16/05/2019

INFORME DE PRÁCTICA

Carbohidratos
Kevin Torres Valencia ° Miguel Esteban Pardo Gómez

Introducción Los carbohidratos son compuestos orgánicos que contienen carbono,

hidrógeno y oxígeno, y muchos de ellos contienen elementos en la relación de Cn (H2O)n.
Estos compuestos se pueden clasificar de acuerdo al grupo funcional que posee (aldosas y
cetosas), al número de átomos de carbono (3C: triosas, 4C: tretrosas, 5C: pentosas, 6C:
hexosas, etc), y de acuerdo al número de monosacáridos que lo conforme (azúcares simples
o monosacáridos, si se unen dos monosacáridos forman un disacárido; si se unen de 3-20
monosacáridos resulta un oligosacárido y cuando se unen numerosas unidades de
monosacáridos, constituyen un polisacárido como por ejemplo los almidones, celulosas,
pectinas, quitinas, etc).
Resumen En el procedimiento realizado, se buscó cuantificar la cantidad de azucares
presentes en una muestra de yogurt (alpina) sabor a melocotón, realizada mediante el método
DNS.
Fundamento teórico El método DNS es una técnica colorimétrica en la cual se emplea acido
3,5 dinitrosalicílico para la hidrolisis de polisacáridos presentes en una muestra. Determina
las absorbancias por medio de un espectrofotómetro de 540 nm. Esta técnica sirve para
cuantificar los productos de una reacción enzimática. La curva de calibración es la
representación grafica en un eje de coordenadas, de la absorbancia (eje Y) frente a la
concentración (eje X). Se ensayan varias soluciones de concentración conocida y se
determinan sus absorbancias, construyéndose a curva de calibración, la cual es una recta. La
concentración de una solución problema (desconocida), se averigua por interpolación de la
absorción de la solución en la curva de calibración, o a través de la ecuación de la recta
(y=mx+b) donde: Absorbancia (y) = constante (m) x concentración + absorbancia del blanco.
El DNS reacciona únicamente con los azucares reductores. La sacarosa es un disacárido no
reductor, sin embargo, tras su hidrolisis en medio acido se libera glucosa y fructosa que sí
son reductores y reaccionan con el DNS generando un producto coloreado. La intensidad del
color, que se puede medir por métodos espectrofotométricos es proporcional a la
concentración de la sacarosa.
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Objetivos
General
 Aplicar y entender los métodos para la identificación cualitativa y cuantitativa de
algunos carbohidratos

Específicos
 Entender la técnica de Benedict en presencia de azúcares reductores.
 Entender mediante el método de Lugol la presencia de almidón.
 Desarrollar destrezas en la preparación de muestras y curvas de calibración en la
aplicación del método DNS para la cuantificación de azúcares reductores.



Materiales y reactivos
Materiales
 15 tubos de ensayo sin tapa
 Placa de calentamiento
 Beaker 250 ml
 Recipiente con hielo
 Pipeta Pasteur
 Espectrofotómetro
 Cubeta espectrofotométrica
 Pipetas de 1; 2 y 5 ml
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 Pipeteador
Reactivos
 Glucosa [4g/L]
 Reactivo DNS
 Yogurt Alpina (Melocotón)

Procedimiento del método DNS

Tanto para los patrones de la curva, como para la muestra problema y el blanco (agua), se
procede de la siguiente forma:
 A 0.5 ml de la muestra, adicionar 0.5 ml de reactivo DNS, agitar todas las muestras.
 Calentar las muestras en baño de maría durante 5 minutos y enfriar rápidamente con
hielo.
Cuantificación de la muestra

 Adicionar 5 ml de agua destilada, agitar y dejar en reposo en la oscuridad durante 15

minutos.
 Finalmente se lee la absorbancia a 540 nm. Se realiza la curva de absorbancia vs.
concentración.
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De acuerdo con la tabla de información nutricional en la etiqueta del yogurt, se encuentra

que cada 150 g de yogurt contienen 12 g de azúcar (concentración expresada en peso a
peso), de acuerdo con esto, se procedió a consultar en la web un valor de densidad teórica,
obteniendo un valor 1030 g/L, de acuerdo con este valor, se realizaron los cálculos
respectivos para obtener una concentración expresada en g(de azúcar)/L(de yogurt),
obteniendo un valor de concentración de azúcar de 82.4 g/L.
𝑝 12 𝑔𝑎𝑧𝑢𝑐𝑎𝑟 1030 𝑔 𝑦𝑜𝑔𝑢𝑟𝑡 82.4 𝑔
[ ]= ∗ =
𝑣 150 𝑔 𝑦𝑜𝑔𝑢𝑟𝑡 1𝐿 𝐿

Como la curva patrón tiene un intervalo entre 0 g/L y 4 g/L, y como la concentración teórica
de la cual se dispone se encuentra fuera del intervalo de la curva patrón, se debió diluir la
muestra para que el valor de concentración este entre los valores de la curva. Mediante la
regla de oro, se obtiene un dato mayor, el cual corresponde al valor teórico; un dato
intermedio que corresponde a 8.24 g/L (diluido 10 veces); y un dato menor que corresponde
a 0.824 g/L (diluido 100 veces).
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2
𝑔
(82.4 𝐿 ) ∗ (0.5 𝑚𝑙)
𝑃𝑟𝑖𝑚𝑒𝑟𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛: 𝑉2 = 𝑔 = 5 𝑚𝑙
(8.24 𝐿 )
𝑔
(8.24 𝐿 ) ∗ (0.5 𝑚𝑙)
𝑆𝑒𝑔𝑢𝑛𝑑𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛: 𝑉2 = 𝑔 = 5 𝑚𝑙
(0.824 𝐿 )

Siguiendo la ecuación C1V1 = C2V2, se tomó 0.5 ml de muestra pura (yogurt sin diluir) de
los cuales se conoce la concentración, y se debe llevar a una concentración 10 veces menor,
con lo cual se debe hallar un volumen al cual se tenga que diluir. De acuerdo con esto, se
determino que se debía diluir a 5 ml, sin embargo, el dato mayor aun no entra en el rango
de la curva, por ende, se debió realizar otra dilución para que el dato entre en el rango, el
cual arroja que la dilución se debe hacer a 5 ml.
Obtenidas las diluciones a las cuales se deben llevar las muestras para que entren en el
intervalo de la curva patrón, se realiza la gráfica de absorbancia vs concentración, para así
hallar una concentración experimental, la cual comparemos con el valor hallado en la tabla
nutricional del empaque del yogurt.

Concentración (g/L) Absorbancia a 540 nm

0 (Blanco) 0
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0,25 0,061

0,5 0,153

1 0,418

2 0,693

4 1,210

Muestra 1 (8,24) 1,942

Muestra 2 (0,824) 0,347

Absorbancia vs. Concentracion

1.4
y = 0.3063x + 0.0269
R² = 0.986
1.2

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5

Con una interpolación lineal con el dato de absorbancia obtenido (0.347), de la muestra
diluida 100 veces, se obtiene un dato experimental de 0.866 g/L.
0.866 − 0.82
𝐸= ∗ 100% = 5,311%
0.866
Conclusiones
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 Una posible causa del error obtenido pudo ser el valor de densidad teórica utilizado,
ya que tal valor de densidad no corresponde precisamente a el yogurt utilizado, sino
que fue un dato que ya se tenía establecido, un dato extraído de la web.
 Se determinó que como las muestras contenidas en los tubos de ensayo recibieron
contacto directo con la luz, entonces tal hecho supone una posible causa de error en
el resultado, ya que el procedimiento establecía que las muestras debían recibir el
mínimo contacto con la luz.
 De acuerdo con los resultados obtenidos a partir de la interpolación, se determinó que
el contenido de azucares en el yogurt, es mayor al contenido establecido en la etiqueta
de este.

Bibliografía
Ladera, J. (2010). Caracterización físicoquímica y sensorial del yogurt. Lima.
Magallanes, A. (Agosto de 2014). www.prezi.com. Obtenido de
https://prezi.com/jgnoejnnebir/determinacion-de-azucares-reductores-por-el-metodo-dns/
Rodriguez, G. (Mayo de 2019). es.slideshare.net. Obtenido de
https://es.slideshare.net/vegabner/determinacin-de-azcares-reductores-por-
espectrofotometra-mtodo-dns