Universidad del Mar

Campus Puerto Escondido

Licenciatura en Biología

Cuantificación colorimétrica de concentraciones (reporte de

practica)

Presenta:
H. Iván García Pinacho.

Técnicas Instrumentales

Docente:
M. en C. Silvia Hortensia Arellano García

Puerto Escondido, San Pedro Mixtepec, Oaxaca. a de 20 de Agosto

del 2017
Introducción

La colorimetría es utilizada para medir la longitud de onda y la intensidad de la radiación

electromagnética en la región visible del espectro, es usada extensivamente para la identificación
y la determinación de las concentraciones de sustancias y soluciones que absorben la luz,
utilizando como base teórica la ley de Lambert–Beer, que relaciona la concentración de una
molécula en disolución y la absorbancia (Christian, 2009), lo anterior se resume en la ecuación
𝐴 = 𝜀𝑏𝑐, donde c se expresa en mol/L, b es la anchura de la celda que contiene la disolución de
la sustancia expresada en cm, 𝜀 es la absortividad molar, propiedad característica de cada
sustancia que se atribuye a la cantidad de radiación que absorbe a una longitud de onda
determinada por unidad de concentración, teniendo entonces como unidades L mol-1 cm-1. A partir
de la ecuación mencionada, podemos calcular la concentración de una disolución cuya
absorbancia es conocida, otro método es generar una recta de calibración en la cual por medio de
concentraciones y absorbancias conocidas de la misma disolución a diferentes concentraciones
se puede interpolar o extrapolar la concentración de muestras problema (Mathews & Van Holde,
1998).

Durante la práctica, se determinó la concentración de cobre presente en muestras problema, por

medio de una recta de calibrado utilizando la técnica de colorimetría, formando el complejo con
amoniaco es decir, Cu(NH3)2+ 4 . Es importante mencionar que la absorbancia máxima de dicho
complejo, mezclando 5mL de amoniaco con 8.5mL de Solución de CuSO4 0.1M se encuentra
entre los 550 y 650nm, como se muestra en la gráfica 1.

Grafica 1. Espectro de absorbancia del complejo 𝐶𝑢(𝑁𝐻3)2+

4
.

Objetivos

 Determinar la concentración de muestras problema utilizando la técnica de colorimetría.

 Comprender la utilidad de la técnica de colorimetría.
Material y reactivos

Material Reactivos
 Un vaso de precipitados de
50mL
 8 vasos de precipitados de
100mL
 9 matraces volumétricos de
50mL
 10 celdas para  50 mL de Solución de CuSO4
espectrofotómetro 0.1M*
*Existente (CuSO4 1M)
 Una pipeta graduada de 5mL
 Amoniaco
 Una pipeta graduada de 10mL
 Perilla
 Charola para pesar
 Balanza analítica
 Espectrofotómetro
 8 pipetas Pasteur
Método

1. La disolución patrón de CuSO4 es requerida con una concentración de 0.1M, el reactivo

disponible poseía una concentración 1M, por lo cual se requirió hacer una disolución con
las características requeridas. Tomando en cuenta que el peso molar del CuSO4 es
249.68g, lo cual equivale a una concentración de 1M es decir 249.68 g/L se puede
establecer despejando Mf de la ecuación: Vi x Mi = Vf x Mf, que 0.1M equivale a 24.96
g/L. Para 50 mL de solución, utilizando el mismo razonamiento, usamos una regla de tres
teniendo como resultado que se necesitan, 1.24gr de reactivo para preparar la solución
0.1M de CuSO4. Conociendo esta cantidad, el reactivo es pesado en balanza analítica y
posteriormente se mezcla hasta aforar con agua destilada.
2. A partir de la disolución patrón se preparan diluciones del complejo Cu(NH3)2+ 4 . Se
mezclan 5 mL de amoniaco con 1.0, 2.5, 3.5, 5.0, 6.0, 7.5, 8.5 y 10 mL respectivamente
de la disolución de CuSO4 0.1M, enrazando en un matraz aforado de 50mL con agua
destilada, posteriormente se depositan en un vaso de precipitados rotulado previamente.
3. La solución blanco se prepara agregando en un matraz aforado de 50mL, 5mL de
amoniaco y se enraza con agua destilada, posteriormente se calibra el colorímetro.
4. Para medir la absorbancia, con ayuda de una pipeta Pasteur se llena una celda para
espectrofotómetro por cada disolución, la longitud de onda elegida es de 605nm.

Resultados

La absorbancia y concentración de las ocho disoluciones preparadas (Tabla 1) se utilizan para

generar una curva patrón (Grafica 1), la cual se utiliza como referencia para determinar la
concentración de las muestras problemas.

La concentración de las soluciones es desconocida inicialmente, pero se conoce la concentración

de la solución patrón (0.1 M), al igual que el volumen utilizado de solución patrón en cada una
de las disoluciones, teniendo en cuenta esto, utilizamos la ecuación: Vi x Mi = Vf x Mf, en donde
despejaremos Mf , obteniendo de esta manera las concentraciones.
 V amoniaco V CuSO4 Cu(NH3)2+
4 Absorbancia
Disolución
(mL) (mL) (M) medida
Patrón 1 5 1 0.002 0.103
Patrón 2 5 2.5 0.005 0.354
Patrón 3 5 3.5 0.007 0.473
Patrón 4 5 5 0.01 0.488
Patrón 5 5 6 0.012 0.525
Patrón 6 5 7.5 0.015 0.651
Patrón 7 5 8.5 0.017 0.710
Patrón 8 5 10 0.2 0.766
Problema 1 5 - ? 0.313
Problema 2 5 - ? 0.403
Tabla 1. Datos obtenidos de absorbancia y concentración de las soluciones

0.9
0.8
0.7 0.766
0.71
Absorbancia (UA)

0.6 0.651
0.5
0.525
0.4 0.473 0.488

0.3 0.354
0.2
0.1 y = 33.03x + 0.1454
0.103 R² = 0.921
0
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025
Concentracion (M)
Grafica 1. Recta de calibración con los datos obtenidos

A partir de la recta de calibración se interpola la concentración de las muestras problema, tomando

el valor de la absorbancia medida como referencia, lo cual se muestra en la grafica 2, la
concentración de las muestras problema, son desglosadas en tabla 2.
0.9
0.8
0.7 0.766
0.71
Absorbancia (UA)

0.6 0.651
0.473
0.5
0.525
0.4 0.488 0.004
0.403 problema 2
0.3 0.0065
0.354
y = 31.946x + 0.1639
0.2 0.313 problema 1 R² = 0.924
0.1
0.103
0
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025
Concentracion (M)

Grafica 2. Interpolación de concentraciones problema

 V amoniaco V CuSO4 Cu(NH3)2+
4 Absorbancia
Disolución
(mL) (mL) (M) medida
Problema 1 5 2 0.00436 0.313
Problema 2 5 3.25 0.00556 0.403
Tabla 2 concentración de soluciones problema

Discusión

A partir de los datos obtenidos por espectrofotómetro se genera la gráfica 1 en la cual se expresa
la relación entre la concentración y absorbancia de las disoluciones patrón, esta sirve para
interpolar los valores de concentración de las muestras problema (Tabla 2). Los datos de
concentración de las muestras problema son coherentes con respecto a la absorbancia que
presentan, según la regresión lineal los datos obtenidos presentan un R2= 0,924 lo cual indica una
asociación lineal entre las variables y demuestra que son directamente proporcionales, esta
relación sucede ya que las diluciones son del mismo soluto y las muestras son analizadas
utilizando la misma longitud de onda. El volumen de CuSO4 de las muestras problema es
despejado a partir de la ecuación Vi x Mi = Vf x Mf, despejando Vf , obteniéndose asi los valores
reflejados en la tabla 2, que contiene los resultados finales.

Los resultados obtenidos son semejantes a los esperados, calculados a partir de la ley de Lambert-
Beer. Utilizando la siguiente expresión 𝐴 = 𝜀𝑏𝑐 y a partir de una de los datos de una de las
𝐴
disoluciones patrón se despeja el coeficiente de extinción molar es decir 𝜀 = 𝑏𝑐 , obteniendo que
𝜀 = 70.8, entonces se puede calcular la concentracion de las disoluciones problema ya que en un
𝐴
principio se conocían los datos de absorbancia, dicho de otra forma 𝑐 = , obteniendo entonces
𝑏𝜀
para la muestra 1 una concentracion esperada de 0.00442 M y para la muestra 2 una concentracion
de 0.0056, que son idénticos a la obtenida en la regresión lineal.

Conclusión

La concentración de las muestras problema es obtenida a partir de la curva de calibración, basada

en la absorbancia y concentración de las disoluciones patrón. Es comprobada la ley de Lambert-
Beer, con datos experimentales. La técnica y su utilidad queda comprendida al igual que sus
múltiples usos.

Bibliografía

 Christian, G. D., 2009. Capítulo 16, Métodos Espectroquímicos. En: Química Analítica.
Mexico: McGraw-Hill Interamericana, pp. 457-521.

 Mathews, C. K. & Van Holde, K. E., 1998. Bioquímica. segunda ed. Madrid: Mc-Graw
Hill Interamericana de España, S. A. U..