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MEDIOS DE CULTIVOS
INTEGRANTES:
ROSAS FRETEL ANTHONY
SALAZAR ORTEGA GIAN FRANCO
Microbiología General
Pedro Barzola
Índice
INTRODUCCION.............................................................................................................1
LA EVOLUCIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO......................................................1
I.- OBJETIVOS.................................................................................................................3
II.- MARCO TEORICO....................................................................................................3
Condiciones generales para el cultivo de microorganismos...............................4
Clasificación de los medios de cultivo..........................................................................6
COMPOSICIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO....................................................8
Otros componentes........................................................................................................9
Medios de cultivos más usados en microbiología industrial.......................................10
III. MATERIALES..........................................................................................................11
IV. EXPERIMENTO.......................................................................................................12
V.- RESULTADO............................................................................................................14
VI.- CONCLUSIONES...................................................................................................14
VII.- RECOMENDACIONES........................................................................................15
VII.- BIBLIOGRAFIA.....................................................................................................16
INTRODUCCION
La primera noticia de la utilización de medios de cultivo nos llega del micólogo Brefeld,
que consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos realizados a base
de gelatina.
Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamaño)
y no fue hasta el año 1878 cuando Lister popularizó un método enfocado al cultivo
puro basado en diluciones seriadas en un medio líquido.
En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en relación
con los medios de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el agar-agar
(polisacárido extraído de algas rojas) como solidificante.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las
bacterias quimioautótrofas (utilización de nitrógeno y azufre, sobre todo) tuvieron gran
importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento. Diseñaron
este tipo de medios de tal forma que su especial composición química favorecía el
crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en función de sus procesos
metabólicos, eran los únicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes
del medio.
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Un medio de cultivo es una mezcla de diversos nutrientes que en concentraciones
adecuadas permite el crecimiento de microorganismos, bajo determinadas condiciones
físico-químicas. La composición química de los medios de cultivo es variada pero, de
manera general, todos ellos contienen una fuente de energía (compuesto orgánico o
inorgánico), una fuente carbonada (algunas veces un mismo compuesto puede servir de
fuente de energía y fuente carbonada), sales minerales, vitaminas y agua.
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I.- OBJETIVOS
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión
de oxígenos adecuados, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.
También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y
no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y
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amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el
crecimiento de la mayoría de las bacterias Grampositivas).
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto
de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
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Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad,
pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está ampliamente
extendido en el laboratorio.
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en
una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias
(tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
Los gases principales que afectan al desarrollo microbiano son el oxígeno y el dióxido
de carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxígeno libre
clasificándose en cuatro grupos:
Los anaerobios estrictos son muy sensibles al O2 por lo que se debe evitar la
exposición de estos microorganismos al O2. Se puede obtener un ambiente de
anaerobiosis por los siguientes métodos:
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5- Luz ambiental
6- pH
7- Temperatura
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios.
El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
vapor de agua a presión como agente esterilizante)
Medios electivos
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Por ejemplo, se pueden obtener cultivos de enriquecimiento conteniendo un gran
número de bacterias del género Azotobacter, usando un medio libre de nitrógeno y que
contenga una fuente orgánica de carbono e incubando aeróbicamente.
Medios selectivos
Otro importante método de separación de cultivos mixtos, es por medio del uso de
un medio selectivo. Este es un medio que ha sido modificado para incluir uno o más
agentes inhibitorios. La elección de un medio selectivo debe ser apropiada para el
aislamiento del organismo que interesa. Las sustancias inhibitorias pueden ser
colorantes, antibióticos, sales biliares y sustancias que afecten el metabolismo
enzimático de algunas especies. Los medios selectivos para especies Gram-, pueden
incluir cristal violeta el cual inhibe el crecimiento de muchas bacterias Gram+. La
penicilina con una concentración de 5,50 unidades/ml inhibe la mayoría de las
bacterias Gram+ y por lo tanto el medio se hace selectivo para bacterias Gram-
Los medios selectivos para bacterias Gram+, incluyen Telurito de Potasio, azida
sódico, etc. que inhiben el crecimiento de bacterias Gram-.
Medios diferenciales
Ej.: que tenga agregado un indicador de pH que haga variar el color del medio cuando
se encuentre frente a un microorganismo.
Medios enriquecidos
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COMPOSICIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Peptonas
Infusiones y extractos
Las infusiones y los extractos de carne y otros tejidos se usaron antes de conocerse
las peptonas, hoy se los sigue usando en menor medida.
Agentes solidificantes
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Ventajas
Desventajas
La gelatina es poco usada ya que a temperaturas altas se disuelve y por otra parte
numerosos microorganismos lo digieren, se usa principalmente en microbiología de
suelos.
Otros componentes
Indicadores colorimétricos
Los indicadores pueden incluirse entre los medios. Los indicadores de pH más usados
son rojo fenol, azul bromotimol, púrpura de bromocresol y rojo neutro. Estos
indicadores se usan para demostrar la producción de ácido por un hidrato de carbono
contenido en el medio.
El azul de metileno y la resazurina son los indicadores de Eh (carga iónica) más
usados actualmente.
Algunos lotes de pH y Eh pueden ser tóxicos para algunos microorganismos y deben
probarse antes de usarlos.
Agentes selectivos
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Agentes reductores
Preparación
Caldo nutriente
Se pesan los ingredientes y se calientan hasta que se disuelven. Una vez que se ha
enfriado, se ajusta el pH a 7-6. Se autoclava a 1 atmósfera durante 15 minutos para
precipitar los fosfatos. Se filtra y se reparte en tubos tapados con algodón o con
tapones a rosca (en este último caso no se ajusta completamente las tapas). Se
esteriliza a 1 atmósfera durante 20 minutos. Ajustar las tapas a roscar antes de retirar
de la autoclave.
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III. MATERIALES
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IV. EXPERIMENTO
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Fuente: Laboratorio de Chucuito
Esterilizar el medio de cultivo disolviendo completamente en autoclave (121
°C/15”), en horno eléctrico (100°C/ 30”).
Figura 4.4
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V.- RESULTADO
VI.- CONCLUSIONES
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VII.- RECOMENDACIONES
cultivos.
Rotular los tubos de ensayo indicando las sustancias que contienen estos.
La mesa del laboratorio debe estar libre para poder llevar acabo la practica.
No debemos acercar nuestra boca con los tubos de ensayo, ya que hay que
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VII.- BIBLIOGRAFIA
Biblioteca de consulta Encarta 2004.