Pruebas hematológicas en la gestión de la salud de las ovejas

Z.S. Polizopoulou

abstracto

La evaluación del recuento de células sanguíneas completas (CBC) puede ser de gran ayuda para el
examen clínico. La evaluación precisa de los datos hematológicos depende de la recolección,
preparación y transporte adecuados de las muestras de sangre. La sangre debe extraerse de
animales en reposo, calmados y bien retenidos en el momento del muestreo, para evitar cambios
artificiales, como un leucograma de estrés causado por la liberación endógena de esteroides o
epinefrina o por hemólisis de la colección traumática. La punción venosa adecuada es importante
para evitar la contaminación por tromboplastina tisular, que estimula la formación de coágulos e
invalida las pruebas de función hemostática. Los tubos deben llenarse hasta su capacidad para
garantizar la proporción adecuada de anticoagulación sanguínea. Cuando están indicadas las
pruebas de hemostasia, la sangre debe transferirse cuidadosamente a viales que contienen
anticoagulante, para evitar la hemólisis, lo que impide el uso de tubos de vacío. Las muestras de
sangre para los estudios hematológicos se procesan mejor tan pronto como sea posible después
de la recolección, pero si se espera una demora, deben refrigerarse a 4 ° C y durante un período
máximo de 24 h (con la excepción de los recuentos de plaquetas que deben realizarse

dentro de 4-6 h después de la recolección de la muestra), mientras que los frotis de sangre
secados al aire deben prepararse inmediatamente después del muestreo para ser teñidos con
Wright o cualquier tinción de Romanovsky modificada.

Los conteos sanguíneos completos pueden realizarse manualmente o con la ayuda de

instrumentos sofisticados. Los instrumentos automatizados de hematología proporcionan
recuentos rápidos de células de sangre, cálculo de hemoglobina, índices de eritrocitos
potencialmente útiles, pero no pueden detectar anomalías morfológicas y hemoparásitos.

Recuento de glóbulos rojos y cambios morfológicos son útiles al evaluar la anemia. El recuento
diferencial de glóbulos blancos es más importante que el recuento total de glóbulos blancos,
porque los aumentos y disminuciones en los tipos de células individuales pueden ocurrir
simultáneamente, dejando el recuento total sin cambios. En general, CBC puede proporcionar
información valiosa al clínico. Además, la evaluación de una película de sangre bien preparada es
un complemento esencial para la interpretación de todos los recuentos de células, lo que permite
la detección de anomalías morfológicas significativas o la presencia de hemoparásitos.

1. Introducción

Las técnicas de diagnóstico hematológico se han convertido en una parte esencial de la base de
datos mínima para la investigación diagnóstica de problemas médicos en ovejas. El uso cada vez
mayor de equipos sofisticados, que pueden usarse para procesar pequeñas muestras de sangre de
rumiantes, y la creciente conciencia del propietario con respecto a los beneficios de la evaluación
diagnóstica clinicopatológica, han establecido el recuento completo de células sanguíneas (CBC)
como una parte importante del manejo de casos ovinos (Roger, 2008). La interpretación del perfil
hematológico en combinación con los hallazgos del examen clínico y los resultados de otras
pruebas de diagnóstico pueden apuntar a un diagnóstico diferencial específico o sugerir un
pronóstico. El perfil hematológico de las ovejas incluye la determinación del hematocrito
(hematocrito) o volumen de células empaquetadas (PCV), de la hemoglobina, de los índices de
glóbulos rojos, del recuento total de células, del recuento diferencial de células y de la evaluación
de los eritrocitos, de los leucocitos y de la morfología plaquetaria mediante examen microscópico
de películas de sangre teñidas (Kramer, 2000; Stockham y Scott, 2002a; Brockus y Andreasen,
2003).

2. Recolección, manejo y almacenamiento de muestras de sangre de ovejas

El valor diagnóstico de una muestra de sangre es su capacidad para reflejar los efectos de la
enfermedad en las células sanguíneas y las plaquetas. La composición de la sangre no es estática,
pero pueden ocurrir cambios rápidos como respuesta a varios eventos fisiológicos
desencadenados por el estrés, como la contracción esplénica y la demarcación de neutrófilos.
Estos procesos que generalmente son inducidos por la manipulación y restricción de animales, a
menudo producen cambios fisiológicos que pueden interpretarse erróneamente. Por ejemplo, la
liberación de esteroides o epinefrina inducida por el estrés puede producir neutrofilia transitoria
que puede confundirse con un leucograma inflamatorio y PCV mayor debido a una contracción
esplénica que puede confundirse con deshidratación (Stockham y Scott, 2002b; Latimer y Prasse,
2003; Jones y Allison, 2007).

El daño físico a los componentes sanguíneos durante la recolección es la causa más común de
muestras de sangre de mala calidad.

La fragilidad de los eritrocitos y la agregabilidad de las plaquetas son bastante impredecibles y

varían entre animales individuales y procesos patológicos. Dependiendo del tamaño del animal, se
debe usar una aguja de 18 o 20G y 1.5-2 in; la sangre debe recogerse en tubos de vacío o aspirarse
suavemente con una jeringa. Las venas yugulares son los sitios preferidos de venopunción, debido
a su tamaño y accesibilidad. El uso de una técnica consistente y precisa, como la colocación rápida
de la aguja y la recolección rápida de muestras, minimiza los cambios de artefactos como la
hemólisis yatrógena, la contaminación por tromboplastina tisular y la activación plaquetaria
(Kramer, 2000; Stockham y Scott, 2002a; Morris, 2008a).

La selección de un anticoagulante particular depende del tipo de prueba (s) de diagnóstico a

realizar. Los anticoagulantes comúnmente usados incluyen ácido etilendiaminotetraacético
(EDTA), heparina y citrato de sodio. Independientemente del volumen de la muestra, es
imperativo mantener la proporción adecuada de sangre a anticoagulante. La concentración
excesiva de EDTA puede causar encogimiento de los eritrocitos, lo que invalida varios parámetros,
como el PCV, el volumen corpuscular medio (MCV) y la concentración media de hemoglobina
corpuscular (MCHC). El anticoagulante preferido para el CBC es EDTA, ya que preserva la
morfología celular. El citrato de sodio se usa para cualquier prueba que involucre tiempos y
factores de coagulación (Morris, 2008a, b). Las muestras heparinizadas son de uso limitado,
porque la tinción de glóbulos blancos (WBC) es deficiente, sin embargo, se pueden evaluar los
recuentos e índices básicos de glóbulos rojos (RBC).
Después de la recolección de la muestra, los tubos deben invertirse o rodarse suavemente varias
veces para asegurar una mezcla anticoagulante adecuada y las muestras procesadas lo antes
posible (Brockus y Andreasen, 2003; Morris, 2008a, b). De manera óptima, los ensayos deben
llevarse a cabo de inmediato; sin embargo, si esto no es posible, las muestras deben refrigerarse a
4 ° C, ya que, a temperatura ambiente, la hinchazón de los glóbulos rojos que ocurre después de 6-
24 h puede provocar aberraciones, como aumento de PCV y disminución de MCHC. Las muestras
debidamente refrigeradas se pueden analizar hasta 24 horas después de la recolección, con la
excepción de los recuentos de plaquetas, que deben realizarse dentro de las 6 h posteriores a la
toma de muestras (Jones y Allison, 2007; Morris, 2008a).

Las muestras de sangre enviadas para su publicación en un laboratorio pueden producir resultados
artificiales, por lo que es imprescindible asegurarse de empacar con hielo o compresas frías en
contenedores aislados para minimizar estos efectos (Topper y Welles, 2003; Jones y Allison, 2007).

Es importante preparar varias películas de sangre secadas al aire inmediatamente después de la

recolección de muestras y enviarlas al laboratorio de diagnóstico junto con las alícuotas
refrigeradas.

A pesar de que la calidad de estos frotis puede variar, pueden ser muy útiles para distinguir los
cambios de la morfología celular verdadera que son importantes, de las alteraciones causadas por
el envejecimiento de la muestra. Además, los recuentos de plaquetas se pueden evaluar
crudamente usando películas de sangre secadas al aire, comparando su número por campo de
inmersión en aceite con el número de glóbulos rojos o blancos (Kramer, 2000, Stockham y Scott,
2002a; Morris, 2008a) .

En la práctica interna invernal, el uso de analizadores de hematología automatizados está

aumentando y estos instrumentos están disponibles para varias especies de animales de granja,
incluidas las ovejas. Sin embargo, es importante utilizar instrumentos calibrados para su uso en
ovejas, porque las variaciones en el tamaño de los RBC entre las especies animales pueden
conducir a resultados erróneos.

A pesar de la determinación rápida y precisa de los recuentos de células y los índices de glóbulos
rojos, que no se pueden estimar manualmente, estos no son capaces de detectar anormalidades
morfológicas o hemoparásitos. Por lo tanto, se enfatiza la importancia del examen simultáneo de
los análisis de sangre (Brockus y Andreasen, 2003; Jones y Allison, 2007).

3. Parámetros y morfología de los eritrocitos

Los parámetros incluidos en la evaluación de GR son PCV o hematocrito (HCT), recuento de

glóbulos rojos, hemoglobina, MCV y MCHC. Como se mencionó anteriormente, es importante
examinar también una película de sangre teñida, con el fin de detectar cambios en la morfología y
parásitos. Los glóbulos rojos de pequeños rumiantes son relativamente pequeños en comparación
con los de otras especies, por lo que a menudo se interpretan erróneamente cuando se usan
instrumentos de hematología calibrados para su uso en otras especies.

Esto es particularmente cierto para los analizadores de impedancia, donde los RBC a menudo se
cuentan como plaquetas y los valores de PCV falsamente disminuidos (Kramer, 2000; Morris,
2008a). Errores similares también pueden ocurrir con la hemólisis in vitro, otro problema que se
encuentra a menudo cuando se manipulan muestras de sangre ovina.

El microhematocrito es la forma más fácil de calcular la PCV y evaluar el recuento de hematíes de

forma manual, y siempre debe realizarse, incluso si hay instrumentos automatizados disponibles.
Una diferencia significativa entre los valores de PCV y del microhematocrito es una indicación de
una determinación incorrecta por parte del analizador. Los índices de RBC, MCV, MCH y MCHC,
proporcionan información sobre el tamaño celular promedio, el contenido de hemoglobina y la
concentración de hemoglobina, respectivamente. Un aumento de MCV (macrocitosis) es una
indicación de respuesta regenerativa, mientras que la microcitosis (disminución de MCV) a
menudo se observa en trastornos metabólicos, como la deficiencia de hierro. Un aumento de MCH
podría indicar la presencia de reticulocitos o hemólisis, mientras que una disminución de MCHac
implica una deficiencia de hierro. El MCHC se considera el más preciso de los índices de eritrocitos
y puede aumentarse en presencia de hemólisis o disminuirse, como en el caso de la reticulocitosis
y la anemia por deficiencia de hierro. Debido a la estrecha relación entre la concentración de
hemoglobina y PCV (la primera tiene aproximadamente un tercio del valor de PCV), un aumento
en MCHC por lo general indica un error analítico (Waner y Harrus, 2000; Stockham y Scott, 2002c;
Jones y Allison, 2007).

tabla 1

Clasificación de la anemia en ovejas.

Anemia regenerativa
Anemia de pérdida de sangre (trauma interno o externo, hemorragia gastrointestinal, parasitismo
por parásitos hematófagos)
Hemólisis (parásitos de glóbulos rojos, toxinas bacterianas, deficiencias de nutrientes)

Anemia no regenerativa
Anemia de enfermedad inflamatoria
Anemia de insuficiencia renal crónica
Deficiencias de nutrientes
Enfermedad de la médula ósea

En las ovejas, se considera la anemia cuando los valores de PCV caen por debajo del 24%; su
diagnóstico diferencial se basa en los hallazgos del examen clínico y la exclusión del mayor número
posible de procesos patológicos capaces de producirlo. Las principales subclasificaciones de la
anemia son los tipos regenerativos y no regenerativos, basados en los recuentos de reticulocitos y
la morfología de los glóbulos rojos. Una visión general de la clasificación de la anemia etiológica se
encuentra en la Tabla 1 y el abordaje diagnóstico de la anemia en ovejas se encuentra en la Tabla
2 (Waner y Harrus, 2000; Bath y van Wyk, 2009).

Tabla 2
Enfoque de diagnóstico de la anemia en ovejas.
Obtener un historial del problema
Realice un examen clínico detallado; verificar signos como icterus y / o hematuria, palidez de las
membranas mucosas, fiebre (evidente en hemólisis y enfermedades sistémicas subyacentes)
Realice un conteo sanguíneo; la decoloración del plasma de color rojo claro se observa con la
hemólisis; la hemólisis intravascular puede ir acompañada de una mayor concentración de
hemoglobina, volumen corpuscular medio y / o concentración media de hemoglobina corpuscular
Evaluar la morfología de los eritrocitos; los cambios regenerativos son indicativos de anemia por
pérdida de sangre o hemólisis; con pérdida sanguínea aguda o hemólisis, los signos de
regeneración pueden no estar presentes inicialmente; verificar la autoaglutinación, cuerpos de
Heinz, punteado basófilo y / o hemoparásitos
Evaluar proteínas plasmáticas; la hipoproteinemia es compatible con pérdida de sangre e
hiperproteinemia o hiperglobulinemia sugiere enfermedad inflamatoria crónica
Realice un análisis de orina; La decoloración oscura de la orina sin evidencia de hematuria
microscópica indica hemólisis intravascular, especialmente cuando se asocia con coloración roja
del plasma. Realice un examen de médula ósea cuando no haya evidencia de regeneración.

La evaluación de los análisis de sangre puede revelar anomalías morfológicas de los glóbulos rojos
que pueden respaldar el diagnóstico. La presencia de autoaglutinación (agregación de glóbulos
rojos) es una indicación de enfermedad mediada inmunológicamente, ya sea primaria (anemia
hemolítica mediada por el sistema inmune, IMHA) o secundaria (hemoparásitos) y debe verificarse
con la prueba de aglutinación con solución salina. En el primer caso, los agregados de eritrocitos
permanecen presentes cuando se mezcla una pequeña cantidad de sangre con un
cantidad de solución salina en un portaobjetos de vidrio.
Mientras que la anisocitosis leve (variación en el tamaño de RBC) es normal en ovejas, la presencia
de otros cambios, como policromasia (variación de color), hipocromasia (palidez de RBC) y
poiquilocitosis (RBC de forma anormal) es siempre un signo patológico. La detección de glóbulos
rojos nucleados, cuerpos de Howell-Jolly y punteado basófilo es una indicación de regeneración (y
menos comúnmente envenenamiento por plomo), mientras que la presencia de cuerpos de Heinz
está asociada con el estrés oxidativo de los eritrocitos causado por una variedad de condiciones,
tales como deficiencias nutricionales, ingestión de cebollas o plantas del género Brassica y
sustancias tóxicas (cobre). El examen de las películas de sangre también puede revelar la presencia
de varios hemoparásitos (Anaplasma spp., Mycoplasma spp., Babesia spp.), Lo que permite un
diagnóstico inmediato. Algunos de estos organismos pueden, sin embargo, ser difíciles de
diferenciar de cambios morfológicos como la presencia de cuerpos de Howell-Jolly (Stockham y
Scott, 2002a, b).
La policitemia, o aumento de PCV, es más comúnmente secundaria y ocurre simultáneamente con
la deshidratación severa debido a diversas enfermedades sistémicas. La verdadera policitemia se
observa raramente en ovejas y puede ocurrir en animales que viven en grandes altitudes, así como
en casos de enfermedad cardiopulmonar y de neoplasia renal o hematopoyética (Kramer, 2000;
Jones y Allison, 2007).
4. Alteraciones de los glóbulos blancos y morfología
Con la excepción de los linfocitos, cada uno de los otros tipos de leucocitos se origina y madura en
la médula ósea.
Muchos analizadores de hematología automatizados realizan recuentos de WBC diferenciales, sin
embargo, es mejor confirmar esos resultados contando manualmente al menos 100 células en las
películas de sangre teñidas. Las respuestas de leucocitos en las ovejas a menudo son diferentes a
las registradas en otras especies y rara vez son específicas para una enfermedad en particular.
Parece que en ciertas condiciones (es decir, infección bacteriana), las ovejas pueden no ser
capaces de mostrar una respuesta leucocitaria rápida, en comparación con otras especies, y por
esa razón los cambios en las proteínas de fase aguda pueden ser indicadores más sensibles de la
inflamación (Taylor, 2000; Leperd et al., 2009; Fragkou et al., 2010). Los neutrófilos son los
leucocitos predominantes en los animales jóvenes, mientras que los linfocitos predominan en los
adultos, donde la proporción de neutrófilos: linfocitos de 1: 2 es común. La inflamación aguda o
abrumadora a menudo va acompañada de cambios tóxicos en los leucocitos,
tales como la basofilia citoplásmica, vacuolación o espumoso, presencia de gránulos azurófilos y
cuerpos de Doehle y dismaturación nuclear (Kramer, 2000; Taylor, 2000; Stockham y Scott, 2002b;
Fragkou et al., 2010). Sin embargo, debe tenerse en cuenta que algunos artefactos morfológicos
Los cambios en el WBC, como la hipersegmentación nuclear y la espumosa citoplásmica, pueden
parecerse a patológicos
4. Alteraciones de los glóbulos blancos y morfología
Con la excepción de los linfocitos, cada uno de los otros tipos de leucocitos se origina y madura en
la médula ósea.
Muchos analizadores de hematología automatizados realizan recuentos de WBC diferenciales, sin
embargo, es mejor confirmar esos resultados contando manualmente al menos 100 células en las
películas de sangre teñidas. Las respuestas de leucocitos en las ovejas a menudo son diferentes a
las registradas en otras especies y rara vez son específicas para una enfermedad en particular.
Parece que en ciertas condiciones (es decir, infección bacteriana), las ovejas pueden no ser
capaces de mostrar una respuesta leucocitaria rápida, en comparación con otras especies, y por
esa razón los cambios en las proteínas de fase aguda pueden ser indicadores más sensibles de la
inflamación (Taylor, 2000; Leperd et al., 2009; Fragkou et al., 2010). Los neutrófilos son los
leucocitos predominantes en los animales jóvenes, mientras que los linfocitos predominan en los
adultos, donde la proporción de neutrófilos: linfocitos de 1: 2 es común. La inflamación aguda o
abrumadora suele ir acompañada de cambios tóxicos en los leucocitos, como basofilia
citoplásmica, vacuolación o espumoso, presencia de gránulos azurófilos y cuerpos de Doehle y
dismaduración nuclear (Kramer, 2000; Taylor, 2000; Stockham y Scott, 2002b; Fragkou et al. .,
2010). Sin embargo, debe tenerse en cuenta que algunos cambios morfológicos artefactuales en
WBC, como la hipersegmentación nuclear y la espumación citoplásmica, pueden parecerse a
alteraciones patológicas y, por lo tanto, deben interpretarse con cautela (Taylor, 2000; Kramer,
2000; Morris, 2008c). Además del leucograma inflamatorio, la neutrofilia puede ser una respuesta
normal al estrés y la excitación ambiental que promueve la liberación de epinefrina y a menudo va
acompañada de linfopenia, eosinopenia y monocitosis (Latimer y Prasse, 2003; Morris, 2008b). La
inflamación severa o la sepsis también pueden causar neutropenia.
Las poblaciones de linfocitos se clasifican en células B o T, producen anticuerpos o están
involucradas en la inmunorregulación y la inmunidad citotóxica, respectivamente. Las ovejas
tienen solo tipos de linfocitos pequeños y medianos. La linfocitosis es poco común y puede verse
en infecciones virales crónicas y trastornos autoinmunes, mientras que la linfopenia se suele
atribuir a acciones de corticosteroides endógenos o exógenos, infecciones agudas y endotoxemia.
La alteración más común que afecta a los eosinófilos es la eosinofilia, que caracteriza a las
enfermedades parasitarias y autoinmunes.
5. Alteraciones en la función plaquetaria
Las plaquetas se originan como fragmentos megacariocíticos y están involucradas en la
hemostasia primaria. Son menos estables y pueden contarse con precisión en muestras de sangre
dentro de las 6 h después de la recolección. La hemorragia prolongada y las petequias son los
signos más frecuentes que indican trombocitopenia o disfunción plaquetaria. Los mecanismos de
la trombocitopenia (recuento de plaquetas inferior a 100.000 células por ul) incluyen una
disminución de la producción, un aumento en el consumo o secuestro, endotoxemia y pérdida con
sangrado extenso.
Se debe tener cuidado cuando se interpretan recuentos bajos de plaquetas, porque la aglutinación
celular que se facilita en las muestras de envejecimiento o cuando se usa heparina como
anticoagulante, puede disminuir el recuento de trombocitos falsamente. La trombocitopenia falsa
puede diferenciarse por la ausencia de signos clínicos compatibles (tendencia a la hemorragia,
esplenomegalia) y el examen de una película de sangre teñida. Las deficiencias del factor de
coagulación se manifiestan por la tendencia a la hemorragia espontánea (melena, epistaxis,
hematuria) (Stockham y Scott, 2002a, Topper y Welles, 2003, Jones y Allison, 2007; Morris, 2008c).
6. Observaciones finales
En las ovejas, la interpretación del perfil hematológico junto con la historia, los hallazgos clínicos y
otras pruebas de diagnóstico proporcionan al clínico información valiosa para llegar al diagnóstico
final. Sin embargo, se debe tener cuidado de usar valores de referencia de animales que viven en
condiciones ambientales similares, temporadas y en el mismo estado fisiológico con la población
de estudio. El examen de las películas de sangre teñidas es una parte esencial del examen
hematológico de las ovejas que proporciona información sobre la morfología celular, la presencia
de hemoparásitos y la precisión de los recuentos celulares automáticos.