Nanomedecine for nucleic acid delivery

Genetic therapy Nucleic acids are introduced into cells to counteract the effect of a disease gene.

Used in different field such as therapy for cancers, infectious disease, immune disease...

There are three types of gene therapy :

- Monogenic gene therapy : provides genes to encode to a specific protein.

- Suicide gene therapy : provides suicides genes to kill cancer cells.
- Antisens gene therapy : provides a single stranded gene in an antisens to block the
production of harmful proteins. Exemple : AIDS/SIDA.

How can we transfer genes ?

Nous pouvons transférer ces genes soit « in vivo » soit « ex vivo ».

« In vivo » : the gene is « packaged » into a virus and injected into the patient, in a target organ.

« Ex vivo » : we removed stems cells (generally from a patient), we do a culture and we transfer the
gene « packaged » into a virus. These cells are genetically modified == > multiplication in the
laboratory and readministrated in the patient. Il n’y a pas peu ou de réponse immunitaire.

We use usually « Virus vectors ».

Virus is the best carrier. The virus is generally disactivated. Nowadays, virus are the more efficient to
date. Virus stabilizes the gene but the problem are :

La réplication des virus défectueux affecte négativement la capacité normale du virus à propager des
gènes dans le corps : viral binding ligand on cell-surface.

There are different type of virus vectors :

- Retroviruses : single strand RNA that stores its nucleic acids in the form of mRNA genome.
Process of reverse transcription when in the cell.

- Lentiviruses : longue période d’incubation. They are able to infected non-dividing cells.

- Adénovirus : Non envelopped virus, double DNA strand, icosahédral nucléocapside. Le virus
au bout de 5 minutes est endocyté et perd ses récepteurs. Ensuite le virus pénètre dans le
noyau.

- Herpès simplex : double-stranded, linear DNA genome encased within an icosahedral capsid,
which is wrapped in a lipidbilayer. It looks like to adénovirus.

- Adéno-associated virus : Adéno-associated virus (AAV) : small simple virus, weak immune
response, not known to cause virus. There are very cool for medical applications.
Limitations :

- Immune hypersensitivy reaction directed against viral components or transgenes expressed

in treated cells.
- Duration of gene activity.
- Mitosis required.
- Non-integrating delivery will be transient (transient expression).
- Size of the virus.

Non viral gene delivery :

Chemical methods :

- Polymers,
- Cationique liposome.

Physical methods :

- gène gun
- Ultrasound
- Electroporation : a significant increase in permeability of the cell plasma membrane caused
by an internally applical field.
- Magnetofection : Magnetofection est une méthode de transfection simple et hautement
efficace qui utilise des champs magnétiques pour concentrer les particules contenant de
l'acide nucléique dans les cellules cibles.

Efficiency of this system is less than viral vectors.

Plasmid : Small circular ADN and can replicate independantly and autonomously in a host cell.

Small interfering RNA (siRNA) : - class of double-strain RNA molécule, 20-25 pb in length ==> interfer
with the expression of specific genes with complementary nucléotides sequences and avoid
translation ==> Stop the express of the final protein.

Polyplex : Polymers + Sirna or plasmid.

Lipoplex : Cationic liposome + SiRNA or plasmid

The siRNAs and DNA plasmids have negative charge so there have to interact with positive charge
like cation liposome and positive polymers.

Mécanisme : endocytose. The nucleic acid-carrier complex has to escape from the endosomal
compartment and release their cargo into the cytoplasme.

« The proton sponges effect »

Proton pomps and acidification of the endosome. The proton pumping action is followed by passive
chloride entry increasing ionic entry and water influx. Osmotic pression causes the swelling and
rupture of endosome.
« Flip flop mechanism »

Lipoplexes are endocyted and become entrapped inside the early endosome. Electrostatic
interaction between the plasma membrane and the positively charge liposome. The nucleic acids
entry into the membrane.

Photosensitizers :

Photosensitizers are bind to the plasma membrane and there are confined in the endosome. With
light, break up of highly reactive oxygen species.

Donc comment faire rentrer de l’ADN dans le noyau ?

- Nous pouvons faire rentrer de l’ADN dans la membrane plasmique grâce à différentes
méthodes comme :
- FLIP FLOP
- PHOTOSENTITIZERS
- SPONGES PUMP

Nuclear delivery :

Pore complex inside the nuclear. It is a big barrier.

Mais comment le faire rentrer dans le noyau ?

L’enveloppe nucléaire contient des pores nucléaires permettant la libre diffusion jusqu’a 50 kDA
correspondant à un diamètre de 10 nm. Ces ouvertures sont généralement trop petites pour la
diffusion de plasmides et de nanoparticules. On n’a pas compris comment les plasmides traversaient
le noyau. The transcient disassembly of the nuclear envelop during cell mitosis would be responsible
for random inclusion of nanoparticules.

Un signal de localisation nucléaire (SLN) ou NLS (de l'anglais Nuclear localization sequence) est une petite
séquence d'acides aminés (8 à 10 acides aminés) qui cible les protéines vers le noyau de la cellule. Les
protéines portant un signal de localisation nucléaire sont reconnues par la protéine importine dans
le cytosol et sont guidées vers les pores nucléaires.

PEI = Polyéthylèneimine is a polymer cross linked which is a non-viral vector which lead to a big leap.
Transfection is more efficient.compared to other early polymeric vector.

The intreoduction of ( PEI) est un polymeère hyepr brancher. apparement c ;esy bien pour le faire
rentrer dans le noyau la polybranche est fait faire des ponts disulfures. ATRP ; ET CA peut
commencer par un sucre.
La Beta-cyclodextrine sont des sucres. La partie hydrophobe se trouve à l’intérieur et la partie
hydrophile se trouve à l’extérieur. La cyclodextrine va être lié à un polymère, un polymère chargé
positivement.

I-ISA : potentielly dangerous. radioactive.il faut faire attention la cocnentration entre la

cocnentration de DNA et la concentration de polymers. il faut faire auss attentinn a la taille.

été internalisé par les cellules.

Les liposomes :

le dna peut entre z lintérieur de plusiers phospholipideq ; iL faut faire attentiona la concentration ;
chitosan : biomateriaux pour le Dna.peuvent etre crossling with ke TPP ; ENCAPSULTATE DNA and
delivery it.