lo tiene
tiene unidades
unidades
regular, se designade de
como centímetros
centímetros
H 2!
t paraL alalcuadra-
distinguirlo cuadra-
(26.17)

2
as dos
de
s dos ,desviaciones
la cual tieneEsta
s desviaciones estándar
unidades
estándar
definición de tt yy
de lacentímetros
eficiencia des
s sese relacionan
al cuadra-
relacionan
la columna se ilustra
en la figura 26.6a, donde se muestra una columna con
0 W

do. Las dos desviaciones estándar t y s se relacionan

nte
nte mediante
un relleno de L cm de longitud. Encima de este es-
quema (figura 26.6b) se muestra una gráfica que re-
0
Tiempo
FIGURA 26.7 Determinación de la cantidad de platos
presenta la distribución de las moléculas a lo largo de
la columna s
ss t 2

(26.18)
R
en el momento en que el pico del analito N ! 16 a b .
tt!! L/tR
t ! (26.18)(26.18) W
L/tRR
L/t
donde L/tR es la velocidad lineal promedio n del solu-
L/t
L/t Reses lalavelocidad
todonde*L/t
Ren
velocidad
centímetros lineal
lineal
por segundo promedio
promedio
(ecuación del solu-
26.4).nn del solu-
R*es*la*velocidad*lineal*promedio**********del*soluto*en*cenjmetros*por*segundo**
centímetros
La figura por
entímetros porilustra
26.7 segundo (ecuación
una manera
segundo 26.4).
sencilla26.4).
(ecuación de deter-
minar aproximadamente t y s a partir de un croma-
La*figura*26.7*ilustra*una*manera*sencilla*de*determinar*aproximadamente*τ*y*σ*a*parCr*de*
figura
figura
tograma
26.7
26.7 ilustrauna
ilustra
experimental.
una
Se
manera
manera
trazan las
sencillaen
sencilla
tangentes
delosdeter-
de deter-
un*cromatograma*experimental.*Se*trazan*las*tangentes*en*los*puntos*de*inflexión*a*los*dos*
aproximadamente
aproximadamente
puntos de inflexión a los ysslados
tt ydos aa partir
partir decromato-
de
del pico un croma-
un croma-
lados*del*pico*cromatográfico*y*se*prolongan*para*formar*un*triángulo*con*la*línea*base*del*
ma experimental.
a gráfico y se prolonganSe
experimental. Separatrazan
formar las
trazan tangentes
un triángulo
las tangentes con laen los
en los
cromatograma.*Se*puede*demostrar*que*el*área*de*este*triángulo*es*casi*96%*del*área*total*
línea base del cromatograma. Se puede demostrar que
sdede inflexión aalos
losdos
dos
bajo*el*pico,*si*éste*es*gaussiano**
inflexión
el área de este triángulo
lados
lados
es casi 96% del
del pico
pico
del área
cromato-
cromato-
total ba-
*
oyyjosese prolongan
elprolongan
pico, para
si éste espara formar
formar
gaussiano. un
En laun triángulo
triángulo
sección a1B.1 del con la
con la
 ción hacia la cola o hacia 26Cdonde frente. En el primer
elEnsanchamiento decaso la y eficiencia de
banda
hay condiciones de equilibrio.cromatográfi
De hec
(!2s) de colasu delmáximo.
pico, que aparece
Entonces, a la derecha
las en el cromato-
intersecciones que TABL
26C Ensanchamiento de platos Ncy
grama, 26C Ensanchamiento tado de se equilibrio
de banda nunca se puededealcanzar
y eficiencia la de ban
colum
La*evaluación*experimental*de*H*y*N**
se alarga y el frente acorta bruscamente. de la
se indican en la figura 26.7estienen
Cuando la deformaciónmóvil
lugar a alrededor
en movimiento
hacia el frente ocurre constante.
lo
han encontr
de máscontrario.
o menosUna doscausa
desviaciones
común de estándar
estas (!2t) res- debido a dif
deformaciones
!2s) de su máximo. Entonces, las intersecciones TABLA
que de distribución 26.2deVariables que influyen
ses móvil en la y
(!2s) de su máximo.pecto Entonces,
alesmáximo
una constante yW
las " de4t,Definición
intersecciones donde
laocolumna.
W
que
que es altura
la
varía con de
magnitud
TABLA plato
la con-26.2 de Variables
del número Varqu
indican
Se* en la
conoce* figura
máximo. Entonces, lasse que* 26.7
casi* tienen
96%*
intersecciones lugar
del* área*
quea alrededor
bajo* un*
centración. pico*
TABLA La gaussiano*
26.2
asimetría Variables
Como se*
se que
encuentra*
muestra
deformación influyen
en
del
de la dentro*
sección
frente
la en
columna. la
del*
a1B.1 eficienc
del Ap
indican en lalafigura
base 26.7
del triángulo.
tienen lugar Al asustituir
alrededor esta relación en la rios cientos d
e más ointervalo*
menos dos desviaciones estándar (!2t)
también res-
se presenta cuando
la se
anchura introduce
de una demasiada
curva gaussiana está dire
la figura 26.7 comprendido*
tienendelugarmás oentre*
amenos más*
dos o*
ecuación
alrededor menos*
26.18
desviaciones
muestra
deydos*
la
en una
desviaciones*
columna.
reordenar
estándar
columna. los
(!2t) estándar*
términos
res-
Las distorsiones
relacionada con
se
su
(* ±2σ)* de*que
tiene: su*oscilan
este tipo estándar sVelo
dedesviación o su
ecto al máximo.*
máximo yEntonces,*
W " 4t, donde
pectolas*
al W es la
máximo y Wmagnitud
intersecciones* " que*
4t, se*
donde deindican*
W es la en* 2 la* figura*
magnitud
Variable de 26.7* Cenen* lugar* sima de cent
a* Símb
os dos desviaciones estándar (!2t) res- son indeseables porque ocasionan
s LW separaciones
. A menudo se supone defi-
Variable
que las bandas Coe
crom
El origen
base del triángulo. Alla sustituir esta relación
alrededor*de*más*o*menos*dos*desviaciones*estándar*(︎
base del triángulo. Al
cientes eny alatiempos
sustituir estasrelación ±
de"cas 2τ)*respecto*al*máximo*y*W'︎
elución en la
menos reproducibles.
tienen una forma gaussiana, lodad (26.19) cual* móv
mo y W " 4t, donde W es la magnitud de 4t dees co
plato
uación4τ,*26.18 y reordenar
donde* W' es* la* los términos
ecuación 26.18de*
magnitud* la*
En
se base* el
tiene:del*
y reordenar Variable
análisis que
los términos
triángulo.*
sigue se
Al*
para
supone
seVelocidad
tiene: R que
definirlineal
susCtuir*
las
la esta*
distorsiones
derelación*
eficiencia la fase
Velocidad
de una Símbolo
móvil
en* rosla*
lineal
columna de la Coe
estudios fauh
en
iángulo. Al sustituir esta relación La ensustitución
la en el frentedey en esta
la cola son mínimas.
ecuación
de la varianza
Coeficiente por de en
s por laCoeficiente
unidad
difusión ecuación
delalongitud
en deque
fase deesta
trataron
difusión laDe
ecuación*26.18*y*reordenar*los*términos*se*Cene:**
LW LW
8 y reordenar los términos s " se tiene:26.17 da: s "(26.19)
26C.2 Velocidadmóvil*
A Descripción lineal
Es decir,
cuantitativadelala
(26.19) fase
altura
de la móvil
de móvil*
plato H viene udada
fuera cm
simila
por
Fac
* 4tR 4t
eficiencia R de la columna Coeficiente deviera constite
difusión
Coeficiente de
Coeficiente
LW difusión
2 de en la
difusión fase en la2 faseD ** Diá
cm D
LW La*susCtución*de*esta*ecuación*por*σ*en*la*ecuación*da*
La sustitución(26.19)
s
estacionaria* tos, M distinto
por sdeen esta ecuaciónmóvil* por sH en" la ecuación
Dos términos afines se utilizan ampliamente como
H (26.20)
! Esp
a sustitucións "de esta ecuación la medidas
ecuación estacionaria*
2 L platos teóric
4tR 26.17 da: cuantitativas de 16t
la eficiencia
R de una columna
Factor de retención (ecu la fa
.17 da: Coeficiente
cromatográfica: 1) la Factor
alturade
Esta de de
difusión
plato retención
definición H y en
2)
de la
el
la (ecuación
fase
número
eficiencia de 26.12)
tablecía
D
la columna
S
el
cm k
eq
Paradeobtener 2 N, se sustituye
LWoestacionaria* lo anterior Diámetro
en están
la ecua- las partícul
y estacionar
n de esta ecuación por sLW en2 la ecuación H "platos cantidad Diámetro
teórica
en la defigura
platos,
(26.20) de N.las
26.6a,Lospartículas
dos
donde
Espesor
delrevestimien
se muestra
del
relleno
una*Au colud
ción 26.16 y se 2reordena para obtener se trataba e
H" 16tRFactor de Espesor
relacionados
(26.20) por la ecuación
un relleno del
retención (ecuación de L cm
revestimiento de longitud.
26.12)
la fase líquido Encimaen
k de fase
estacionaria d
sinm
**En d
pas
16tR2 quema (figura 26.6b) se muestra una gráfic
2 Para obtener N, se sustituye Diámetro lo anteriorla deen fasela
las estacionaria
2
tLR ecua-
partículas del relleno d
son
cm
d
Para Para*obtener*N,*se*susCtuye*lo*anterior*en*la*ecuación*******************y*se*reordena*para*
LW N " 16 a H b la distribución (26.21)
Npresenta
! (26.16)
de lasalmoléculas
*Aumenta p
incrementarse DaMlola
s
obtener
H" N, se sustituye
ción lo
26.16 yanterior
se reordena
(26.20) en la
para ecua-
obtener W 6 A. J. P. Martin y

obtener* 2 Espesor del la revestimiento

columna
*Aumenta al incrementarselíquido
en el momento en
en que
la temperatura
**En los líquidos, dflos
el valores
pico cmd
y dism
16tR
ón 26.16 y se reordena para obtener tRla fase estacionaria
2 son del orden de 10 #5 cm 2 s #
Por Ntanto,
" 16
Na
se puede
b
calcular
**En losa partir
líquidos,de
(26.21) losdos medidas
valores
DM2 son
DM para moléculas
!10 5 veces más26C
grand
er N, se sustituye lo anterior
tR en2
la de
ecua-
tiempo, tRWy W; para calcularson del ordenH,5 de 10 cm se
#5
también s tiene
#1
; en el caso de los g
en la
N " 16 a b (26.21)*Aumenta alDincrementarse
M son !10 veces la temperatura
más grandes. y disminuir la v
e reordena para obtener que conocer la longitud del
W N se puede calcular a partir de dos medidas
Por tanto, relleno de la columna
26C.3
L.
Variables ciné
El en
Tome en cuenta **En los estos
que líquidos, los valores
cálculos DMson
sólo paraaproxi-
moléculas pequeñas
de tiempo, t y W; para calcular H, también se tiene
or tanto, N se puede
tR calcular
2 R
a partir de dos medidas son del orden de 10 #5 cm 2 s #1; enen la eficiencia
el caso de
los la
de los gases,eficie v
que conocer la mados
longitudy que
del se supone
relleno de 26C.3
que
la 5columna Variables
las formas L. de loscinéticas
picos son que infl
N" tR 16 a para
b calcular H, (26.21) DM son !10 veces más grandes.El ensanchamiento cidad
e tiempo, y W;W Tome en cuenta también se tiene
gaussianas.
que estos cálculos sólo enson eficiencia de la columna de b
la aproxi-
ue conocer la longitud mados
del relleno desupone
laOtro
columna L.para de eficiencia de la column ocurr
y que se método
que las formas evaluar
los de
picos manera
son
El ensanchamiento aproximada
de banda refleja u
e puede calcular a partir de dos medidas cidad de los procesos anch
 26C Ensanchamiento de banda y eficiencia de la columna 771

Variables'cinéBcas'que'influyen'en'la'eficiencia'de'la'columna'*
(!2s) de su máximo. Entonces, las intersecciones que TABLA 26.2 Variables que influyen en la eficiencia
se indican en la figura 26.7 tienen lugar a alrededor de la columna.
de más o menos dos desviaciones estándar (!2t) res-
•  El* ensanchamiento* de* banda*
pecto al máximo y W " 4t, donde W es la magnitud de
Unidades

r e fl e j a* u n a* p é r d i d a* d e* l a*
la base del triángulo. Al sustituir esta relación en la
Variable Símbolo habituales

eficiencia* de* la* columna.* Cuanto*

ecuación 26.18 y reordenar los términos se tiene: Velocidad lineal de la fase móvil u cm s #1

más* lenta* es*s "la*LW velocidad* de* los*

(26.19)
Coeficiente de difusión en la fase
móvil*
DM** cm 2 s #1

procesos* de* transferencia* de*

4tR Coeficiente de difusión en la fase DS cm 2 s #1

masa* que* ocurren* mientras* un*

La sustitución de esta ecuación por s en la ecuación
26.17 da:
estacionaria*
Factor de retención (ecuación 26.12) k sin unidades
soluto*migra*por*la*columna,*más*
LW 2 Diámetro de las partículas del relleno dp cm
ancha*es*la*banda*en*salida*de*la*
H "
16t2
R
(26.20) Espesor del revestimiento líquido en
la fase estacionaria
df cm

columna.*Algunas*de*las*variables*
Para obtener N, se sustituye lo anterior en la ecua-
que*
ción 26.16afectan*
y se reordena las* velocidades* de*
para obtener
*Aumenta al incrementarse la temperatura y disminuir la viscosidad.
**En los líquidos, los valores DM para moléculas pequeñas y medianas
transferencia* N " 16 a b
tde* masa* son*
R
2
(26.21)
son del orden de 10 #5 cm 2 s #1; en el caso de los gases, los valores,
DM son !10 5 veces más grandes.
suscepCbles* de* ser* W controladas* y*
se*tanto,pueden*
Por aprovechar*
N se puede calcular para*
a partir de dos medidas 26C.3 Variables cinéticas que influyen
de tiempo, t y W; para calcular H, también se tiene
mejorar*
que
R
las* separaciones.*
conocer la longitud En*L. la*
del relleno de la columna
en la eficiencia de la columna

tabla*
Tome se* que
en cuenta da*estosuna*
cálculoslista*
sólo sonde* las*
aproxi-
El ensanchamiento de banda refleja una pérdida de la
eficiencia de la columna. Cuanto más lenta es la velo-
variables*más*importantes.**
mados y que se supone que las formas de los picos son
cidad de los procesos de transferencia de masa que
gaussianas.
ocurren mientras un soluto migra por la columna, más
Otro método para evaluar de manera aproximada
ancha es la banda en salida de la columna. Algunas de
N, que algunos investigadores creen más confiable, es las variables que afectan las velocidades de transferen-
determinar W1/2, la anchura del pico a la mitad de su al- cia de masa son susceptibles de ser controladas y se
tura máxima. El número de platos es entonces
 Influencia(de(la(tasa(de(flujo(de(la(fase(móvil(* 772 Capítulo 26 Introducción a las separaciones cromatográficas

0.006 eficiencia d
•  El* grado* de* ensanchamiento* de* la* banda* depende*
0.005 del* Cempo* que* la* fase* móvil*con las col
si se comp
está*en*contacto*con*la*fase*estacionaria,*lo*cual*a*su*vez*depende*de*la*tasa*de*grafía de l
flujo* de* la* fase* móvil.* Por* esta* razón,* los*0.004
estudios* sobre* la* eficiencia* se* han*paraciones
realizado*casi*siempre*determinando*H'en*función*de*la*velocidad*de*la*fase*móvil.*

H, cm
0.003 ambas cua
Las*gráficas*para*CL*y*para*CG*que*se*muestran*en*la*figura*26.8*son*caracterísCcas*
0.002
simultánea

de* los* datos* que* se* obCenen* mediante* estos* estudios.* Aunque* ambos* muestran*Teoría del
SKOOG_CAP_26_4tas 3/25/08 9:52 AM Page 772

un* mínimo* en* H,* o* un* máximo* en* eficiencia* 0.001 a* tasas* de* flujo* lineales* bajas,* el*En los últi

mínimo*para*CL*se*presenta*casi*siempre*a*tasas*de*flujo*muy*por*debajo*de*las*de*
0
fuerzo tant
nar relacio
CG.*A*menudo,*estas*tasas*de*flujo*son*tan*bajas*que*no*se*observa*la*H'mínima*
772 Capítulo 26 Introducción a las separaciones cromatográficas 0.0 0.2 0.4
u, cm/s
0.6 0.8 1.0
de las vari
para*CL*en*condiciones*normales*de*operación.** a) Cromatografía de líquidos tabla 26.2 s
columnas.
0.006 eficiencia0.12
de la columna son por lo regular superiores más o men
con las columnas de cromatografía de gases. Por tanto, matemátic
0.005 si se compara
0.10 la cromatografía de gases y la cromato-
de estas ec
grafía de líquidos, la primera es capaz de realizar se- explicar la
0.004 0.08
paraciones más rápidas y con mayor eficacia, aunque jos que cau
H, cm

ambas cualidades no se den necesariamente en forma

H, cm
0.003 0.06 to, una efi
simultánea. algunas de
0.002 0.04
Teoría del ensanchamiento de bandas de gran ut
0.001 En los últimos
0.02 cuarenta años se dedicó un enorme es- rendimien
fuerzo tanto experimental como teórico para perfeccio- La efici
0 0
nar relaciones cuantitativas que describan los efectos puede con
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0 20 40 60 80 100
u, cm/s de las variables experimentales u, que se enlistan en la presión
cm/s
a) Cromatografía de líquidos tabla 26.2 sobre las alturasb)de plato de diversos
Cromatografía de gases tipos de
columnas. Tal vez se han propuesto y aplicado, con
Efecto*de*la*tasa*de*flujo*de*la*fase*móvil*sobre*la*altura*de*plato*para*a)*cromatograYa*de*líquidos*y*
0.12 más oFIGURA 26.8 Efecto
menos acierto, de la tasa
una docena de flujo
o más de la fase móvil
de expresiones
sobre la altura de plato para a) cromatografía de líquidos donde H e
0.10
matemáticas para calcular la altura de plato. Ninguna
b)*cromatograYa*de*gases.*Observe*las*escalas*muy*diferentes*de*la*tasa*de*flujo*y*de*la*altura*de*
y b) cromatografía de gases. Observe las escalas muy velocidad
de estas ecuaciones es por completo satisfactoria para
plato.*0.08 diferentes de la tasa de flujo y de la altura de
explicar las interacciones y los efectos físicos comple-
plato. segundo. L
ensanchamiento de banda cromatográfico, que se ex- los efectos
 explicar las interacciones y los efectos físicos comple-
jos que causan el ensanchamiento de la zona y, por tan-

Teoría(del(ensanchamiento(de(bandas(*
to, una eficiencia menor de la columna. Sin embargo,
algunas de las ecuaciones, aunque imperfectas, fueron
de gran utilidad para indicar la forma de mejorar el
rendimiento de la columna.
•  La eficiencia de las columnas cromatográficas se
La*eficiencia*de*las*columnas*cromatográficas*se*puede*
puede conocer de manera aproximada mediante la ex-
conocer*de*manera*aproximada*mediante*la*expresión**
80 100
presión
B
H ! A " " CSu " CMu (26.23)
u
fase móvil
de líquidos donde H es la altura de plato en centímetros y u es la
alas muy velocidad lineal de la fase móvil en centímetros por
donde*H*es*la*altura*de*plato*en*cenjmetros*y*u*es*la*velocidad*lineal*de*la*fase*móvil*en*
plato.cenjmetros* por* segundo.*La
segundo. La*cantidad
canCdad* A*
Aes*
esun*
uncoeficiente*
coeficienteque*
que describe*
describelos* efectos* de* la*
o, quetrayectoria*múlCple*(difusión*en*remolino),*B*es*el*coeficiente*de*difusión*longitudinal*y*C
se ex- los efectos de la trayectoria múltiple (difusión en remo- S*
y* CM* son* los* coeficientes*
lino), comode*
setransferencia*
analiza másde* masa* para*
adelante, B eslas*elfases* estacionaria* y* móvil,*
coeficiente
d el perfil de
respecCvamente*
denomina a de difusión longitudinal y CS y CM son los coeficien-
uien planteó tes de transferencia de masa para las fases estacionaria y
móvil, respectivamente. La ecuación 26.23 equivale a la
as de flujo de bien conocida ecuación de van Deemter, que formu-
vamente me- laron ingenieros químicos holandeses en los años cin-
afía de gases. cuenta y que, a menudo, se utiliza para expresar la
 Término'de'trayectoria'múlBple'A.'*
El* ensanchamiento* de* una* zona* en* la* fase* móvil* se* debe* en* parte* a* la*
mulCtud* de* caminos* por* los* cuales* las* moléculas* o* los* iones* pueden*
desplazarse* por* la* columna* rellena.* Como* se* muestra* en* la* figura* en*
adelante,*la*longitud*de*estos*caminos*puede*diferir*de*manera*importante;*
por* consiguiente,* el* Cempo* que* residen* en* la* columna* las* moléculas* de* la*
misma* especie* también* es* variable.* Las* moléculas* de* soluto* alcanzan* el*
extremo*de*la*columna*durante*un*intervalo*de*Cempo,*lo*cual*ocasiona*un*
ensanchamiento* de* banda.* Este* efecto* de* trayectorias* múlCples,* que* se*
denomina* a* veces* difusión' en' remolino,* sería* independiente* de* la* velocidad*
del*solvente*si*no*fuera*compensado*en*parte*por*la*difusión*ordinaria,*lo*cual*
resulta*en*moléculas*que*son*transferidas*desde*una*corriente*que*sigue*una*
trayectoria*hasta*una*corriente*que*sigue*otra.*Si*la*velocidad*de*flujo*es*muy*
baja,*Cene*lugar*un*gran*número*de*estas*transferencias,*y*cada*molécula*en*
su* desplazamiento* descendente* por* la* columna* prueba* numerosos* caminos*
de*flujo*y*gasta*en*cada*uno*un*Cempo*breve.*Por*tanto,*la*velocidad*a*la*que*
cada* molécula* desciende* por* la* columna* Cende* a* aproximarse* a* la* media.*
Entonces,*a*velocidades*bajas*de*la*fase*móvil,*las*moléculas*no*se*dispersan*
de*manera*apreciable*por*el*efecto*de*las*trayectorias*múlCples.**
*
 ariable. Las
de la colum- porcional a la diferencia de concentración entre las
regiones y al coeficiente de difusión DM de las especies.
Término'de'trayectoria'múlBple'A.'*
ocasiona un
trayectorias Este último, que es una medida de la movilidad de una
sustancia en un medio, es una constante para una es-
ón en remo-
el solvente si Dirección
del flujo
fusión ordi-
transferidas
ctoria hasta
A 1 2
d de flujo es
stas transfe-
ento descen-
caminos de
e. Por tanto,
ende por la
Entonces, a
éculas no se
fecto de las B
velocidades
FIGURA 26.9 Trayectorias características de dos
tiempo sufi- moléculas durante la elución. Obsérvese que la distancia
ecuación de van
que recorre la molécula 2 es mayor que la recorrida por la
Microsoft ® Excel molécula 1. Por tanto, la molécula 2 llegará a B después
4. que la molécula 1.
 Término'de'trayectoria'múlBple'A.'*
•  Sin* embargo,* con* velocidades* moderadas* o* elevadas,* no* se* dispone* de* Cempo*
suficiente*para*que*se*produzca*el*promedio*por*difusión,*y*por*ello*se*observa*un*
ensanchamiento*de*banda*debido*a*las*diferentes*longitudes*de*los*caminos.*Con*
velocidades* suficientemente* altas,* el* efecto* de* la* difusión* en* remolino* se* vuelve*
independiente*de*la*tasa*de*flujo.**
•  Además* del* efecto* de* la* difusión* en* remolino* está* otro* que* surge* de* los*
estancamientos* de* fase* móvil* en* la* cavidades* de* la* fase* estacionaria.* Por*
consiguiente,* cuando* un* sólido* funciona* como* fase* estacionaria,* sus* poros* se*
llenan*con*volúmenes*está4cos'de*fase*móvil.*Las*moléculas*del*soluto*Cenen*que*
difundirse* entonces* a* través* de* estos* estancos* antes* de* que* la* transferencia*
ocurra*entre*la*fase*móvil*que'se'desplaza'y*la*fase*estacionaria.*Esta*situación*se*
aplica* no* sólo* a* fases* sólidas* estacionarias,* sino* también* a* las* fases* líT* quidas*
estacionarias*inmovilizadas*en*sólidos*porosos*porque*el*líquido*inmóvil*no*suele*
llenar*por*completo*los*poros.**
•  La*presencia*de*estancos*de*fase*móvil*hace*que*los*procesos*de*intercambio*sean*
lentos* y* produce* una* contribución* a* la* altura* de* plato* que* es* directamente*
proporcional* a* la* velocidad* de* la* fase* móvil* e* inversamente* proporcional* al*
coeficiente*de*difusión*del*soluto*en*la*fase*móvil.*Un*incremento*en*el*volumen*
interno*acompaña*entonces*a*los*aumentos*en*las*dimensiones*de*las*parjculas.**
 El'término'de'difusión'longitudinal'B/u.'*
•  La*difusión*es*un*proceso*en*el*cual*las*especies*migran*desde*una*zona*de*
un*medio*con*mayor*concentración*a*una*región*más*diluida.*La*velocidad*
de* migración* es* proporcional* a* la* diferencia* de* concentración* entre* las*
regiones*y*al*coeficiente'de'difusión'DM*de*las*especies.*Este*úlCmo,*que*
es* una* medida* de* la* movilidad* de* una* sustancia* en* un* medio,* es* una*
constante*para*una*especie*dada*igual*a*la*velocidad*de*migración*en*un*
gradiente*de*concentración*unitario.**
•  En*cromatograYa,*la*difusión*longitudinal*da*como*resultado*la*migración*
de* un* soluto* desde* el* centro* concentrado* de* una* banda* hacia* regiones*
más*diluidas*en*cualquiera*de*los*dos*lados,*es*decir,*en*dirección*del*flujo*
o* en* senCdo* contrario.* La* difusión* longitudinal* es* una* causa* común* del*
ensanchamiento* de* banda* en* la* cromatograYa* de* gases* porque* las*
moléculas* de* gas* se* difunden* a* velocidades* relaCvamente* altas.* El*
fenómeno*Cene*poca*importancia*en*la*cromatograYa*de*líquidos*porque*
las*velocidades*de*difusión*son*mucho*menores.*La*magnitud*del*término*
B' en* la* ecuación* anterior* está* determinada* en* gran* medida* por* el*
coeficiente*de*difusión*DM*del*analito*en*la*fase*móvil,*y*es*directamente*
proporcional*a*esta*constante.**
tención y selectividad (sección 26B).

6D.1 Resolución de la columna Resolución'de'la'columna'*

a resolución Rs de una columna señala qué tan se-
radas •  La*resolución'Rs*de*una*columna*señala*qué*tan*separadas*están*
están dos bandas en relación con sus anchos.
dos*bandas*en*relación*con*sus*anchos.*La*resolución*proporciona*
a resolución proporciona una medida cuantitativa
una*medida*cuanCtaCva*de*la*capacidad*de*la*columna*para*
la capacidad de la columna para separar dos ana-
separar*dos*analitos.*La*importancia*de*este*término*se*ilustra*en*
os. La importancia
SKOOG_CAP_26_4tas 3/25/08 9:52 AM Page 776
de este término se ilustra en la
ura 26.12,la*figura*,*que*está*formada*por*cromatogramas*de*las*especies*A*
que está formada por cromatogramas de
s especiesy*B*en*tres*columnas*con*diferentes*poderes*de*resolución.*La*
A y B en tres columnas con diferentes
776 Capítulo 26 Introducción a las separaciones cromatográficas

resolución*de*cada*columna*se*define*como**
deres de resolución. La resolución de cada columna
define como A B
Rs = 0.75

¢Z 2¢Z
Rs ! ! 0

WA WB WA # WB SKOOG_CAP_26_4tas 3/25/08 9:52 AM Page 776

A B
#
2 2

Señal del detector

Rs = 1.0
FIGURA 26.12 Separación a tres valores de 0
776
2 3 1tR 2 B " 1tR 2 Ase 4han ajustado para que sean
resolución distintos: R ! 2≤Z/(W # W ). Las alturas Capítulo 26 Introducción a las separaciones cromatográficas
s A B
(tR)B
! de los picos
(26.24)
aproximadamente iguales en todos los casos.
(tR)A ∆Z Rs = 1.5
WA # WB
tM A B
nde todos los términos del segundo miembro se de-
en endonde*
la figura.
todos* los* términos* del* segundo*
0
WA/2
WA
WB/2
WB
0

miembro*se*definen*en*la*figura.* 0
Tiempo, min
Clase interactiva: aprenda más acerca de la

Señal del detector

FIGURA 26.12 Separación a tres valores de
resolución de las columnas.
Resulta evidente a partir de la figura 26.12 que una resolución
Se despejadistintos: Rs ! 2≤Z/(W
W de la ecuación 26.21 ). Las alturas
WBtérminos
A #en de (tR)B
0

resolución de 1.5 permite una separación esencialmen- de

y Nlosy picos
luegosesehan ajustado
sustituye lapara que sean
expresión resultante en la
aproximadamente iguales en todos los casos.
te completa de A y B, y que no es así con una resolu- ecuación anterior para obtener
 Resolución'de'la'columna'*
•  Resulta*evidente*a*parCr*de*la*figura**que*una*
resolución*de*1.5*permite*una*separación*esencialmenT*
te*completa*de*A*y*B,*y*que*no*es*así*con*una*resoluT*
ción*de*0.75.*Con*una*resolución*de*1.0,*la*zona*de*A*
conCene*alrededor*de*4%*de*B,*y*la*zona*de*B*conT*
Cene*una*canCdad*similar*de*A.*Con*una*resolución*de*
1.5,*el*traslape*es*del*orden*de*0.3%.*Para*una*fase*esT*
tacionaria*dada,*la*resolución*puede*mejorar*si*se*alarT*
ga*la*columna,*lo*que*aumenta*el*número*de*platos.*
Sin*embargo,*la*adición*de*platos*teóricos*aumenta*el*
Cempo*que*se*requiere*para*separar*los*componentes.**
KOOG_CAP_26_4tas 3/25/08 9:52 AM Page 777
Influencia'de'los'factores'de'retención'y'
selecBvidad'en'la'resolución'*
26D Me
•  Es* conveniente* desarrollar* una* ecuación* matemáCca*
que* relacione* la* resolución* de* una* columna* con* los*
factores* de*
solutos retención*
cuyas constanteskde
A' y* kB' de* dos* solutos,* el* factor*
distribución son tan simi-
EJEMPLO
de* AB* selecCvidad* α,* y* el* número* de* platos* N' que*
lares que hacen difícil separarlas. Por consiguiente,
cuando KA ! KB, se deduce a partir de la ecuación 26.9 Las sustancia
forman*la*columna.*Se*supondrá * que*se*está*tratando*
que kA ! kB ! k y a partir de la ecuación 26.13, a S 1. 16.40 y de 17
con*dos*solutos*A*y*B*cuyos*Cempos*de*retención*son*
Con estas aproximaciones, las ecuaciones 26.25 y 26.26 lumna de 30.
suficientemente*próximos*como*para*establecer*que**
se reducen a por la colum
(en la base) p
1N k tivamente. C
Rs ! 1a " 12 a b (26.27)
4 1#k número de p
2 2
1 1 # k de plato; d)
N ! 16R2s a b a b (26.28)
a"1 k conseguir un
rio para que
donde k esdonde*k*es*el*promedio*de*k
el promedio de kA y kB. y*k . un valor de R
A* B * para obtener
 ción está determinado por la velocidad nB del soluto N
que se mueve con más lentitud, L según la ecuación 26.4. d) k
L
Efecto'de'la'resolución'en'el'Bempo'de'retención'*
Es decir,
nB !
1tR 2 B c) H !
N
to!
L di
d) k y a no
Al combinar esta expresión
nB ! con la 26.10 y la 26.16 y
•  Antes*de*considerar*con*detalle*la*importancia*de*las*
1t 2 tonces,laa
después de reordenar se obtiene
R B
cuatro*ecuaciones*apenas*deducidas,*vale*la*pena*formular*
Al combinar esta expresión con la 26.10 y la 26.16 y
dividiend
una*ecuación*para*una*caracterísCca*relacionada*con*el*
NH11
después de reordenar se obtiene # k B 2
la otra se
rendimiento*de*la*columna,*a*saber,*el*Cempo*necesario*
1tR 2 B !
u
para*completar*la*separación*de*los*solutos*A*y*B.*En*
NH11 # kB 2 do
1tR 2 B !
cromatograYa,*el*objeCvo*es*obteT*ner*la*más*alta*
donde (tR)B es el tiempo necesario u para que salga de la m
resolución*en*el*menor*Cempo*posible.*Por*desgracia,*estas*
columna el pico de B necesario
cuando laparavelocidad de la fase
donde lo
se
dos*metas*son*incompaCbles,*por*lo*que*se*debe*buscar*un*
donde (t R )B es el tiempo que salga de la mente, a
móvil es u.
columna el Cuando
pico de B esta ecuación
cuando la se combina
velocidad de la con la
fase se y
sustitu
término*medio*entre*las*dos**
26.26 y se reordena, se tiene
móvil es u. Cuando esta ecuación se combina con la y (Rs)2 se
26.26 y se reordena, se tiene
2 11 # k 2 3 1.0
16R2s H a B
1tR 2 B ! 16R2s H a a 2b
11 # k 2 3
2
(26.29) 1.
1tR 2 B ! u a a "b1 1kB 2 (26.29)
B
u a"1 1kB 2 2 N
Puesto que H es una función de u y a es una función de
Puesto que H es una función de u y a es una función de Pe
k, dicha ecuación es difícil de resolver y usar, excepto Pero
k, dicha ecuación es difícil de resolver y usar, excepto
cuando
cuando se hacencomparaciones
se hacen comparaciones en en
las las
queque varios
varios de de L
L ! NH
los
losfactores sepueden
factores se puedenanular
anularenen
un un cociente.
cociente.
 Ejercicio*
•  Las* sustancias* A* y* B* Cenen* Cempos* de*
retención* de* 16.40* y* de* 17.63* minutos,*
respecCvamente,*en*una*columna*de*30.0*cm.*
Una* especie* que* no* es* retenida* pasa* por* la*
columna* en* 1.30* minutos.* Las* anchuras* de*
pico* (en* la* base)* para* A* y* B* son* 1.11* y* 1.21*
minutos,* respecCvamente.* Calcule* a)* la*
resolución* de* la* columna;* b)* el* número* de*
platos*promedio*de*la*columna;*c)*la*altura*de*
plato**
 conseguir una resolución de 1.5; e) el tiempo necesa-
rio para que la sustancia B eluya en la columna que da
un valor de Rs de 1.5 y f ) la altura de plato necesaria
solución*
para obtener una resolución de 1.5 mediante la co-
lumna original de 30.0 cm y en el tiempo que se da en
un principio.
Solución
ncia de
la pena a) Por medio de la ecuación 26.24 se tiene que
ca rela-
2117.63 " 16.402
saber, el Rs ! ! 1.06
n de los 1.11 # 1.21
es obte- b) La ecuación 26.21 permite el cálculo de N:
posible.
bles, por 16.40 2 17.63 2
N ! 16 a y N ! 16 a
b ! 3493 and b ! 3397
las dos. 1.11 1.21
separa- 3493 # 3397
el soluto Nprom
Nav ! ! 3445
2
ón 26.4.
L 30.0
c) H ! ! ! 8.7 $ 10"3 cm
N 3445
d) k y a no cambian mucho al aumentar N y L. En-
tonces, al sustituir N1 y N2 en la ecuación 26.25 y

4. Parámetros fundamentales
Factor de resolución (Rs)
constituye una medida
cuantitativa de su capacidad
para separar dos compuestos
y se calcula como el cociente
entre la distancia de los
máximos de los dos picos
adyacentes y el valor medio
de las anchuras de los picos
en la base Fig.1

Rs ≥ 1,5: separación ideal

Δ
Rs= 1,5 > Rs > 1: separación aceptable
wb,At + wb,B
2 Rs < 1: separación inaceptable
43
5. Aplicaciones de la cromatografía
ANÁLISIS CUALITATIVO

Disolución estándar
Señal analítica

F1

CH4 Nonano
La muestra no contiene
Octano Decano
metano ni octano.
Tiempo Si los contiene será a
concentraciones inferiores
Muestra a los correspondientes
límites de detección
Señal analítica

CH4 Octano ¿Nonano? ¿Decano?

Tiempo

Identificación positiva: - Comparación de datos de retención

- Uso de detectores en línea 45
5. Aplicaciones de la cromatografía
ANÁLISIS CUANTITATIVO

Área

Señal analítica
Altura, h

Fig.1
tm tr Tiempo

MÉTODOS DE ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO CUANTITATIVO

1. Calibración con patrones
0,4
Preparación de disoluciones patrón

Área de pico, s
0,3

0,2
Obtención de sus cromatogramas
0,1

0,0
0 5 10 15 20 25 30
46
Concentración, ng ml-1
 TERMINOLOGÍA

• FASE ESTACIONARIA: (matriz, soporte cromatográfico)

componente estático de la cromatografía

• FASE MÓVIL: (eluyente) solvente que arrastra a través de la

columna los componentes de la mezcla a analizar

• ELUCIÓN: paso de fase móvil a través de una columna hasta

lograr la salida de los solutos

• ELUIDO: fase móvil que se recoge a la salida de una columna

 TERMINOLOGÍA
• CROMATOGRAMA: Perfil cromatográfico, Perfil de elución.
Representación gráfica de la cuantificación de solutos en el
eluído de una columna

• VOLUMEN DE ELUCIÓN: volumen de fase móvil que pasa a

través de la columna hasta que sale cada soluto

• VOLUMEN MUERTO: volumen de elución de una molécula que

viaja a través de la columna con la velocidad de la fase móvil,
que no experimenta ningún retraso. También se llama
VOLUMEN DE EXCLUSIÓN
Cromatografía en capa fina o laminar (TLC)

Revelación
•Directa (por compuestos colorados)
•Absorbimiento UV (254 , 366 nm)
•Fluorescencia
•Oxidación a presión (Ce IV; Cr VI acido sullfúrico)
•Vapores de yodo
•Reactivos específicos cromogénicos (es. ninidrina )

TLC bidimensional Fronte del solvente

Eluente 1
1) Rotazione
90°
2) Eluente 2

TLC preparativa

placas 20x20 cm; espesor adsorbente 0.5, 1.0, 2.0 mm.

Revelación no destructiva
Recuperación de composti separados
 CROMATOGRAFÍA'EN'PLACA'FINA'*

Fundamento'*
La* cromatograYa* en* capa* fina* (en* inglés* thin* layer* chromatography* o*
TLC)* es* una* técnica* analíCca* rápida* y* sencilla,* muy* uClizada* en* un*
laboratorio*de*Química*Orgánica.**
Entre*otras*cosas*permite:**
T* Determinar* el* grado* de* pureza* de* un* compuesto.* Se* puede*
determinar* así,* por* ejemplo,* la* efecCvidad* de* una* etapa* de*
purificación.**
T*Comparar*muestras.*Si*dos*muestras*corren*igual*en*placa*podrían*ser*
idénCcas.*Si,*por*el*contrario,*corren*disCnto*entonces*no*son*la*misma*
sustancia.**
T* Realizar* el* seguimiento* de* una* reacción.* Es* posible* estudiar* cómo*
desaparecen*los*reacCvos*y*cómo*aparecen*los*productos*finales*o,*lo*
que*es*lo*mismo,*saber*cuándo*la*reacción*ha*acabado.**
 CROMATOGRAFÍA'EN'PLACA'FINA'*

•  La* muestra* a* analizar* se* deposita* cerca* de* un*

extremo* de* una* lámina* de* plásCco* o* aluminio*
que* previamente* ha* sido* recubierta* de* una* fina*
capa*de*adsorbente*(fase*estacionaria).*Entonces,*
la* lámina* se* coloca* en* una* cubeta* cerrada* que*
conCene* uno* o* varios* disolventes* mezclados*
(eluyente* o* fase* móvil).* A* medida* que* la* mezcla*
de* disolventes* asciende* por* capilaridad* a* través*
del*adsorbente,*se*produce*un*reparto*diferencial*
de*los*productos*presentes*en*la*muestra*entre*el*
disolvente*y*el*adsorbente.**
 Adsorbentes'y'eluyentes'*

•  Los*dos*adsorbentes*(fase*estacionaria)*más*ampliamente*uClizados*
son* la* gel* de* sílice* (SiO2)* y* la* alúmina* (Al2O3),* ambas* de* carácter*
polar.*La*alúmina*anhidra*es*el*más*acCvo*de*los*dos,*es*decir,*es*el*
que* reCene* con* más* fuerza* a* los* compuestos;* por* ello* se* uCliza*
para* separar* compuestos* relaCvamente* apolares* (hidrocarburos,*
haluros*de*alquilo,*éteres,*aldehídos*y*cetonas).*El*gel*de*sílice,*por*
el* contrario,* se* uCliza* para* separar* sustancias* más* polares*
(alcoholes,*aminas,*ácidos*carboxílicos).*El*proceso*de*adsorción*se*
debe* a* interacciones* intermoleculares* de* Cpo* dipoloTdipolo* o*
enlaces*de*hidrógeno*entre*el*soluto*y*el*adsorbente.*El*adsorbente*
debe* ser* inerte* con* las* sustancias* a* analizar* y* no* actuar* como*
catalizador*en*reacciones*de*descomposición.**
 Adsorbentes'y'eluyentes'*
•  El* adsorbente* interacciona* con* las* sustancias* mediante*
interacción* dipoloTdipolo* o* mediante* enlace* de* hidrógeno* si*
lo*presentan**
 Adsorbentes'y'eluyentes'*
•  El*orden*de*elución*de*un*compuesto*se*incrementa*al*aumentar*la*
polaridad*de*la*fase*móvil*o*eluyente.*Este*puede*ser*un*disolvente*
único*o*dos*miscibles*de*disCnta*polaridad.*En*el*siguiente*recuadro*
se* recoge* por* orden* creciente* de* fuerza* eluyente* los* disolventes*
más*comúnmente*empleados.**

Hexano*<*tetraclorometano*<*cloroformo*<*diclorometano*<*acetato*de*eClo*<*acetona*
<*2Tpropanol*<*metanol*<*agua*

En* general,* estos* disolventes* se* caracterizan* por* tener* bajos* puntos* de* ebullición* y*
viscosidad,* lo* que* les* permite* moverse* con* rapidez.* Raramente* se* emplea* un*
disolvente* más* polar* que* el* metanol.* Usualmente* se* emplea* una* mezcla* de* dos*
disolventes*en*proporción*variable;*la*polaridad*de*la*mezcla*será*el*valor*promediado*
en*función*de*la*canCdad*de*cada*disolvente*empleada.*El*eluyente*idóneo*para*cada*
caso*ha*de*encontrarse*por*"el*método*del*ensayo*y*del*error".*
 *Determinación'del'Rf'*
•  La*retención*se*puede*explicar*en*base*a*la*competencia*que*se*establece*
entre* el* soluto* a* separar* y* la* fase* móvil* por* adsorberse* a* los* centros*
acCvos* polares* de* la* fase* estacionaria.* Así,* las* moléculas* de* soluto* se*
encuentran*adsorbidas*en*la*fase*estacionaria*y*a*medida*que*se*produce*
la* elución* van* siendo* desplazadas* por* la* fase* móvil.* La* retención* y* la*
selecCvidad* en* la* separación* dependen* de* los* valores* respecCvos* de* las*
constantes* de* los* diferentes* equilibrios* químicos* que* Cenen* lugar,* que*
están*en*función*de:*
T*La'polaridad'del'compuesto,*determinada*por*el*número*y*naturaleza*de*
los* grupos* funcionales* presentes.* Los* solutos* más* polares* quedarán* más*
retenidos* puesto* que* se* adsorben* más* firmemente* a* los* centros* acCvos*
de*la*fase*estacionaria,*mientras*que*los*no*polares*se*eluirán*con*mayor*
facilidad.*
T*Naturaleza'del'disolvente.'Así,*para*un*mismo*compuesto,*un*aumento*
en*la*polaridad*del*disolvente*facilita*su*desplazamiento*en*la*placa.**
 *Determinación'del'Rf'*
•  La* relación* entre* las* distancias* recorridas* por* el* soluto* y* por* el*
eluyente*desde*el*origen*de*la*placa*se*conoce*como*Rf,*y*Cene*un*
valor* constante* para* cada* compuesto* en* unas* condiciones*
cromatográficas* determinadas* (adsorbente,* disolvente,* tamaño*
de* la* cubeta,* temperatura,* etc.).* Debido* a* que* es* prácCcamente*
i m p o s i b l e* r e p r o d u c i r* e x a c t a m e n t e* l a s* c o n d i c i o n e s*
experimentales,* la* comparación* de* una* muestra* con* otra* debe*
realizarse*eluyendo*ambas*en*la*misma*placa.**
•  Para*calcular*el*Rf*se*aplica*la*siguiente*expresión:*
Rf*=*distancia*recorrida*por*el*compuesto*(X)*/*distancia*recorrida*
por*el*eluyente*(Y)**
 *Determinación'del'Rf'*

•  La*distancia*recorrida*por*el*compuesto*se*mide*desde*el*centro*de*la*mancha.*Si*
ésta*es*excesivamente*grande*se*obtendrá*un*valor*erróneo*del*Rf.**
•  Se*recomienda*elegir*un*eluyente*en*el*que*los*componentes*de*la*mezcla*
presenten*un*Rf*medio*en*torno*a*0.3T0.5.*Para*compuestos*poco*polares,*se*debe*
uClizar*un*disolvente*apolar*como*el*hexano.*En*el*caso*de*compuestos*con*
polaridad*media,*se*aconseja*uClizar*mezclas*hexano/acetato*de*eClo*en*disCntas*
proporciones.*Los*productos*más*polares,*requieren*disolventes*más*polares*como*
mezclas*de*diclorometano/metanol*en*disCntas*proporciones.**
 Revelado'de'las'placas'*
•  La* mayor* parte* de* las* placas* de* cromatograYa* llevan* un*
indicador* fluorescente* que* permite* la* visualización* de* los*
compuestos* acCvos* a* la* luz* ultravioleta* (254* nm).* El*
indicador*absorbe*la*luz*UV*y*emite*luz*visible.*La*presencia*
de* un* compuesto* acCvo* en* el* UV* evita* que* el* indicador*
absorba* la* luz* en* la* zona* en* la* que* se* encuentra* el*
producto,*y*el*resultado*es*la*visualización*de*una*mancha*
en*la*placa*que*indica*la*presencia*de*un*compuesto.**
•  En* el* caso* de* compuestos* que* no* absorben* luz* UV,* la*
visualización* (o* revelado)* del* cromatograma* requiere*
uClizar*un*agente*revelador.*Este*Cene*que*reaccionar*con*
los* productos* adsorbidos* proporcionando* compuestos*
coloreados.**
 Métodos'químicos*
Consisten* en* realizar* una* reacción* química* entre* un* reacCvo* revelador* y* los*
componentes* separados,* para* ello* se* pulveriza* la* placa* con* los* reacCvos*
reveladores* con* la* ayuda* de* un* pulverizador* de* vidrio* y* una* pera* de* goma,* o*
mediante*un*disposiCvo*que*proporcione*aire*comprimido.*
Es* preferible* pulverizar* con* las* placas* en* posición* horizontal.* Si* el* reacCvo*
revelador* es* peligroso* o* muy* corrosivo,* la* pulverización* deberá* realizarse* en*
una*vitrina*de*gases*bien*venClada.*
Generalmente*se*uCliza*como*reacCvo*revelador*yodo,*el*cual*forma*complejos*
coloreados* con* los* componentes* orgánicos* (con* tonos* amarilloTmarrón),* pero*
las*manchas*desaparecen*con*el*Cempo*con*lo*que*es*conveniente*señalar*las*
manchas*aparecidas.*
*
 Métodos'químicos*
Otro*reacCvo*revelador*bastante*uClizado*es*el*ácido*
sulfúrico,*que*reacciona*con*los*componentes*orgánicos*
produciendo*manchas*negras.*
El*tamaño*de*las*manchas*no*está*relacionado*con*la*
canCdad*de*componente*separado.*
Además*de*estos*reveladores*generales,*existen*otros*
específicos:*
2,4*T*dinitrofenilhidracina*(para*aldehidos*y*cetonas).*
Verde*de*bromocresol*(para*ácidos*carboxílicos).*
ParadimeCl*aminobenzaldehido*(para*aminas).*
Ninhidrina*(para*aminoácidos).*
*
 Métodos'2sicos.*

El* más* común* consiste* en* añadir* al* adsorbente* un* indicador*
fluorescente.* De* tal* forma* que* al* colocar* la* placa* bajo* una*
lámpara* ultravioleta,* y* dependiendo* del* indicador* y* de* la*
longitud*de*onda,*aparecen*manchas*fluorescentes*en*las*zonas*
en* las* que* hay* componentes,* o* en* otros* casos* aparece* toda* la*
placa*fluorescente*excepto*donde*hay*componentes.*
Algunos*compuestos*poseen*cierta*fluorescencia*(aunque*no*es*
normal)*con*lo*que*pueden*ser*detectados*directamente*en*una*
lámpara*de*ultravioleta.*
Cromatografía en columna

Cromatografía
Flash

Técnica presentada
de Still el 1978
W. C. Still, M. Kahn
and A. Mitra, J.
Org. Chem. 1978,
43, 2923.

Rf>0.2 Rf>0.1