UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA: EAPIAC

“UNIVERSIDAD NACIONAL DE
CAJAMARCA”

Faculdad: Ciencias Agrarias

Curso: bioquimica

Docente: luis quipuscoa

Alumno: VELASQUEZ ROJAS
NEISER YELSIN .

2019

Docente: Ing. Luis Javier Quipuscoa Castro

Cursos: Bioquímica

1. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Docente: Ing. Luis Javier Quipuscoa Castro

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2. Resumen
Las enzimas son catalizadores biologicos muy potentes y eficaces que aumentan la velocidad de reaccion
en reacciones quimicas presentes en organismos vivos sin alterar este su composicion.

Los enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas en los seres vivos. Los enzimas son
catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una reacción, aumentan notablemente su
velocidad. No hacen factibles las reacciones imposibles, sino que sólamente aceleran las que
espontáneamente podrían producirse. Ello hace posible que en condiciones fisiológicas tengan lugar
reacciones que sin catalizador requerirían condiciones extremas de presión, temperatura o pH.

3. Introducción
Las enzimas son catalizadores que ayudan en muchas reacciones bioquímicas en el cuerpo y fomentan la
salud celular, y son producidas por una parte por el hígado y páncreas. Las enzimas son de importancia
para la digestión de las tres clases principales de alimentos: proteínas, hidratos de carbono y grasas; y el
resto debe ser provenientes de nuestra alimentación diaria.
Las enzimas pueden ser descritas como catalizadores complejos de origen biológicos que tienen un alto
grado de epecificidad y eficiencia, esto permite que las reacciones químicas dentro de la celula ocurran
rápidamente a través de vías bien definidas.
Para poder demostrar la actividad enzimática se debe tener presente fundamentalmente que la acción
catalítica de las enzimas es de carácter especifico, es decir, cada reacción química debe ser catalizada por
una determinada enzima.

Existen diversos tipos de enzimas, cuya funcionalidad es muy variada. Las enzimas contribuyen al
desdoblamiento de las moléculas de los principios nutritivos (proteína, grasa y carbohidrato) en otras más
pequeñas durante la digestión de los alimentos.
Asimismo, facilitan su paso a la sangre a través de la pared intestinal; catalizan la forma con de
moléculas grandes y favorecen el almacenamiento y gasto de energía. Las enzimas, también actúan en las
funciones de la reproducción, procesos de la respiración, y en todos los demás mecanismos orgánicos

4. Objetivos

Los principales objetivos de este laboratorio fueron:

 Demostrar la presencia de azucares reductores a través de la utilización del reactivo de

Benedict.
 Reconocder la conformación del sistema enzimático :Enzima-coenzima-sustrato, y
observar el proceso de la activación enzimatica
 Demostrar la formación de productos como consecuencia de la actividad enzimática de la
amilasa salival.
 Reconocer al NaCl como coafactor de la amilasa salival.

5.Método

A) Equipo y materiales

 Materiales
 Tubos de ensayo (6).
 Gradilla.
 Pipetas graduadas de 1ml, 5ml.
 Pinzas para tubo de ensayo.
 Cocina eléctrica.

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 Incubadora para Baño Maria a 37°

 Reactivos a utilizar

 Solución de almidon pH 6.6 al 1%

 Cloruro de Sodio solución 0.1M
 Enzima al 1%
 Acido cloridrico 0.05N
 Solucion yodada.

B) Procedimiento experimental: el experimento se realiza en tres etapas:

1)ETAPA A:

SISTEMAS
COMPONENTES
I II
Solución almidon 1% pH 6.6 5ml. 5ml.
Solución de cloruro de sodio
1ml. 1ml.
0.1M
Agua destilada 4ml. 3ml.

Paso1: En un tubo de ensayo agregamos solución de almidon 5ml; solución de cloruro de sodio
un 1ml y agua destilada 4ml al tubo A-1. Desde la misma manera agregamos al tubo de ensayo
rotulado A-II pero con la diferencia de agua destilada que fue 3ml.

Paso2: Colocar los tubos al Baño Maria al 37°C por 5 minutos.

Paso3: Agregamos 1ml, de enzima al tubo A-II, sin retirar del Baño Maria. Seguir con el Baño
Maria de agua a 37°C durante 30 minutos.

2)ETAPA B:
De cada uno de los tubos de incubación (de la etapa A) transferir 1ml. de sus correspondiente
del cuadro siguiente (etapa B), inmediatamente de cumplidos los 30 minutos de incubación

SISTEMAS
COMPONENTES
I II
De los tubos I y II: de la
1ml. 1ml.
etapa A.
Acido clorhídrico 1ml. 1ml.
Solucion yodada 0.1ml. 0.5ml.

Paso1: En el tubo B-I y B-II agregamos 1ml de solución del tubo I y II de la etapa A, luego
ácido clorhídrico 1ml y por último solución yodada de 0.5N

3)ETAPA C:

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SISTEMAS
COMPONENTES
I II
De los tubos I y II: de la
1ml. 1ml.
etapa A.
Benedit 1ml. 1ml.

Paso1: En el tubo C-I y C-II agregamos 1ml de solución del tubo I y II de la etapa A, luego
agregamos 1ml de benedit a los dos tubos.

Paso2: Dejamos hervir durante 10 minutos, mezclamos los tubo C-I y C-II.

6.Resultados :
 En el tubo A-1 vemos que hay partículas sedimentadas y en el tubo A-II se observa que
también se sedimenta, hay partículas flotantes.

 Observación: del tubo B-I se observa que se vuelve color marron claro, mientras en el
tubo B-II se observa de color marron mas oscuro con unas pequeñas burbujas.

 Dejamos hervir durante 10 minutos, mezclamos los tubo C-I y C-II.

Observación: después de hervirlo se observa un cambio de color, en el tubo C-I se
vuelve verde esmeralda y el tubo C-II es de color turqueza oscuro.

7.Discusión: debemos tener en cuenta

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 Utilizar una cantidad apreciable de muestra para reconocer la existencia de

dicha muestra.
 Filtrar la muestra hasta obtener la translucida, evidencia la pureza de la
muestra.
8.Conclusiones :
 La presente practica nos permitio determinar que existen reactivos llamados indicadores
capaces de demostrarnos la actividad enzimática a partir de las variaciones del color que
mostraban los tubos después de la reacción

 La enzima amilaza salival tinene la capacidad para degradar el almidon en azucares mas simples
y con caracer reductor como la glucosa, maltosa, etc.

 Reconocimos al NaCl como coafactor de la amilasa salival.

 Demostramos la presencia de azucares reductores a través de la utilización del reactivo
de Benedict.
 Logramos reconocer el sustrato residual utilizando solución yodada.

Cuestionario
 ¿Cómo demuestra usted la presencia del sustrato en los tubos de ensayo?
Demostramos la presencia del sustrato cuando cambia de color
 ¿Cómo demuestra usted si se ha producido o no reacción enzimática en el
experimento realizado?

Todos los ensayos enzimáticos miden el sustrato consumido o el producto

generado en la reacción durante un tiempo.
Existe un gran número de métodos diferentes para medir la concentración de sustrato y
productos, y que muchas enzimas pueden ser ensayadas de diferentes maneras
haitualmente en bioquímica se estudian las reacciones catalizas por enzimas.

Tenemos 4 tipos de experimentos.

a) Medida de la velosidad inicial

Cuando una enzima se mezcla con un gran parte de sustrato, el complejo

intermedio. E-S se genera en una rápida fase inicial transitoria. Después la
reacción a una cinetica constante durante la cual el complejo E-S se mantiene
prácticamente en cantidades en el tiempo y la detecta fisicamentemonitorizada.

b) Medida de progreso de la curva

Este tipo de ensayo se intenta evitar por el error matemático que se puede
introducir y es cada vez menos practicado ampliamente utilizado en los
primeros periodos del estudio de la cinetica enzimática.

c) Medida de la fase transitoria

En estos experimentos se observa el comportamiento de la reacción durante la

rápida fase inicial transitoria en la que el complejo molecuñar intermedio llega
a un perido cinético constante. Estos son los ensayos mas difíciles de realizar
porque requieren uso de técnicas de mezclado y meducion realmente rápido.

d) Experimentos en la fase de equilibrio

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En estos experimentos se perturba una mezcla de enzimas sustrato y products

que han alcanzado el equilibrio quimio por ejemplo combinando la temperatura,
la presión o el pH, el análisis de estos experimentos requiere que la reacción sea
resistible.

 ¿Cómo demuestra usted los productos de la reacción enzimática en el experimento

realizado?
en los diferentes tubos de ensayo los productos son diferentes ya que en algunos se
agrego saliva y en otros no porn eso elom producto final es diferente
 ¿Qué diferencia y/o semenjanza encontró entre los experimentos 4 y 5 para
determinarla actividad enzimática?
La diferencia es que en el primero cambio a color turqueza mientras que en el segundo a
color marron oscuro

9. Referencias Bibliograficas:

https://www.monografias.com/trabajos71/enzimas/enzimas2.shtml
https://ocw.unican.es/pluginfile.php/800/course/section/858/practica_02.pdf
https://www.cac.es/cursomotivar/resources/document/2010/1.pdf
Mayo del 2019

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