CUANTIFICACION DE BACTERIAS Y HONGOS PRESENTES EN

LODOS

I. INTRODUCCIÓN............................................................................................................... 3
1.1. OBJETIVO GENERAL ............................................................................................. 4
1.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS .................................................................................... 4
II. MATERIAL Y METODO .............................................................................................. 4
2.1. MATERIALES ............................................................................................................ 4
2.2. PROCEDIMIENTO .................................................................................................... 4
SEMBRADO PARA BACTERIAS ................................................................................... 5
SEMBRADO PARA HONGOS ......................................................................................... 5
III. COMENTARIO CRITICO ............................................................................................ 6
IV. RESULTADOS ................................................................................................................ 6
V. CONCLUSIÓN .................................................................................................................... 6
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................................... 7
VII. ANEXOS .......................................................................................................................... 7
TECNICAS DE SEMBRADO DE MICROORGANISMOS EN
MEDIO DE CULTIVO
I. INTRODUCCIÓN
Las lagunas de estabilización son el método más simple de tratamiento de
aguas residuales que existe. Están constituidos por excavaciones poco
profundas cercadas por taludes de tierra. Generalmente tiene forma
rectangular o cuadrada.
Las lagunas tienen como objetivos:
1. Remover de las aguas residuales la materia orgánica que ocasiona
la contaminación.
2. Eliminar microorganismos patógenos que representan un grave
peligro para la salud.
3. Utilizar su efluente para reutilización, con otras finalidades, como
agricultura.
La eficiencia de la depuración del agua residual en lagunas de
estabilización depende ampliamente de las condiciones climáticas de la
zona, temperatura, radiación solar, frecuencia y fuerza de los vientos
locales, y factores que afectan directamente a la biología del sistema.

Los procesos biológicos más importantes que tienen lugar en una laguna
son:
 Oxidación de la materia orgánica por bacterias aerobias. La
respiración bacteriana provoca la degradación de la DBO5 del
agua residual hasta CO2 y H2O produciendo energía y nuevas
células.
 Producción fotosintética de oxígeno. La fotosíntesis algas produce,
a partir de CO2, nuevas algas, y O2, que es utilizado en la
respiración bacteriana.
 Digestión anaeróbica de la materia orgánica con producción de
metano.
Sembrado por superficie
Es una técnica usada para el aislamiento de colonias, que permite
igualmente el recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos
exactamente la dilución consiste en depositar sobre la superficie de una
 placa con agar una gota o 0.1 ml de una determinada dilución del cultivo
de microorganismos problema y extenderlo con ayuda del cayado de un
asa de dygralski, previamente esterilizado, en todas las direcciones hasta
que esté completamente seco.

1.1. OBJETIVO GENERAL

 Hacer recuento de bacterias y hongos presentes en lodos activados
1.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Preparación de disoluciones de la muestra inicial.

II. MATERIAL Y METODO

2.1. MATERIALES
• 5 tubos de ensayo
• Muestra de lodos
• Haza de drigalski
• Mechero
• Encendedor
• Pipeta

2.2. PROCEDIMIENTO

Diluciones seriadas

La muestra de lodos que utilizaremos en el sembrado debe estar diluida en

solución salina fisiológica hasta llegar a 10-6 - 10-5 para bacterias y 10-4 – 10-3
para hongos.

Para preparar la dilución seriada se toma 10 gr de muestra de lodos y se le

agrega al matraz que contiene 90 ml de solución salina, ahí se genera una
dilución de 10-1, luego mezclamos y tomanos1 ml de dilución para añadirlo al
tubo de ensayo número 1, que contiene 9 ml de solución salina, así generamos
la dilución 10-2, luego mezclamos y tomanos1 ml de dilución 10-2 para añadirlo
al tubo de ensayo número 2, que contiene 9 ml de solución salina, así
generamos la dilución 10-3, así sucesivamente hasta conseguir el 10-6.
SEMBRADO PARA BACTERIAS

Primera placa de Petri

 Prender el mechero
 Incorporar con la pipeta 0.1ml de muestra diluida 10-6 a
la placa de petri.
 Esterilizar el haza de Drigalski
 Con la ayuda del haza de Drigalski, esparcir toda la
muestra sobre el agar nutritivo dentro de la placa de
Petri.
Segunda placa de Petri
 Incorporar con la pipeta 0.1ml de muestra diluida 10-5 a
la placa de petri.
 Esterilizar el haza de Drigalski
 Con la ayuda del haza de Drigalski, esparcir toda la
muestra sobre el agar nutritivo dentro de la placa de
Petri.
SEMBRADO PARA HONGOS
Tercera placa de Petri
 Prender el mechero
 Incorporar con la pipeta 0.1ml de muestra diluida 10-4 a
la placa de petri.
 Esterilizar el haza de Drigalski
 Con la ayuda del haza de Drigalski, esparcir toda la
muestra sobre el agar sabouraud dentro de la placa de
Petri.
Tercera placa de Petri
 Incorporar con la pipeta 0.1ml de muestra diluida 10-6 a
la placa de petri.
 Esterilizar el haza de Drigalski
 Con la ayuda del haza de Drigalski, esparcir toda la
muestra sobre el agar sabouraud dentro de la placa de
Petri.
 III. COMENTARIO CRITICO
1. Las diluciones seriadas tienen el objetivo de disminuir la carga microbiana en cada
paso. Si la carga microbiana es demasiado elevada, la placa estará llena de
colonias y no podremos separarlas ni contarlas cuando hayan crecido.
2. En el aire se encuentran muchos microorganismos, por ello durante la siembra es
necesario e importante que se trabaje con un mechero y 20 cm a la redonda de
este, esto nos lleva a obtener buenos resultados, por la asepsia que se logra con el
mechero.
3. Es importante tener en cuenta los factores que limitan el crecimiento de las
colonias de microorganismos en una placa, entre estos factores tenemos:
a. Temperatura óptima: temperatura a la cual el microorganismo se multiplica a
su máxima velocidad.
b. Influencia de la presión osmótica.
c. pH
d. Luz ultravioleta.
4. Es fundamental que todo el material de vidrio se lave y enjuague varias veces. La
limpieza y desinfección del material sucio empleado en el laboratorio nos
permitirá la obtención de los resultados esperados y el logro de nuestros objetivos.
5. Si se desea hacer recuentos de colonias se tiene que contar las placas que tengan
entre 30 y 300 colonias aisladas, ya que por encima el número es demasiado
elevado para hacer un recuento fiable y por debajo de 30 no tiene valor estadístico.

IV. RESULTADOS
- Se logró un correcto sembrado de los microorganismos para bacterias y
hongos.
- El conteo de bacterias en la placa de Petri con la dilución 10-6 fue
V. CONCLUSIÓN
a) Es importante tener en cuenta los factores que limitan el crecimiento de las
colonias de microorganismos en una placa, entre estos factores tenemos:
Temperatura optima, presión osmótica, pH, luz ultravioleta.
b)
 VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 SEELEY, H. y DEMARK, P. Microbios en acción. Manual de laboratorio de
microbiología. Ed.Blume. España. 1973.
 DIAZ, R; GAMAZO, C. 2005. Manual práctico de Microbiología. Tercera
edición. Editorial Masson. España.
 ALARCÓN, L. 2004. Manual de prácticas de microbiología básica y
microbiología de alimentos. Editorial UACJ. México. Consultado el 01 de
noviembre de 2011.

VII. ANEXOS
Ilustración 1: método de sembrado por estriado por agotamiento
 Ilustración 2: asa bacteriológica. Se utilizó para

la técnica de estriado por agotamiento.

Ilustración 3: Espátulas Drigalski. Se utilizó para la

técnica sembrada por superficie.

Ilustración 4: Preparación de las diluciones.