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- Procediment de la tècnica:
Material de PCR:
Eppendorf de PCR, Micropipeta, Termociclador, Guantes, Gradeta,
Contenidor de residus biològics.
Material de Electroforesis: Tubos con producto de PCR, Puntas con filtro, Micropipeta,
Cubeta de electroforesi, Fuente de electroforesi, Guantes, Soporte de gel
- PCR - ELECTROFORESIS:
● Preparar el material ● Preparar el material necesario
necesario. ● Realizar los cálculos para preparar
● Seguir las instrucciones el gel de agarosa (3g de agarosa
que trae el kit de PCR. en 100 ml de TAE 1x)
● En los eppendorf de PCR ● Preparar el gel de agarosa
se tienen que añadir ,en ● Utilizar el SYBR SAFE DNA para
cada uno, 20 μl de la visualizar el gel
MASTER MIX y 20 μl de ● Utilizar los tubos de la PCR y
cada ADN. centrifugar 1s a máximas rpm
● Para el control negativo, se ● Añado x microlitros de Orange G a
añade 20 μl de agua cada tubo de DNA
destilada. ● Hacer un spin a cada tubo
● Se hace una mezcla por ● Poner el gel en la cubeta de
inmersión en cada electroforesis
eppendorf. ● Llenar la cubeta de electroforesis
● Encender el termociclador con TAE 1x cubra todo el gel
● Se ponen los tubos en el ● Cargar 20 microlitros en las
termociclador muestras de cada pozo
● Al acabar el Termociclador ● Conectar la cubeta a la fuente de
colocamos los tubos en el la electroforesi
congelador ● Programar la fuente para correr a
100V durante 30 min.
aproximadamente
- Resultats.
Una vez ya se ha realizado la electroforesi se tiene que llevar el gel de la cubeta al
transiluminador para ver el resultado.
En nuestro caso observamos cómo actuó el marcador, el cual se veía diferenciado por los
pares de bases. El ADN de la escena del crimen apareció amplificado en la electroforesi con
dos bandas. En el caso de los sospechosos 1 y 2 también aparecieron 2 bandas en cada
carril pero estas no correspondían con la escena del crimen. Finalmente, el ADN del
sospechoso 3 solo se pudo observar 1 banda en el carril que tampoco coincidía con las de
la escena del crimen.