“AÑO DEL DIÁLOGO Y LA RECONCILIACIÓN NACIONAL”

UNIVERSIDAD NACIONAL AMAZÓNICA DE MADRE DE DIOS

FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

INFORME DE LABORATORIO DE LA PRACTICA 4

“RECONOCIMIENTO DE BACTERIAS POR

TINCIÓN”

PRESENTADO POR: NILDA ESPINOZA IMA

CURSO: MICROBIOLOGIA AGROINDUSTRIAL
DOCENTE: Ing. MACEDA SANTIBAÑEZ, JULIO CESAR
SEMESTRE: CUARTO 2018-II

PUERTO MALDONADO, PERÚ.

 I. INTRODUCCIÓN
En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeños para
observarse a simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.
Estos microorganismos difieren en características tales como forma de
nutrición, estructura, tamaño, composición entre otros aspectos; es por
ello que se emplea el estudio microscópico el facilita notablemente la
observación; principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas con
colorantes o tintes los cuales facilitan también la observación de ciertas
estructuras celulares.
En este informe vamos a conocer y aplicar correctamente el
procedimiento de tinción, Diferenciar entre bacterias gram positivas y
gram negativas. Desarrollamos los métodos de tinción y damos a conocer
un análisis de los resultados obtenidos en la práctica.

II. OBJETIVOS
 conocer y aplicar correctamente el procedimiento de tinción
 Diferenciar entre bacterias gram positivas y gram negativas

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

La coloración de gram es una técnica que se utiliza en los estudios

microbiológicos de las bacterias

la técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier

origen los colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y tras unos
minutos se realiza un lavado del colorante después de eso puede que el
colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido en el primer caso
permanecería de color morado y se trataría de bacterias gram positivas y en el
segundo la pared tendría un color rosado y serían gram negativas

La tincion gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para
observar las mejor bajo el microscopio según la distribución del peptidoglicano
de la pared celular que las envuelve se tiñen de una forma u otra así las bacterias
que no se tiñen mediante Esta técnica se denominan gram negativas están
formadas por una pared más fina formada por menos capaz de peptidoglucano
y una segunda membrana rica en lípidos que repele la tincion gram al
microscopio aparece incoloras

IV. MATERIALES Y EQUIPOS

Materiales

 placas petri con muestra biológica

 asas de siembra
 portaobjetos
 mechero bunsen

reactivos

 lugol
 alcohol
 safranina
 agua destilada

equipos

 autoclave
 microscopio

V. METODOLOGÍA
 tomar consideración todas las prácticas de seguridad personal Asepsia
personal y del área de trabajo:
 Se tomó las medidas de seguridad se utilizó guardapolvo
guantes gorro de laboratorio y cubre boca
 tomar 5 Porta objetos limpio:
 se tomó 5 porta objetos el cual se desinfecto y se lavó con
agua destilada
 colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio
usar poca cantidad de agua por lo que se puede usar el Asa de siembra:
 se utilizó una gota de agua en la porta objeto para realizar la
tinción.
 si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido tomar una gota de la
muestra líquida y extenderla en portaobjetos:
 se tomó el medio líquido y se le extendió en la porta objeto.
 flamear el Asa de siembra y dejar enfriar tomar en condiciones asépticas
una pequeña cantidad de cultivo bacteriano en medio Sólido y transferirlo
a la gota de agua:
 remover la mezcla con el Asa de siembra hasta formar una suspensión
homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado
 esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación
acercando el a la llama del mechero tener cuidado de no calentar
demasiado el portaobjetos pues las células pueden deformarse o
romperse:
 teñir con cristal Violeta agregando suficiente colorante y deje que actúe
durante un minuto:
 lave suavemente con agua:
 fijar suavemente con el mordiente lugol y deje actuar durante un minuto.
 lavar suavemente con agua
 decolore con alcohol etílico al 95%
 agregar safranina por un minuto
 lavar suavemente con agua
 secar y observar al microscopio
 VI. RESULTADOS

tabla tipo de bacterias según tinción y características

muestra Medios de cultivo tipo de bacterias características

según tinción del m.o
BM SOYA BEAR S.S
disolución disolución disolución

SBR - rojo rosa

APR + azul violeta
SPP-3 + azul violeta
SPP-2 + azul violeta
C.C.C + azul violeta

Para la obtención de estos datos utilizamos Safranina, el cual dio como resultado
rojo rosa cuando es gram negativo y azul violeta cuando es gram positivo.

Figura 2. Adición de colorantes de Gram

Figura 3. a) Bacilos Gram negativos b) Cocos Gram positivos.

Coloración con tinta china para cápsula

Medios de cultivo disolución muestra tipo de bacterias según tinción

características del microorganismo

VII. DISCUSIONES
 El resultado sobre un estudio de Gram positiva o negativa es realmente
importante para el diagnóstico y buen tratamiento de la patología
relacionada microorganismos es necesario saber cómo influyen en las
manifestaciones clínicas las diferencias existentes entre la pared celular
de las bacterias Gram positivas y Gram negativas en su detección y en el
tratamiento. Porque existen componentes de la pared celular que
contribuyen a la virulencia delas bacterias protegiéndolas de las
respuestas inmunitarias. En el laboratorio se desearía eliminar de forma
selectiva las bacterias Gram positivas de una mezcla de bacterias Gram
positivas y Gram negativas. La tinción de Gram no es una prueba fiable
de tinción de bacterias en medios de cultivo con escasos nutrientes (p. ej.,
cultivos viejos o en fase estacionaria) o tratados con antibióticos debido a
la degradación del peptidoglicano por parte de estos fármacos.
 Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las
paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas - La
pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglicano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la
cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se
encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico
que está anclado solamente en el peptidoglicano (también conocido como
 mureína) - Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram
negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana
plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de
lipoproteínas.
VIII. CONCLUSIONES
 La tinción Gram es una prueba potente y rápida que nos permite
diferenciar dos clases de bacterias estas son: Bacterias gram
positivas y las gram negativas.
 Las gram positivas se tiñen de morado ya que el colorante se queda
atrapado en la capa gruesa de peptidoglucanos que rodea a la célula.
 Las gram negativas tienen una capa de petidoglucano mucho más
delgada es por ello que no retiene el violeta cristal y por esto las
células se tiñen con safranina y las observamos rojas.
 Se concluye también que las gram positivas retienen la tinción azul y
conservan el complejo yodocolorante.

IX. RECOMENDACIONES
 Es conveniente estandarizar los tiempos de tinción para cada
laboratorio, ya que la calidad y concentraciones de reactivos pueden
variar bastante.
 Lo más recomendable es realizar el gram de los cultivos de agares
enriquecidos y de colonias aisladas y en crecimiento.
 Los gram directos de una muestra solo son útiles en ciertos casos.
 La muestra no debe ser excesiva para poder determinar las otras
características de la bacteria, como forma y agrupación.

X. BIBLIOGRAFÍA

 Brock et al. Biología de los microorganismos. 12ª Edición. Madrid.

Pearson: Adisson Wesley. 2009. Fijación al calor. Accesible en URL:
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/observacion-microscopica/fijacion Consultada el 26
de Enero de 2015.
 Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. Microbiology.
10th Edition. Pearson Education. 2010.

 Bacteria under microscope. Accesible en URL:

http://www.bacteriainphotos.com/ Consultada el 26 de Enero de 2015.