“Acción Buffer de los Aminoácidos”

Capítulo I Bioquímica de Lippincotts.

Bioquímica – Deshidratación Biolog.

Traducido por:
Carlos Santos
Ubaldo Madera
Enero 2004.

Santiago, Rep. Dominicana

Área Ciencias Fisiológicas.
Departamento de Medicina. PUCMM
1. Resumen General

Las proteínas son las moléculas más abundantes y funcionalmente diversas de los seres vivos. Casi todos los procesos
vitales dependen de este tipo de moléculas. Por ejemplo, las enzimas y hormonas polipeptídicas dirigen y regulan el
metabolismo corporal, mientras las proteínas contráctiles permiten el movimiento. En el hueso, el colágeno forma una red
para la deposición de los cristales de fosfato de calcio, actuando como cables de acero para reforzar el concreto. En la sangre,
las proteínas como la hemoglobina y la albúmina transportan moléculas esenciales para la vida, mientras las inmunoglobulinas
destruyen agentes infecciosos como virus y bacterias. En resumen, las proteínas muestran increíble diversidad de funciones y
todas tienen en común que son polímeros lineales de los aminoácidos. Este capítulo describe las propiedades de los
aminoácidos.

2. Estructura de los aminoácidos

Aunque han sido conocidos y descritos más de 300 aminoácidos en la naturaleza, sólo 20 se encuentran de manera común
como constituyentes de las proteínas de los mamíferos. (Nota: estos son los únicos aminoácidos que son codificados por el
DNA, el material genético de la célula). Cada aminoácido, excepto la prolina, tiene un grupo carboxilo, un grupo amino y una
cadena lateral que lo distingue de los demás (grupo R) unido al carbono alfa. A pH fisiológico (aproximadamente 7.4) el grupo
carboxilo está disociado, formando el ion carboxilo cargado negativamente (-COO ) y el grupo amino que está protonado (-
NH3). En las proteínas, casi todos los grupos amino y carboxilo están combinados en el enlace peptídico y no están
disponibles para reacción química alguna (excepto para la formación de puentes de hidrógeno). En consecuencia, el tipo de
cadena lateral es la que define o determina el papel de los aminoácidos en las proteínas. Es útil clasificar los aminoácidos de
acuerdo a las propiedades de las cadenas laterales: no polares o polares (neutros, acídicos o básicos).

A. Aminoácidos con cadenas laterales no polares

Cada uno de estos aminoácidos tiene una cadena lateral no polar que no se une o dona protones o participa en la formación
de enlaces iónicos o puentes de hidrógeno. Estas cadenas laterales promueven interacciones hidrofóbicas dada su naturaleza
tipo lipídica.

1. Localización de los aminoácidos no polares en las proteínas: En las proteínas que se encuentran en solución acuosa, las
cadenas laterales de los aminoácidos no polares tienden a agruparse en el interior de las proteínas. Este
fenómeno es debido a la hidrofobicidad de los grupos R no polares, los cuales actúan como gotas de aceite que
coalescen en un ambiente acuoso. Los grupos R no polares ayudan a la formación de la forma tridimensional de
las proteínas. (Nota: en las proteínas que están localizadas en un ambiente hidrofóbico como la membrana, los
grupos R no polares se encuentran en la superficie de las proteínas, interactuando con la parte lipídica). La
importancia de estas interacciones hidrofóbicas es estabilizar la estructura de la membrana.

2. Prolina. La cadena lateral de la prolina y el grupo amino alfa forman un anillo, por lo que la prolina difiere de los
otros aminoácidos en que contiene un grupo imino en vez de un grupo amino.
 B. Aminoácidos con cadenas polares neutras o sin carga

Estos aminoácidos tienen una carga neta de cero a pH neutro, aunque las cadenas laterales de cisteína y tirosina
pueden perder un electrón a pH alcalino. La serina, la treonina y la tirosina contienen un grupo hidroxilo polar que participa
en la formación de puentes de hidrógeno. Las cadenas laterales de la asparagina y la glutamina contienen un grupo carboxilo y
un grupo amino, los cuales participan en la formación de puentes de hidrógeno.

1. Enlaces disulfuro. La cadena lateral de la cisteína contiene un grupo sulfidrilo (-SH), que es un componente
importante de los sitios activos de las enzimas. En las proteínas los grupos –SH de dos cisteínas se oxidan y
forman un dímero denominado cistina, la cual contiene un enlace covalente cruzado denominado puente
disulfuro (-S-S-).
2. Cadenas laterales como sitios de unión para otros componentes. La serina, la treonina y rara vez la tirosina
contienen un grupo polar hidroxilo que participa o sirve como sitio de unión para grupos fosfato. (Nota: la
cadena lateral de la serina es un componente importante del sitio activo de muchas enzimas). Además, el grupo
amida de la asparagina, así como el grupo hidroxilo de la serina o la treonina pueden servir como sitio de unión
para oligosacáridos en las glucoproteínas.

C. Aminoácidos con cadenas laterales acídicas

El ácido aspártico y el ácido glutámico son donadores de protones. A pH neutro las cadenas laterales de estos
aminoácidos están completamente ionizados, conteniendo un grupo carboxilo cargado negativamente (-COO ). Es por eso
que se les denomina aspartato o glutamato para enfatizar que están cargados negativamente a pH fisiológico.

D. Aminoácidos con cadenas laterales básicas

Las cadenas laterales de los aminoácidos básicos aceptan protones. A pH fisiológico las cadenas laterales de la lisina
y la arginina están completamente ionizadas y cargadas positivamente. En contraste, la histidina es ligeramente básica y el
aminoácido libre permanece sin carga en su mayor parte a pH fisiológico. Sin embargo, la histidina cuando es incorporada en
las proteínas, sus cadenas laterales pueden estar cargadas positivamente o neutras, dependiendo del ambiente iónico que le
rodea. (Nota: esta es una importante propiedad de la histidina ya que contribuye a la función de proteínas como la
mioglobina).

E. Abreviaciones y símbolos para los aminoácidos

Cada aminoácido posee una abreviatura de tres letras y un símbolo de una letra. Se siguen las siguientes letras:

a. Sólo con la primera letra. Si el aminoácido comienza con una letra particular, entonces esa letra como símbolo.
Por ejemplo, I para isoleucina.
 Cisteína : Cys : C
Histidina : His : H
Isoleucina : Ile : I
Metionina : Met : M
Serina : Ser : S
Valina : Val : V

b. Si uno o más de los aminoácidos empieza con una letra particular, el más común de los aminoácidos recibe esa
letra como símbolo. Por ejemplo, glicina es más común que el glutamato, por lo que G es el símbolo para la
glicina.

Alanina : Ala : A
Glicina : Gly : G
Leucina : Ley : L
Prolina : Pro : P
Treonina : Thr : T

c. Algunos aminoácidos suenan como sus símbolos.

Arginina : Arg : R
Asparagina : Asn : N
Aspartato : Asp : D
Glutamina : Gln : Q
Glutamato : Glu : E
Fenilalanina: Phe : F
Tirosina : Tyr : Y
Triptófano : Trp : W

d. Letra cercana a letra inicial: Para los restantes aminoácidos, es asignado un símbolo de una letra que es tan
cercana en el alfabeto como sea posible a la letra inicial de el aminoácido. Así la letra B es asignada a Asx,
significando cualquiera ácido aspártico o asparagina, la Z es asiginada a Glx, significando cualquiera ácido
Glutámico o Glutamina, y X es asignada a un aminoácido sin identificar.

Aspartato o Asparagina : Asx : B

Glutamato o glutamina: Glx : Z
Lisina : K (más cerca de L)
Aminoácido indeterminado : X

F. Propiedades ópticas de los aminoácidos

 El carbono alfa de cada aminoácido está unido a cuatro grupos químicos diferentes es, por tanto, un átomo de
carbono quiral u ópticamente activo. Glicina es la excepción porque su carbono alfa tiene dos hidrógenos sustituyentes y es
entonces ópticamente inactivo. (Nota: Los aminoácidos que tienen un centro asimétrico en el carbono alfa pueden existir en
dos formas, llamadas D y L, las cuales son imágenes al espejo una de la otra). Las dos formas en cada par son denominadas
estereoisómeros, isómeros ópticos o enantiómeros. Todos los aminoácidos que se encuentran en las proteínas son de
configuración L. No obstante los aminoácidos de configuración D son encontrados en algunos antibióticos y en paredes de
células bacterianas.

III PROPIEDADES ACIDO BASE DE LOS AMINOACIDOS

Los aminoácidos en soluciones acuosas contienen grupos acídicos débiles alfa carboxilos y grupos básicos débiles alfa
amino. Además cada uno de los aminoácidos acídicos y básicos contienen un grupo ionizable en su cadena lateral. En adición
a esto los aminoácidos libres y algunos aminoácidos combinados en enlaces peptídicos pueden potencialmente actuar como
buffer. La relación cuantitativa entre la concentración de un ácido débil (HA) y su base conjugada ( A- ) está descrita por la
ecuación de Henderson-Hasselbalch.

A.ECUACION DE HENDERSON-HASSELBALCH

1. Derivación de la ecuación:

Considere la liberación de un protón por un ácido débil representado por HA:

←
HA → H+ + A-

Ácido débil protón base conjugada ( sal )

La (sal ) o base conjugada, A- , es la forma ionizada de un ácido débil. Por definición, la constante de disociación del ácido,
Ka, es

Ka = [H+] [A-]
[HA]

Nota: mientras mayor es el Ka, más fuerte es el ácido, porque la mayor parte del HA ha sido convertido a H+ y A- .
contrariamente mientras más pequeño el Ka menos cantidad de ácido se ha disociado y por tanto más débil el ácido.

Resolviendo [H+] de la ecuación anterior, tomando el logaritmo de ambos lados de la ecuación, multiplicando ambos lados de
la ecuación por -1, y sustituyendo pH = -log [H+] y pKa = -log de Ka obtenemos la ecuación de Henderson-Hasselbalch.

PH= pKa + log [A-]

[HA]
2. Titulación de la curva de ácido acético

La ecuación de Henderson-Hasselbalch puede ser usada para calcular el pH de una solución que contenga un ácido débil
después de la adición de un ácido con una base débil.

3. Demostración del efecto buffer:

Un buffer es una solución que resiste cambios en el pH después de la adición de un ácido o una base. Un buffer puede ser
creado mezclando iguales concentraciones de un ácido débil (HA) y su base conjugada (A-). (nota: si las cantidades de HA y A-
son iguales el pH es igual al pKa ). Si adicionamos ácido a ésta solución, A- puede neutralizarlo, siendo convertida en el
proceso a HA. Si se adiciona una base, HA puede neutralizarla siendo convertida en el proceso a A- . Un par conjugado ácido
base puede servir como un buffer efectivo cuando el pH de la solución está aproximandamente a +- una unidad de pH del
pKa del ácido débil, así la máxima capacidad de amortiguamiento ocurre a un pH igual al del pKa. Esto se muestra en la figura
1.8 . (ver libro), una solución conteniendo ácido acético (HA, CH3COOH) y acetato (CH3COO-) con un pKa de 4.8 resiste
un cambio en el pH desde pH 3.8 a 5.8 con un amortiguamiento máximo a un pH = 4.8 (nota: a un valor de pH menor que el
pKa, la forma ácida protonada (CH3COOH ) es la especie predominante. A valores de pH mayores que el pKa la forma
deprotonada (CH3COO-) es la especie predominante en la solución).

B. TITULACION DE LA ALANINA

1. Disociación del grupo carboxilo:

La curva de titulación de un aminoácido puede ser analizada de la misma manera descrita para el ácido acético. Por
ejemplo considere a la alanina, la cual contiene ambos, un grupo carboxilo y un grupo amino. A un pH bajo (ácido ), ambos de
estos grupos son protonados (ver figura 1.9 en el libro ). A medida que el pH de la solución se eleva el grupo COOH de la
forma I puede disociarse donando un protón al medio. La liberación de un protón lleva a la formación de un grupo
carboxilato, COO-. Ésta estructura es mostrada como forma II la cual es la forma dipolar de la molécula. Ver figura en el libro
2.9. (nota: esta forma es también llamada un zwitterion y esta forma es la forma de la alanina esto es que tiene una carga neta
de 0 ).

2. Aplicación de la ecuación de Henderson-Hasselbalch:

La constante de disociación de un grupo carboxilo es llamada K1, no Ka, porque la molécula contiene un segundo grupo
titulable. La ecuación de Henderson-Hasselbalch puede ser usada para analizar la disociación del grupo carboxilo de la
alanina de igual manera como se describió para el ácido acético.

K1= [H+] [II]

[I]
donde I (ver figura 1.9 en el libro) es la forma totalmente protonada de la alanina, y II es la forma isoeléctrica de la alanina.
Esta ecuación puede ser reorganizada a:

pH = pK1 + log [II]

[I]

3. Disociación del grupo amino:

El segundo grupo titulable de la alanina es el grupo amino ( -NH3 ) .Ver libro figura 1.9. este en un ácido mucho más
débil que el grupo COOH y por tanto tiene una constante de disociación más pequeña (K2). Nota: su pKa es, por tanto, más
grande. La liberación de un protón a partir de un grupo amino protonado de la forma II resulta en la forma totalmente
deprotonada de la alanina, la cual es la forma III. Ver figura 1.9 del libro.

4. pKs de la alanina:

Las disociaciones secuenciales de protones a partir de los grupos amino y carboxilo de la alanina están resumidos en la
figura 1.9. Cada uno de los grupos titulables tiene un pKa que es numéricamente igual al pH al cual exactamente la mitad de
los protones han sido removidos de ese grupo. El pKa para el grupo más ácido COOH es el pK1, el pKa para el grupo
siguiente más ácido (NH3+) es el pK2.

5. Curva de titulación de la alanina:

Aplicando la ecuación de Henderson Hasselbalch a cada grupo ácido disociable, es posible calcular la curva de titulación
completa del ácido débil. La figura 1.10 (ver libro) muestra el cambio en el pH que ocurre durante la adición de una base a la
forma totalmente protonada de la alanina (I) para producir la forma completamente deprotonada (III). Note lo siguiente:

a. par buffer: el par COOH/COO- puede servir como un buffer en la región de pH cerca del pK1 y el par NH3+/NH2
puede amortiguar en la región cerca del pK2.
b. Cuando el pH es igual al pK: cuando el pH es igual al pK1 (2.3) iguales cantidades de las formas I y II de la alanina existen
en la solución. Cuando el pH es igual al pK2 (9.1), iguales cantidades de las formas II y III están presentes en la solución.
c. Punto isoeléctrico: a pH neutro, la alanina existe predominantemente en la forma dipolar II en la cual los grupos amino y
carboxilo están ionizados, pero la carga neta es cero. El punto isoeléctrico (pl) es el pH al cual un aminoácido es
eléctricamente neutro, esto es, donde la suma de las cargas positivas iguala la suma de las cargas negativas. Nota: para un
aminoácido como la alanina el cual sólo tiene dos hidrógenos disociables (uno del grupo carboxilo alfa y otro del grupo
amino alfa), el pl es el promedio de pK1 y pK2: pl= [2.3 + 9.1 /2 =5.7. ver figura 1.9. El pl es el punto medio entre pK1
(2.3) y pK2 (9.1). este punto corresponde al pH donde la estructura II (carga neta de cero ) predomina, y en donde
existen también iguales cantidades de la forma I (carga neta de +1) y de la forma III (carga neta de –1).

6. CARGA NETA DE LOS AMINOACIDOS EN PH NEUTRO:

 A pH fisiológico, todos los aminoácidos tienen un grupo cargado negativo COO- y un grupo positivamente cargado
NH3+. Ellos son entonces iones bipolares (zwitterion ). Nota: las sustancias como los aminoácidos que pueden actuar tanto
como un ácido o como base son definidos como anfotéricos y son referidas como anfolitos (electrolitos anfotéricos).

C. TITULACION DE LAS HISTIDINA

La histidina es un ejemplo de un aminoácido que contiene 3 grupos químicos los cuales pueden reversiblemente
ganar o perder un protón : el grupo carboxilo, el grupo imidazol de la cadena lateral, y el grupo alfa amino. Ver figura 1.11 en
el libro. Nota: el grupo R o sustituyente de la histidina tiene un pK2 de 6.0 y puede servir como un buffer a pH fisiológico.

1. Curva de titulación de la histidina:

La adición sostenida de una base a la histidina totalmente protonada resulta en la liberación secuencial de protones del
grupo carboxilo (pK1= 1.8), el grupo imidazol (pK2= 6.0), y el grupo amino (pK3=9.2). La curva de titulación es mostrada en
la figura 1.2.

2. Punto isoeléctrico de la histidina:

El punto isoeléctrico (pl) para la histidina es calculado primero identificando la forma isoeléctrica ( la cual tiene una carga
neta de cero) del aminoácido ( forma III de la figura 1.11) y luego promediando los valores de los pKs más cercanos.

Pl= (pK2 +pK3) = (6.0 + 9.2) = 7.6

2 2

Este cálculo requiere que la forma isoeléctrica sea identificada. Esto depende en conocer el orden en el cual los protones se
pierden a partir de un aminoácido en particular, porque este orden determina los cambios de las formas intermediarias. Los
valores de pKa para los grupos sustituyentes de algunos de los 20 aminoácidos más comúnmente encontrados son mostrados
en la figura 1.2 y 1.5.