RESUMEN

La alfalfa (Medicago Sativa) es una especie de planta herbácea la cual tiene

características nutritivas excepcionales teniendo una amplia gama de vitaminas,
minerales y un particularmente alto contenido proteico en comparación a otras
especies.
Estudios previos indican que durante etapas de desarrollo tardío de esta planta
existe una disminución en la calidad nutricional de la misma viéndose reflejada en
un descenso en el contenido de crudo proteico (CP) y un aumento en el contenido
de fibra (1). En el trabajo realizado por Wenqiang Fan et al se describe que los
mecanismos moleculares y bioquímicos implicados en esta última observación aún
no han sido dilucidados, por lo que el objetivo principal de su investigación es
comprender las principales vías y proteínas asociadas a este proceso de
disminución en la calidad nutricional mediante el análisis proteómico y
metabolómico. Cabe destacar que, para los análisis descritos a continuación, los
autores utilizaron brotes de alfalfa en distintas etapas del crecimiento de la planta:
Brote, floración temprana (10% de floración) y floración media (45% de floración).
Lo primero a realizar por los autores fue el análisis de la calidad nutricional midiendo
el contenido de CP en las distintas etapas mencionadas según el método AOAC
descrito por (2), mientras que el contenido de fibra fue medido por el método de Van
Soest et al. (3), para luego mediante la utilización de un equipo Ankom 220 Fiber
Analyzer, obtener los parámetros de neutral Detergent Fiber (NDF) y Acid
detergent fiber (ADF) para así calcular el valor de RFV (Relative feed value)
obteniendo los resultados que se observan en la Tabla 1 presentada por los autores,
donde se observa que a medida que avanza la planta hacia un estado de floración
se registra un aumento en la cantidad de fibra al mismo tiempo que disminuye el
contenido proteico, lo que se ve reflejado en una disminución en calidad nutricional
medida por el RFV.
Para el análisis proteómico se realizó una extracción proteica a base de acetona
para posteriormente lavar y concentrar las muestras para realizarles un marcaje con
diversos agentes, siguiendo las instrucciones detalladas por el kit TMT Mass
Tagging Kits and Reagents. Las muestras marcadas fueron corridas en una
columna de nanoLC de fase reversa acoplada a espectrometría de masas para
finalmente analizar los resultados con una base de datos y comparar las variaciones
en la proteómica en las distintas fases de crecimiento de la planta.
De manera similar, el análisis de la metabolómica se realizo mediante una
extracción polar de distintas fases, para luego separar las muestras por la técnica
de UHPLC acoplada a espectrometría de masas para su respectiva identificación
en una base de datos. Posterior a esto se realizó el procesamiento de la información
obtenida a través de análisis estadísticos pertinentes para la validación de los
resultados.
El crudo proteico (CP) es un termino general utilizado para compuestos
nitrogenados en los alimentos el cual, según estudios previos, decrece
continuamente durante etapas del desarrollo de la alfalfa, en donde existe una
demanda de producción de nutrientes y un aumento en el proceso de “lignificación”
lo que implica un incremento del contenido de fibra, donde análogamente los valores
de NDF y ADF se correlacionan negativamente con la calidad nutritiva de la alfalfa.
Por otra parte, los resultados obtenidos muestran un cambio en el contenido de
carbohidratos conducidos hacia la biosíntesis de hemicelulosa, siendo relevante la
regulación en ascenso en etapas de floración media de la D-manosa y de las
enzimas alfa-glucosidasa y alfa amilasa las cuales pueden hidrolizar almidón para
la producción de D-glucosa siendo este uno de los precursores para la formación
de hemicelulosa. Además se observa un aumento en el contenido de la
descarboxilasa del Ácido glucurónico, enzima necesaria para sintetizar xileno que
es a su vez el principal componente de la lignina que como se mencionó, esta
correlacionado con el contenido de fibra y por lo tanto con la calidad nutritiva de la
alfalfa durante procesos de maduración, Además los resultados exhibidos
mostraron un abundancia de Cinamil-Alcohol deshidrogenada (enzima clave en la
biosíntesis de lignina) y el aminoácido L-fenilalanina (que proporciona el material de
partida para la síntesis de lignina).
Estudios previos (4-5) en trigo demuestran que el contenido de L-glutámico y
proteína están estrechamente relacionados entre sí, y al comparar esta afirmación
con los resultados obtenidos por los autores, se muestra que el contenido de L-
glutámico registrado durante la floración media es considerablemente más bajo que
el que se presenta durante el periodo de brote de la alfalfa, por lo que esto explicaría
el bajo contenido proteico que disminuye conforme el periodo de floración. Esto
también se aplica para los resultados obtenidos con la L-asparagina, guanidina,
adenina, uracilo, entre otras.
Por otra parte, se detectó que tanto la L-tirosina como la L-fenilalanina estaban
sobre reguladas. Al observar el metabolismo de las plantas se presenta que la L-
tirosina puede ser producida mediante la hidroxilación de la fenilalanina, y puede
participar en los metabolismos de glucosa y grasa en la planta. Esta especulación
concuerda con lo observado en los resultados del trabajo, donde se muestra que el
metabolismo de grasas y azucares se presenta aumentado.
Por último, se considera que un 30 a 50% de las proteínas de la alfalfa están
presentes en los cloroplastos. Esto es confirmado por estudios previos en la
fisiología de plantas, donde se muestra también que el material de síntesis de la
clorofila corresponde a acido glutámico y alfa cetoglutarato (6), por lo que
probablemente un descenso en el contenido de ácido glutámico puede
eventualmente inhibir la síntesis de clorofila y (en consecuencia) la fotosíntesis.
los resultados obtenidos por los autores muestran que la clorofila contenida en los
complejos proteicos fotosintéticos LHCs, así como también la ruta fotosintética se
encuentra regulada negativamente, lo que se relaciona con el contenido de ácido
glutámico y la tasa de síntesis de ATP.
Estos cambios inhiben la fotosíntesis y mantienen al límite la síntesis de clorofila y
cloroplastos, resultando en una disminución del contenido proteico. Estos
resultados complementan a lo obtenido por Aranjuelo et al (7) en sus estudios sobre
la fisiología, proteómica y metabolómica de la alfalfa durante la fotosíntesis,
específicamente, al inhibirla mediante la reducción de ácido glutámico y asparagina,
en conjunto con modificaciones en los niveles de síntesis de ATP, llevando a una
regulación negativa en los niveles de proteína en la planta.
En conclusión, los datos obtenidos revelan los complejos cambios metabólicos que
involucra el paso a la etapa de floración media, donde un gran número de
metabolitos son expresados, afectando directamente en la expresión de proteínas
en la planta, específicamente, en el metabolismo de carbohidratos, almidón,
sacarosa y el metabolismo y biosíntesis de aminoácidos, conllevando a una
disminución del contenido total de proteínas.
Por otra parte, el metabolismo de carbohidratos provee a la planta de material para
la síntesis de hemicelulosa, resultando en un incremento de esta en la alfalfa,
llevando a un aumento en el contenido de NDF y L-fenilalanina, requerida para la
síntesis de Lignina, lo que conllevaría a una baja en el RFV de la alfalfa y su calidad
nutritiva.

1. Lamb JFS, Sheaffer CC, Samac DA. Population density and harvest maturity
effects on leaf and stem yield in alfalfa this paper is a joint contribution from
the plant Sci. Res. Unit, USDA-ARS, and the Minnesota Agric. Exp. Stn.
Agron J. 2003;95(3):635–41.
2. Horwitz W, Latimer Jr. GW; AOAC International. Official methods of análisis
of AOAC International. 18th ed. Gaithersburg, MD: AOAC International; 2007.
3. Van Soest PJ, Robertson JB, Lewis BA. Methods for dietary fiber, neutral
detergent fiber, and nonstarch polysaccharides in relation to animal nutrition.
J Dairy Sci. 1991;74(10):3583–97.
4. Reddy MS, Chen FG, Jackson L, Aljoe H, Dixon RA. Targeted downregulation
of cytochrome P450 enzymes for forage quality improvement in alfalfa
(Medicago sativa L.). Proc Natl Acad Sci U S A. 2005;102(46):16573–8.
5. Block RJ, Mitchell HH. The correlation of the amino acid composition of
proteins with their nutritive value. Nutr Abstr Rev. 1949;16:249.
6. Willows RD. Chlorophyll Synthesis. Netherlands: Springer; 2006.
7. Aranjuelo I, Molero G, Erice G, Avice JC, Nogués S. Plant physiology and
proteomics reveals the leaf response to drought in alfalfa (Medicago sativa
L.). J Exp Bot. 2011;62(1):111.