LABORATORIO DE GENETICA: EXTRACCIÓN DE ADN Y

ELECTROFORESIS
Molina Jennifer1; Ortega Katherine2; Serpa Jorge3 y Terraza Yasleidis4.
terrazacrespo17@gmail.com.
Universidad del Magdalena; Facultad de Ciencias Básicas; Programa de
Biología

Resumen
La extracción de ADN es uno de los primeros procesos que se realizan a la hora
de efectuar diagnósticos, los cuales se pueden utilizar en la identificación de
bacterias, virus, plantas presentes en el medio ambiente. Consiste en la
separación y purificación del ADN con el fin de estudiarlo y analizarlo, se basa
en las características fisicoquímicas de la molécula, en este informe se realiza
la extracción de ADN a partir de tejido de plantas es necesario tener en cuenta
el tipo de planta y de tejido que se va a emplear como fuente, el tipo de ADN
que se va a extraer debido a que las plantas poseen tres tipos de ADN,
también es necesario determinar qué tipo de análisis se va a realizar ya sea
RFLP, RAPD, AFLP, secuenciación, etc. Como resultado se
obtuvo………….
Abstract
The extraction of DNA is one of the first processes that are carried out at the
time of making diagnoses, which can be used in the identification of bacteria,
viruses, plants present in the environment. It consists in the separation and
purification of DNA in order to study and analyze it, it is based on the
physicochemical characteristics of the molecule, in this report the extraction of
DNA from plant tissue is done, it is necessary to take into account the type of
plant and of tissue that is going to be used as a source, the type of DNA that is
going to be extracted because the plants have three types of DNA, it is also
necessary to determine what type of analysis is going to be done, either RFLP,
RAPD, AFLP , sequencing, etc. As a result, it was obtained
Palabras Claves
Extracción de ADN, ADN, Tejido vegetal, Método de extracción,
electroforesis.
Keywords
Extraction of DNA, DNA, plant tissue, extraction method, electrophoresis.
INTRODUCCIÓN
El ADN es una estructura química
cuyos elementos fundamentales
(nucleótidos) no suele existir como
una molécula individual, sino como
una pareja de moléculas
estrechamente asociada (Rocha,
2002). La extracción de ADN es uno
de los primeros procesos que se
realizan a la hora de efectuar
diagnósticos, los cuales se pueden
utilizar en la identificación de
bacterias, virus, plantas presentes en
el medio ambiente (Checa, 2016).
La extracción consiste en la
separación y purificación del ADN
con el fin de estudiarlo y analizarlo,
se basa en las características
fisicoquímicas de la molécula, son
numerosos los distintos procesos
que se han desarrollado para la
aplicación de extracción de ADN
esto se hace para poder asegurar la
cantidad y calidad garantizando la
eliminación de inhibidores
potenciales que dificulten el
tratamiento posterior de la
extracción. La selección del método
de extracción es un paso
fundamental en las técnicas
moleculares y depende del
organismo en el que se realiza el
estudio, el tejido disponible y su
estado de conservación.
En este informe se realiza la
extracción de ADN a partir de tejido
de vegetal, es necesario tener en
cuenta el tipo de planta y de tejido
que se va a emplear como fuente, el
tipo de ADN que se va a extraer
debido a que las plantas poseen tres
tipos de ADN: el nuclear, el
mitocondrial y el cloroplástico.
Reciben estos nombres
dependiendo del tipo de organelo
celular en el que el ADN se
encuentre también es importante
determinar que tipo de análisis se va
a realizar que puede ser RFLP,
RAPD, AFLP, secuenciación, etc.
El objetivo principal en un
experimento de extracción de
ADN es obtener una preparación
de buena calidad y en gran
cantidad. La calidad se refiere a
la posibilidad de almacenar el
ADN por tiempo indefinido,
manteniendo su estructura y
propiedades ya que es la calidad
de este el factor responsable de la
reproducibilidad en experimentos
posteriores. La cantidad por su
parte, es un concepto relativo que
depende entre otros, del número y
estado de las células propias del
tejido a estudiar. Por lo tanto,
como regla general un buen método
de extracción debe mantener la
integridad física y bioquímica del
ADN e incrementar sus rangos de
pureza (Rocha, 2002).
Una vez realizado los pasos de la
extracción del ADN y haber
ejecutado cada uno de sus procesos,
se pasa a realizar la electroforesis
este método es de alta sensibilidad,
poder de resolución y versatilidad, y
sirven como método de separación
de mezclas complejas de ácidos
nucleicos, proteínas y otras
biomoléculas, donde aportan un
potente criterio de pureza (Pérez,
2000).
El objetivo de este laboratorio es
extraer ADN de una muestra de
tejido biológico o tejido vegetal en
este caso la extracción se realizó con
5 plantas Pitomonal, Perejil, planta
acuática, Azar de la india y Begonia.
METODOLOGIA
Para la realización de esta practica
de laboratorio se siguió al pie de la
letra uno de los protocolos de
extracción de ADN expuestos en la
guía de trabajo y contando con el
acompañamiento y asesoría del
docente encargado.
Se colectaron cuatro especies de
plantas 1. Petroselinum crispum,2.
Epipremum aureum, 3.Murraya
paniculata., 4. Begonia aconitifolia.
Las 4 muestras vegetales escogidas
como objeto de esta experiencia
fueron primeramente maceradas en
un mortero.

A B
C tubos esterilizados. A cada tubo se le
D
Seguidamente haciendo uso de un
bisturí las muestras fueron
porcionadas en pequeños
fragmentos para facilitar su
distribución en tubos de ependorf de
1.5µl. a cada uno de los 4 tubos que
contenían las muestras se le adicionó
400µl de solución lisis y 0.5µl de
proteínasa K, seguidamente se
procedió a incubar a 75°C durante
un periodo de tiempo de 15 minutos
y de inmediato los tubos se agitaron
con bortex durante 10 segundos, al
tiempo las muestras se
centrifugaron a 13.600 rpm durante
10 minutos con el objetivo de
separar el ADN de las proteínas y
otros residuos, el excedente fue
trasferido 450µl del sobrenadante de
cada una de las muestras a unos
agregó 600µl de alcohol etílico
absoluto y luego se agitaron entre
30-40 veces cada uno, enseguida se
centrifugaron a 13.600 rpm durante
10 minutos para lograr precipitar el
ADN, el alcohol etílico absoluto fue
retirado del tubo y haciendo uso de
una micropipeta, se agregó 500µl de
alcohol etílico al 70% para limpiar el
ADN precipitado y nuevamente se
centrifugó a 10.000 rpm por 2
minutos.
Cada tubo contenía 4µl de muestras
de ADN los cuales fueron colocados
un papel parafina para agregarles
2µl de Gel red y mezclarlos, el
contenido de cada tubo fue agregado
en un pocillo del gel de
electroforesis dentro de la cámara de
electroforesis, dicha cámara se
encontraba calibrada a 120V por 25
minutos y estaba llena de TBE,
luego se llevó a la cámara foto-
documentado
RESULTADOS

Gel de electroforesis de cuatro

plantas , para lo cual cada pocillo
corresponde a: 1. Petroselinum
crispum,2. Epipremum aureum,
3.Murraya paniculata., 4. Begonia
aconitifolia.

El producto obtenido de la
extracción revelo que solo contenía
ADN la especie Begonia aconitifolia
en el pocillo 5 lo cual se evidencia el
en gel de electroforesis.

.
DISCUSIÓN
En las cuatro muestras
experimentales de plantas que se
utilizo solo se logró la extracción de
ADN para la especie Begonia
aconitifolia en el pocillo 5 , pero en
los demas debido a la falta de
pureza, es decir que durante el
procedimiento se dañaron las
muestras por algun tipo de
contaminacion. El realizar tales
procesos experimentales no precede
de ser susceptible a contaminantes,
variación y errores por los múltiples
pasos de manipulación (Boom et al.,
1990, Störmer et al. 2007).
Cuando se requiera realizar la
extraccion de ADN de plantas es
recomendable la colecta de tejido
joven ya que este al encontrarse en
su estapa de desarrollo posee mayor
cantidad de celulas algunos autores
mencionan que es necesario la
congelacion de las muestras para
evitar la sintesis de estos metabolitos
La extracción del ADN es la base
para posteriores estudios basados
en la integridad del genoma de las
especies estudiadas y así proceder a
técnicas de edición genómica con el
uso de primers y más aplicaciones
se reconoció entonces el uso de cada
una de las sustancias usadas para
lisar las membranas, inactivar
nucleasas, separar al ADN por su
polaridad, además del
reconocimiento del aislamientodel
mismo gracias a la centrifugación; y
como cada uno de los pasos es de
vital importanciapara la obtención
del ADN.
El reconocimiento de que cada una
de las especies necesita quizá un
tratamiento diferente porla
naturaleza mismo de la composición
del vegetal, puede ser esta la razón
de que en ciertasespecies sea menos
visible el patrón de bandas; La
técnica de electroforesis en gel de
agarosa consta como una de las más
básicas de uso en laboratorio y por
lo tanto que debe ser del
conocimiento de los estudiantes.

Cuestionario
1. Durante el protocolo se utilizó proteinasa K, proceso en el cual se
incuba la solución de extracción a 65°C ¿Cuál cree usted que sería el fin
de agregar esta enzima? ¿Qué consecuencias podría traer para el
proceso la omisión de la fase de incubación?
 R// la proteinasa K se agrega con el fin de eliminar la proteína de la
muestra. El hecho de no incubar no se efectúa el proceso de
rompimiento de la lisis.

2. ¿Cuál es el mecanismo químico mediante el cual el etanol produce la

precipitación de DNA? ¿Qué pasaría si durante este proceso la solución
de extracción no se refrigera?
R// mecanismo de acetato de amonio.
Si no se refrigera no se podrá para poder recuperar la mayor cantidad
de DNA posible, esto ayuda a evitar la co-precipitación de las sales.

3. ¿Cómo podría asegurarse que el material extraído realmente es DNA?

R// El ADN que ha sido extraído de un tejido debe ser cuantificado
y su calidad verificada. El método más empleado para la
determinación simultánea de estas características es la
electroforesis en gel de agarosa

4. ¿Cuál podría ser la diferencia entre protocolos usados para extraer ADN
de bacterias, levaduras y células de plantas?
Protocolos de extracción de Diferencias
ADN
Bacterias . Las células recolectadas son
lisadas, generalmente mediante el
uso de reactivos químicos como la
lisozima, detergentes, seguido de
la eliminación de componentes
celulares utilizando el método de
extracción por disolvente, o
tecnología basada en sílica. El
último paso conlleva la
precipitación del ADN para
obtener ADN puro y en alta
concentración.
Levaduras Posee un sistema de purificación
de ADN genómico en fase liquida
y utiliza detergentes no tóxicos y
sales.
Células de plantas Utilizar tiocianato de guanidinio
(TICG), que ayuda en la
 purificación de ADN vegetal de
dos maneras. En primer lugar,
desnaturaliza y disuelve proteínas,
desintegra estructuras celulares, y
disocia nucleoproteínas presentes
en los ácidos nucleicos. Debido a
esta propiedad, el TICG puede ser
utilizado para extraer el ADN de
prácticamente cualquier tipo de
tejido. En segundo lugar, el ADN
se une fuertemente a partículas de
sílica en presencia de TICG.

5. ¿Cómo podría cuantificar la concentración de ADN en la solución final?

R// Para estimar la concentración es recomendable utilizar un
espectrofotómetro.

6. ¿Cómo podría saber si hay proteínas contaminando el ADN extraído?

R// Si el ADN extraído tiene contaminación no se da la precipitación
luego de haber centrifigurado la muestra del ADN.
Bibliografia
Checa Rojas, A. (2016, 22 de Junio) Extracción de ADN. Conogasi,
Conocimiento para la vida. Fecha de consulta: Mayo 1, 2019
Alberto Checa Rojas. (2016). Extracción de ADN. 2019, Mayo 1, Conogasi.org
Sitio web: http://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn/Carbajal A.2013.
Extracción y purificación de ADN.
Pérez H.2000.Electroforesis en geles de poliacrilamida: fundamentos,
actualidad e importancia. Universo Diagnóstico. Vol1(2).Pp 31-4.
Rocha P.2002. Teoría y práctica para la extracción y purificación del ADN
de palma de aceite. Palmas. Vol 23(3). Pp 1-16.