Sistema ABO y Discrepancias

Ana Claudia Peron

Gerente Cientifica Bio-Rad para América Latina
ana_peron@bio-rad.com
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Sistema ABO - Consideraciones

• 1900 Landsteiner describió el primero grupo sanguineo,

• El Sistema ABO
 A, B y O (primeramente llamado C)
• 1902 AB fue identificado por De Castello y Sturli.
• 1930 Landsteiner recebió el premio Nobel.
• 1960 Watkins propuso que 2 glicosiltransferasis estaban
involucradas.
• 1990 Yamamoto clonó en gene ABO.

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Sistema ABO - Consideraciones

• Los Antígenos ABO son antígenos de histocompatibilidad.

• Cuando el indivíduo es secretor podemos encontrar los
antígenos en distintos tejidos

• Antígenos
– A (ABO 1);
– B (ABO 2);
– AB (ABO 3);
– A1 (ABO 4)

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Sistema ABO - Consideraciones

N°. 001
Nombre del sistema ABO
Símbolo del sistema ABO
Nombre del Gene ABO
Ubicación en LA cromosoma 9q34.2

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 Sintesis deL Carbohidrato

Gene
Genetic level

Asa Helberg, TSC, 2017 - Brasil

Glycosyltransferase (GT)
Enzymatic level

Carbohydrate antigen
Glycoconjugate level

Antibodies
5 Immunological level
 Caracterización del gene ABO

•Cromosoma 9q34.1- 9q34.2

•Codifica proteína de 353 aa,

presenta actividad de
glicosiltransferase sobre el
antígeno H

9q 34.1-2
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 Estructura del gene ABO

Mapa físico del gene ABO

exon

Tamaño del DNA = 19,55 Kb

Tamaño del mRNA = 1064 pb

7 exons 6 introns
Con 28 a 688pb Con 554 a 12982pb

7
 8
B
A2
A1

O2
O1

O1v
1
Exon

53G>T
2

106C>T
3
4

188G>A
189C>T

220C>T
5

261delG
Alelos ABO más comunes

297A>G

467C>T
526C>G
646T>A
Cartoon modified from Bahram Hosseini-Maaf

657C>T
681G>A
7

703G>A
771C>T
796C>A
802G>A
803G>C
829G>A
930G>A
1061delC
 Antígenos del Sistema ABO

• Son estructuras complejas de

carboidratos unidos a las
glicoproteínas y glicolipídios.
Fucose

• Los ags del Sist ABO no son

productos primários de los
genes. (glicosiltransferases)

• En RN presentes en baja
cantidad

9
9
 700.000 a
Antígenos del Sist ABO N-acetil- 1.300.000
Galactosamina
sítios/hematie

Fucose

Galactose

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11
Anticuerpos del Sist ABO

Anticuerpos
• Son regulares, naturales, IgM.
• Reaccionan desde 4ºC a 37ºC

• Individuos O ↑IgG
• Activan complemento a 37oC
Hemólisis intravascular

• EHFRN, generalmente de baja

intensidad / Ac maternos

• No están presentes en RN
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Implicaciones clínicas

Antígenos Anticuerpos

Receptores de patógenos Reacciones hemolíticas

Expresión alterada en algunas Incompatibilidad materno fetal

enfermedades (EHFRN)

Expresión alterada durante el Abortos expontaneos recorrentes

embarazo

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Tipificacón

Prueba directa Prueba Inversa

Buscamos la presencia o ausencia de

los Ags del Sistema ABO en los GR,
utilizando Sueros(Ac) comerciales
(antiA, -B, -AB)
Estudiamos la presencia o
ausencia de los Ac Naturales del
Sistema ABO en el plasma
utilizando células con
fenótipos conocidos
(céls A1 y B)

¿Anticuerpos?
¿Antigenos ?
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Metodologias

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Sobre la prueba inversa
 No és Facultativa !

– No realizarla en muestras de Recién nacidos !

• Ac a partir de los 03-06 meses

– Después de los 65 años el título de los acs

disminuyen
• Algunas veces es difícil la identificación

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História clínica

Es posible que la
edad del paciente
tenga alguna
importancia cuando
veo una
discrepancia?

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¿Que es?

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Sistema ABO X Discrepancias

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Prueba directa X Prueba inversa

Direta Inversa

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¿Que son discrepancias ABO?

• Cuando ocurre incompatibilidad entre los resultados observados en la

prueba directa y la prueba inversa.

Toda discrepancia ABO debe ser aclarada

antes de la liberación de los resultados.

Todavía debemos liberar

la transfusión !!!!
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21
En caso de transfusión de emergencia

En caso de transfusión de emergencia sin

tiempo para estudios complementários
para definirse el tipo ABO

Que hacer?

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Causas de las discrepancias
• La mayoria de las discrepancias son debidas a
ERRORES TÉCNICOS, tales como :

1. El uso incorrecto de reactivos -

INSERTO
2. Identificación incorreta de la
muestra
3. Error de interpretación y/o
transcrición de resultados
4. Falla al adicionar el reactivo
5. Contaminación bacteriana de los
reactivos
6. Super o sub-centrifugación
7. Vidrios mal limpiados
8. Equipos no calibrados, etc.

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23
¿Frente a los resultados discrepantes, que hacer?

• Pergunte-se
– Que puede estar errado?

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Pregunte, piense....

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Las discrepancias pueden ocurrir por causas

• Transfusión
• Embarazo
Adquiridas • Trasplante
• Enfermedad

• Quimerismo
• Débil/no expresión del
Heredadas antígeno de A y/o B
• Débil/no expresión del
antígeno de H

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Las características heredadas

mutaciones en la recombinación entre dos

región reguladora alelos ABO formando un
nuevo alelo híbrido

deleciones/inserciones mutaciones del

sitio del splice

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Causas de las discrepancias
• Anticuerpos • Anticuerpos
ausentes o débiles irregulares,
hiperproteinemia

Prueba inversa Reactividad extra

con reactividad en la prueba
débil o ausente inversa

Prueba directa Reactividad

débil o ausente extra en la
prueba directa

• Ausencia o poca • Presencia de

cantidad de Anticuerpos pegados
a los glóbulos rojos.
Antigenos
• Reacciones
inespecíficas

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Discrepancias ABO

Problemas en el suero/plasma:

 Ausencia de anticuerpos del sistema ABO

 Ac. irregular anti-A1

 Auto/alo ac. irregulares frios

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29
Discrepancias ABO

Problemas con los hematíes:

 Formación de rouleaux
 Ags debilmente expresos

 Ag A o B debilitados en pacientes con leucemia

 Transfusión/ TMO reciente
 Poliaglutinación
 Quimera
 T.A.D positivo (IgG altos títulos RN)

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Subgrupos ABO

Que son
Subgrupos?

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Subgrupos ABO

• Subgrupos A:

Genes variantes 80%

– Aproximadamente llevan a la expresión
indivíduos disminuída
A/AB son A1;
de los antígenos en la membrana del eritrocito
– 19% A2,
– 1% otros subgrupos - A débiles
• (A3, Ax, Afinn, Amos,Ael,etc)

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32
Genética

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33
A y B – Definición serológica

A1 B
A2

Decreasing antigen expression

A3 B3
Ax Bx
Afinn
Aweak Amos Bmos Bweak
Ael Bel

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* Anti-A/B pueden ser absorvidos y eluidos de estas celulas
Picture modified from Annika Hult
Subgroup RBC reactions with ABO substance Anti-A1

of A Anti-A Anti-A,B Anti-A1 Anti-H in saliva in serum

A3 2+/+ mf 2+/+ mf 0 4+ A, H No
Ax 0/+ 2+/+ 0 4+ H Often
Ael 0* 0* 0 4+ H Sometimes

Aend + + 0 4+ H Sometimes

Afinn + + 0 4+ H Yes
Abantu +/(+) +/(+) 0 4+ H Yes
Am 0*/+ 0*/+ 0 4+ A, H No
Ay 0* 0* 0 4+ A, H No

Subgroup RBC reactions with ABO substance Anti-B

of B Anti-B Anti-A,B NA Anti-H in saliva in serum

B3 mf mf NA 3+ B, H No
Bx (+) (+) NA 3+ (Bx), H Yes
Bm 0*/(+) 0*/(+) NA 3+ B, H No
B35
el 0* 0* NA 3+ H Sometimes
A1 X A2

Diferencias cuanto a los antígenos Diferencias en las transferases

• Cuantitativa: • pH optimo: A1 (pH 5.6) X A2 (pH 7-8)

• Diferencia de tamaño: La transferase
• A1 (~106 Antigenos por A1 es más pequeña que la A2)
hematie) X A2 (~2x105)

• Cualitativa: Distribución en los tejidos:

• Solamente la transferase • Hay muy pocos sitios A los
A1 puede repetir el riñones de los individuos A2, lo
epítope A tipo 3 que es que significa que los A2 pueden
específico del A1 ser trasplantados al O.

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37
Subgrupos ABO – Aspectos serológicos

• El azucar inmunodominante de los

subgrupos es idéntico a los originales.

• ¿ Es importante distinguir subgrupos en las

pruebas pré-transfusionales?

NO !
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Soluciones para resolver discrepancias

• Prueba Directa • Reactividad débil

• Reactividad ausente
• Reactividad extra

• Prueba Inversa • Reactividad débil

• Reactividad ausente
• Reactividad extra

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Casos prácticos de discrepancias

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Casos prácticos de discrepancias

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Casos prácticos de discrepancias

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Casos prácticos de discrepancias

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Resúmen de como resolver discrepancias

Prueba Directa
Repetir las pruebas ( ***Cambiando la técnica a buscar resultados distintos)

 Utilizar reactivos COMERCIALES monoclonales/ Cambiar lotes de reactivos

 Hematies de cordón (lavar hematies 8- 10 X)

 En caso de muestra de RN , repetir las pruebas después de 6 meses ***

 Aumentar el tiempo de incubación y/o disminuir la temperatura de incubación

 Realizar TAD (auto-anticuerpos frios/calientes) / Lavar hematies con sol salina 37ºC/ID- Diluent 2

 Investigar los subgrupos (fenotipificación con lectinas (si necesario) / técnicas de fijación/eluición)

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Anti A1 – ¿Cómo probarlo ?

Prueba de
Comprobación del
amplitud
Anti A1 T.A. Resultado
37°C Definición
Definición
térmica
T.A.
Ac Frio sin
Plasma
Plasma X A1
X cel celulas A1 Positivo
Negativo
Positivo importancia clínica
Plasma X celulas A2 (?) Negativo Confirmado que es un
anti A1
Plasma X celulas O Ac reacciona a
Plasma X cel A1 Positivo Negativo
Positivo
37°C
49 Importancia clínica
Prueba Directa – Reactividad Débil

 Verificar el historico del paciente

(niño/transfusión/transplante)
 Aumentar el tiempo de incubación a TA o a 4°C

¿Esto es una discrepancia? Ex: Subgrupo de A

A débil (probable A3) A débil (probable Ax B )
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Prueba Directa – Reactividad Ausente

 * Fijación y eluición – Eluído reactivo con hematies A

Direta: “O” inversa: “A”

Resultado: A débil (probable Am)

51
Prueba Directa – Reactividad Ausente
Fijación y eluición – Eluído reactivo con hematies A

52
Fijación

C
M I e
e N n
C t
z r
Anti A policlonal c U
i
B
l f
A
a g
R a
Hematíes del r
r
paciente

53
 Elución

EJ: Elución ¿Que Ac esperamos encontrar?

Ácida
54
Comprobación ?? ? ? ?
? ?

A A1 B O

Antígeno A

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Prueba Directa – Reactividad Extra

Ex: Presencia de
auto-anticuerpos frios
 Lavar los hematies con ID-Diluent 2 a 37°C
 Realizar TAD (auto-anticuerpos frios/calientes)
 IgM en alto titulo – reacciones 4+ - Tratamiento de las células y/o suero con DTT (Thiol) –
destruición de las puentes SS

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Prueba Inversa – Reactividad ausente

Directa: “A” Inversa: “AB”

4 oC

Ex: anticuerpos anti-B en bajo título

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Prueba Inversa – Reactividad Débil/ Ausente

 Bajo título de los anticuerpos (RN/niños y ancianos)

 Ausencia de anticuerpos (hipo o agamaglobulinemia,
medicamientos)

¿Cómo solucionar ?
 Repetir las pruebas
 Verificar los datos clínicos (RN*/ niños, ancianos, enfermedad, medicamientos)
 Aumentar el tiempo y/o disminuir la temperatura de incubación

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Prueba Inversa – Reactividad Extra

Repetir PR a 37oC
Repetir PR con suero auto-adsorvido
Ex: auto-anticuerpos frios
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Prueba Inversa – Reactividad Extra

 Auto-anticuerpos frios libres en el plasma

 Aloanticuerpos (reactivos a TA: anti-M,-N,-Le,-P1)
 Enfermedades (fibrinogeno alto, hipergamaglobulinemia, utilización de
Expansores del plasma)

¿Cómo solucionar?
 Repetir las pruebas (chequear la temperatura de los reactivos y muestras)
 Incluir la prueba del autocontrole,
si positivo - Repetir Prueba inversa a 37ºC (auto-anticuerpos frios)/ auto-adsorción
si negativo - Pesquisar anticuerpos irregulares (repetir PR a 37ºC)

 Investigar subgrupos (presencia de anti-A1 natural )

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