Esterilización (microbiología)

Se denomina esterilización al proceso validado por medio del cual se obtiene un producto
libre de microorganismos viables. El proceso de esterilización debe ser diseñado, validado y
llevado a cabo de modo de asegurar que es capaz de eliminar la carga microbiana del
producto o un desafío más resistente.
Los agentes que matan microbios son denominados microbiocidas (cida= “matar”) o más
comúnmente denominados “germicidas”. Si el agente específicamente destruye bacterias, es
llamado bacteriocida; si mata hongos es denominado fungicida. Como sea después de
exponer el objeto esterilizado al aire o a sus alrededores, éste otra vez se habrá contaminado
con microorganismos.
Limpieza: remoción de toda materia ajena al objeto. Se lleva a cabo con agua, detergentes y
acción mecánica. Precede a todo proceso de esterilización y desinfección.

Decontaminación: procedimiento que hace segura la manipulación y el uso de un dispositivo,

aparato o instrumento, como así también superficies ambientales. Se puede realizar por
esterilización, desinfección o limpieza.

Esterilización: es el proceso mediante el cual se eliminan todas las formas de vida incluyendo las
esporas bacterianas. Se realiza por métodos físicos o químicos.

Desinfección: es el proceso por el cual los organismos patógenos, pero no necesariamente las
esporas, son destruidos. Como la esterilización, debe realizarse por métodos físicos o químicos.

Antisepsia: procedimiento mediante el cual se emplea un agente químico sobre superficies

animadas (piel o tejidos vivos) a fin de inhibir o destruir a los microorganismos.

Esterilización es eliminar toda forma de vida microbiana tanto de bacterias como de hongos o
de virus. Incluye las formas vegetativas y las esporas que son las formas de resistencia.
Este proceso se aplica en muchos campos como en la Industria alimenticia, farmacéutica y en
los laboratorios para esterilizar materiales de vidrio, guantes, etc.
Existen muchos métodos para esterilizar. Podemos clasificarlos fundamentalmente en:
Métodos Físicos – Métodos Mecánicos – Métodos Químicos.

Métodos Físicos:
Dentro de los físicos podemos mencionar a los que usan calor y a los que usan radiaciones.

Métodos con calor:

Calor húmedo: Se utiliza el vapor de agua como agente esterilizante. Este es producidos por
un aparato llamado autoclave. El autoclave es un dispositivo que consta de un tambor
cilíndrico en cuyo interior se genera calor gracias a una caldera que contiene agua. El vapor
generado asciende y atraviesa una malla metálica porosa que tiene en su parte superior a los
materiales a esterilizar.
Los 2 parámetros importantes a regular son el tiempo y la temperatura. La temperatura que se
maneja es de unos 121 °C a 1 atmósfera de presión. A esta temperatura se eliminan todos los
microorganismos. Se pueden variar los tiempos dependiendo de los materiales que se
coloquen. Por ejemplo algunos requieren 15 minutos y otros 45 minutos.
Los materiales se envuelven en papel tratando de hacerlo lo más hermético posible. De esta
manera el vapor penetrara más y actuara mejor en los materiales. El vapor de agua daña el
metabolismo del microorganismo y lo destruye por las altas temperaturas.

Calor seco: En este caso el calor se propaga a través del aire. No es tan penetrante como
en el caso anterior. Por lo tanto se debe esterilizar a temperaturas mayores a 120°C para
lograr la misma eficacia. No es recomendado para esterilizar soluciones que tengan contenido
acuoso como algunosproductos de farmacia o alimentos. Pero si se puede
esterilizar productos secos o material de metal ya que a diferencia del calor húmedo, al no
haber vapor de agua no hay riesgos de oxidación. Para este método existen las estufas.
Tienen dispositivos para regular la temperatura y también algunos tienen para mantener una
convección interna de aire para homogeneizar la transmisión del calor.
Otros métodos usados con calor son el flameado directo y la ebullición.
Esterilización por Radiación:
La radiación permite esterilizar mediante la transmisión de ondas que generan la destrucción
de los microorganismos. Existen distintos tipos de radiaciones.
Radiación ionizante: Este tipo de radiación genera sustancias que son un veneno para el
metabolismo bacteriano.
Radiación ultravioleta: Afecta en la superficie y ataca principalmente a las moléculas de
ADN. Es ideal para esterilizar material de quirófano.
Radiación Gama: Es ideal para esterilizar contenidos enlatados
como alimentos o productos de farmacia que estén cerrados.

Métodos Mecánicos:
Dentro de los métodos mecánicos podemos citar a la Filtración. Existen muchos tipos de filtros
en el mercado. El éxito dependerá del tamaño del poro, ya que según el tamaño podrán
quedar retenidos los microorganismos en el filtro.

Métodos Químicos:
En este caso existen productos biocidas, es decir, que eliminan a todo microorganismo por
envenenamiento de un producto químico con o sin intervención del calor.
Algunos muy usados son el Glutaraldehído, los aldehídos, la formalina, la lavandina al 10%,
etc. En el caso del glutaraldehído no hay necesidad de aplicar calor sino que se puede hacer
en frío sumergiendo los materiales en una solución al 2% y dejarla actuar un buen tiempo.
Los métodos químicos son efectivos para la desinfección de manos y el lavado de mesadas

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más
importantes son aquellos que se basan en:

a) Su consistencia

b) Su utilización

c) Su composición

d) Su origen

SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA).

1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por
esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo,
compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza
fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana
de una determinada concentración.

2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un

agente gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una
proteína animal obtenida de los huesos. Agar-agar:Es un polímero de azúcares
obtenido de algas marinas.

3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a

éstos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios
sólidos.

SEGÚN SU UTILIZACIÓN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para
que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos
especiales.

2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias

nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el
crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por
adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis,
etc.) que aportan dichos factores.

3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de

ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de
estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una
población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo
selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el
del resto de enterobacterias.

4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo

impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se denomina
inhibidor. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adición de
sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el
desarrollo de una población determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey
que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el
crecimiento de los Gram positivos.

5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características

bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies. La adición de un
azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio
MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los gérmenes que
fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen.

6) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad

específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un
microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para
asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato específico que vaya a
ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado

7) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a

partir de un microorganismo ya aislado. Seemplean en la obtención de vacunas,
en la investigación y en la industria. Los medios más adecuados para la
multiplicación suelen ser líquidos.
8) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa,
Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y
reactivos utilizados en elLaboratorio de Microbiología

9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no

pueden sembrarse inmediatamente.

ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN.

Según las sustancias que entren a formar parte en su composición, los medios de
cultivo pueden ser clasificados en:

1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los más empleados se

preparan a partir de tejidos animales, y más raramente de vegetales.

2) Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición

exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en
proporciones determinadas, resultando un medio de composición perfectamente
definida.

3) Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos

para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos
gérmenes sea imposible o demasiado cara.

Según su origen:

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen

animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición
química no se conoce exactamente.
b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química
definida cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
c) SEMISINTÉTICOS: son los sintéticos a los que se les añaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo
extracto de levadura.

DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de gérmenes que no
presentan exigencias particulares. No es diferencial.
Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza además para la
investigación de los diversos tipos de hemólisis(α, ß ó gamma ). Se utiliza para el
crecimiento de estreptococos

Agar S.S.:El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de

Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales.

Agar Hektoen :Es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar SS.

MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de

microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar

sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y
multiplicarse para dar colonias.

Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones
extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad de nichos
ecológicos. Entre los requerimientos más importantes para su desarrollo están el carbono, el
oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del
aporte extra de factores de crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto de
levadura entre otros.