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Para los humanos la principal fuente de sustancias nitrogenadas son las proteínas de la dieta.
Las proteínas, a diferencia de los lípidos y los hidratos de carbono, no se almacenan como
reserva, y los niveles de proteínas se regulan por el equilibrio entre anabolismo y catabolismo, es
decir un balance entre biosíntesis y degradación, lo que se conoce como recambio normal de
proteínas. Así, un adulto sano que ingiere una dieta variada y completa se encuentra
generalmente en situación de equilibrio nitrogenado, un estado en el que la cantidad de
nitrógeno ingerida cada día es equilibrada por la cantidad excretada por heces, orina y sudor, sin
que se produzca ningún cambio neto en la cantidad de nitrógeno del organismo. El balance
nitrogenado puede calcularse entonces como:
No= N urinario
Nh= N heces
Np= N piel
Esta fórmula es muy general, se puede ajustar también teniendo en cuenta la edad.
Creo que lo mejor es darles la fórmula del principio y explicarles que además se necesita
conocer los gramos de proteína ingeridos por día y medir el volumen de orina en 24 hs y la urea
en orina de 24 hs. Si el grupo de alumnos los sigue les pueden mostrar las otras cuentas.
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La determinación del balance de nitrógeno en un paciente es una herramienta útil no sólo para
evaluar si la ingesta de proteínas es adecuada, y también para determinar el grado de
catabolismo inducido por la enfermedad.
f) Los aminoácidos pueden ser utilizados como fuente de energía. Indique en que
situaciones metabólicas y cuál es el destino del grupo amino y de la cadena carbonada.
Diapos 11 y 12
1- Durante la síntesis y degradación de las proteínas, algunos amino ácidos que son liberados
de las proteínas y no son necesarios para la síntesis de nuevas proteínas pueden seguir una
ruta catabólica.
2.- Cuando el individuo sigue una dieta rica en proteínas y la ingesta de amino ácidos excede a
las necesidades corporales para la síntesis de proteínas.
3.- Durante un ayuno prolongado o una diabetes descompensada, donde los carbohidratos no
pueden ser utilizados apropiadamente, las proteínas celulares son utilizadas como combustible.
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2) Excreción de amonio
Describir los pasos necesarios para que el grupo amino sea excretado del organismo:
transaminaciones, desaminación oxidativa (diapos 13 a 19) y ciclo de la urea (diapos 22 a 25).
Importancia del hígado en estos procesos. ¿Cómo se transporta el amonio desde los otros
órganos al hígado? (diapos 20 y 21)
Ciclo de la glucosa-alanina
La Ala es la forma no tóxica en la que se transportan grupos amino desde el músculo y otros
tejidos que degradan aa hacia el hígado. En el músculo y TEH que usan aa como combustibles
los grupos amino se juntan en forma de Glu por transaminación. El Glu transamina con piruvato
producto de la glucolisis muscular para dar Ala, que pasa a la sangre y se transporta al hígado.
En el citosol de los hepatocitos la TGP cataliza la reacción inversa y se forma Glu que ingresa a
la mitocondria y es catabolizado por la Glu DH o transamina con oxalacetato para dar Asp.
El piruvato ingresa en la gluconeogénesis y produce glucosa que es liberada a la sangre.
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b-2) Histamina
b-3) Serotonina
b-4) Acetilcolina
b-5) Acido gamma-aminobutírtico
b-6) Purinas y pirimidinas
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La fosfocreatina se forma en la reacción reversible catalizada por la creatina fosfokinasa (CK o
CPK) y es una molécula de reserva energética del músculo. (recordarles los compuestos con
alta capacidad de transferencia de grupos fosfato)
La determinación de la actividad CPK se utiliza en el diagnóstico y seguimiento de patologías
que involucren músculo estriado esquelético y/o cardíaco (especialmente infarto). (recordarles
las 3 isoformas y su distribución tisular MM (ME), MB (MC), BB (cerebro))
1) Agotamiento del ATP en las células cerebrales: para consumir el exceso de NH4+ pueden
producirse 2 reacciones: la aminación reductora del alfa-cetoglutarato (reacción inversa de
la GDH) para dar Glu, seguida de la conversión de Glu en Gln por la glutamina sintasa.
Esta última reacción es la que consume ATP. Estas 2 enzimas estan presentes en el
cerebro y la síntesis de Gln es la forma de eliminar el amonio.
Recordarles que las dos enzimas catalizan reacciones reversibles (GDH está regulada y es
reversible)
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2) Hiperosmolaridad y edema: los altos niveles de amonio conducen a niveles elevados de Gln, la
cual es un soluto osmoticamente activo, lo que provoca un aumento en la captación de agua,
hinchamiento de las células y edema. Esto fue observado en los astrositos, células del SNC que
proporcionan nutrientes, sostén y aislamiento a las neuronas.
3) Disminución de neurotransmisores: la reacción de la Gln sintasa consume el Glu, y el Glu y su
derivado gama-aminobutirato (GABA) son neurotransmisores.
Por lo tanto, la particular sensibilidad del cerebro a los excesos de amoníaco podría deberse tanto
a los cambios en el equilibrio osmótico como a la depleción de neurotransmisores.
a) 4500 Kcal.
b) BN desviado hacia la proteólisis, es decir, francamente negativo por falta de un pool adecuado
de aminoácidos esenciales.
c) Inicialmente aumentarán todos para cubrir las necesidades energéticas extremas. Existe una
captación selectiva de AA de acuerdo con el tejido que se estudie. Esto se ve claramente con la
Ala (mencionar el ciclo Ala-Glucosa).
Los AA ramificados son los últimos en descender y llegarán a aportar hasta el 15 % de las Cal/dia.
Los niveles de Glu y Gln se mantendrán altos debido a la necesidad de compensar la
hiperamoniemia acompañante, aunque, en la etapa caquexica terminarán por descender también
con una abrupta subida del amonio plasmático.
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d) Ala es glucogénico para el humano pero Leu no lo es, por lo tanto, la disminución de la síntesis
de beta-OH-butirato es consecuencia de un alivio en la biodisponibilidad de glucosa por
gluconeogénesis.
e) La administración inicial de alimentos completos no es aconsejable por la severa falla en la
síntesis de las enzimas que intervienen en su digestión, la absorción también estará obstaculizada
por la deficiencia en los sistemas de permeación y por las fallas en la estructura de la propia
membrana.
Las desaminaciones oxidativas pueden ser catalizadas por aminoácido-oxidasas que llevan a
la formación del alfa-cetoácido
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O por deshidrogenasas, donde la más importante es la Glu deshidrogenasa
Tiene un rol fundamental en la regulación del nivel de cetoácidos intermediarios del Krebs (citar
el ejemplo clásico del secuestro de cetoácidos por elevación del amonio durante el coma
amoniacal).
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c) Describa una reacción de transaminación indicando su importancia metabólica.
Explique por qué estas reacciones tienen Keq cercanas a 1. Ejemplifique.
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importancia biológica.
Resuelta en inciso a)
Explique por qué la síntesis de glutamina no es la vía preferencial del transporte de amonio
del músculo al hígado.
Glutamina sintasa se expresa principalmente en cerebro, hígado y riñones
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d) Describa en detalle el ciclo de la urea esquematizando sus etapas. Indique: d-1) Función.
d-2) En que órgano y compartimiento intracelular tiene lugar. d-3) Escriba la fórmula de la
urea identificando en la vía metabólica el origen de cada uno de sus átomos. d-4) Describa
en detalle la regulación. d-5) ¿Cuál es la importancia del N-acetil glutamato para esta vía
metabólica? d-6) ¿Cuál es el costo energético para sintetizar una molécula de urea? ¿De
qué manera se compensa? d-7) Realice un diagrama que relacione el ciclo de la urea con el
ciclo de Krebs e identifique el metabolito que relaciona ambos ciclos.
diapos 22 a 25
La urea presenta ciertas características que favorecen su formación como molécula para eliminar
NH4+: a) es una molécula pequeña, b) casi el 50% de su peso es nitrógeno (28 gr / 60 gr), c) se
necesita poca energía para su síntesis (1,5 molec de ATP teniendo en cuenta la recuperación en
Krebs) y d) es soluble en agua por lo que se disuelve en plasma y se elimina por vía renal.
Regulación: diapo 26
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orina, ¿En cuál?
TGP:
citosol
La pregunta de la guia no esta clara. Glucosa marcada se puede producir con los 3 aa (porque el
acetil-CoA generado por la leucina puede combinarse con oxalacetato), pero síntesis neta de
glucosa solo se produce con los gluconeogénicos.
Para que los alumnos no se confundan pueden plantearles que tengan en cuenta la situación
metabólica (ayuno) y la hormona predominante (glucagón), que en esas condiciones se realiza
gluconeogénesis y no hay oxalacetato disponible, asi solo darían glucosa marcada los 2
gluconeogénicos.
c) Leucina
5) Reacciones de transaminación.
a) Escriba las reacciones de transaminación de cada uno de los siguientes aminoácidos
utilizando al α -cetoglutarato como aceptor nombrando las enzimas correspondientes:
a-1) Alanina
a-2) Aspartato
a-3) Leucina
a-4) Fenilalanina
a-5) Tirosina.
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b) ¿A partir de cuál de estos aminoácidos no puede sintetizarse glucosa en forma neta?
c) Explique por que la Aspartato aminotransferasa tiene la actividad específica más alta
de todas las aminotransferasas hepáticas en mamíferos.
TGP:
citosol
TGO: citosol y
mitocondria
Leucina: da cetoisisocaproato
Fenilalanina: da fenilpiruvato
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El aspartato generado es el donor del segundo grupo amino durante la síntesis de urea. Entonces
la mitad de los grupos amino excretados en forma de urea pasan por esta reacción de la TGO, lo
que hace que esta sea la aminotransferasa más activa
Este ejercicio sirve para que los alumnos entiendan el ciclo de la urea con fórmulas (y no solo
palabras)
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b) Se marca primero el que se incorpora directamente como N para dar carbamoil-P. para que se
marque el segundo necesitamos que el N este incorporado en el Asp (o en alguna molécula
orgánica que pueda generarlo)
7) Ayuno. En un estudio se hizo ayunar a ratas de corta edad y luego se les suministró una
sola comida completa en aminoácidos pero sin arginina. A las 2 h los niveles de amonio
sanguíneo aumentaron desde un nivel normal de 18 g/L a 140 g/L y las ratas mostraron los
síntomas clínicos de toxicidad del amonio. Un grupo control alimentado con una dieta
completa en aminoácidos o una dieta completa en aminoácidos en la que se había
sustituido la arginina por ornitina no mostraron sintomatología.
a) ¿Cuál era el objetivo del ayuno en el experimento?
b) ¿Qué es lo que hizo aumentar los niveles de amonio? ¿Es la arginina un aminoácido
esencial para las ratas? Justifique
c) ¿Por qué se puede sustituir arginina por ornitina?
Esta en el Lehninger
8) Los 3 carbonos del lactato y de la alanina presentan el mismo estado de oxidación y los
animales pueden usar uno u otro como fuente de energía, indistintamente.
Compare el rendimiento en moles de ATP/ mol de sustrato para la oxidación completa a
CO2 y H2O del lactato y de la alanina teniendo en cuenta el gasto energético producido
por la excreción del NH4
Está en el Lehninger
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Usen este ejercicio para mostrarles donde se gasta ATP durante la síntesis de urea y remarcarles
la relación entre el ciclo de la urea y el ciclo de Krebs.
Alanina: 11 moles de ATP (el libro dice 13, hay 2 que no encuentro!)
Ala a piruvato
piruvato a acetil-CoA: 1 NADH
acetil-CoA en Krebs: 3 NADH + 1 FADH2 + 1 GTP
hasta aca van 12,5 ATP
Glu a ciclo de la urea: gasta 4 ATP (2 para formar carbamoil-P y dos en el paso del ciclo porque se
produce AMP) y produce fumarato
Fumarato en Krebs: 1 NADH
10) Caso clínico 6: Fenilcetonuria como una de las patologías que forman parte del screening
neonatal.
Sol, lactante de 4 meses de edad recién llegada de la Unión Soviética, de padre ruso y madre
argentina, fue normal en su nacimiento. Sin embargo, en las últimas semanas ha estado menos
atenta que lo normal al medio que la rodea, presentando además un retraso aparente de madurez
psicomotriz y temblor en sus extremidades. Cuando su madre la encontró en la cuna realizando
fuertes movimientos espasmódicos la llevó al servicio de urgencias del hospital. Un pediatra la
examinó e inmediatamente notó un olor rancio en el pañal húmedo de Sol. Se le tomó una muestra
de sangre del talón que dio positiva para un exceso de fenilalanina (Phe) en sangre.
a) ¿Qué patología puede tener Sol? Fundamente su respuesta.
Fenilcetonuria (PKU): es un error congénito del metabolismo debido a la falta de la enzima
fenilalanina hidroxilasa hepática, que cataliza la transformación de Phe en Tyr.
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En esta patología la Phe se acumula en todos los líquidos corporales debido a que no puede
transformarse en Tyr.
Stryer:
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c) Interprete el gráfico de actividad enzimática y saque conclusiones respecto del diagnóstico.
Mencione posibles causas que justifiquen la diferencia de actividad en ambas muestras. Teniendo en
cuenta este resultado, indique la base molecular de la PKU.
Rta: la muestra del paciente presenta una caída significativa en la actividad PAH respecto de la
muestra control, lo cual refuerza el diagnostico de PKU. Las diferencias entre ambas curvas
sugieren una anomalía a nivel enzimático que puede darse por mutaciones en la PHA.
La PKU está incluida en el programa de screening neonatal de nuestro país y, considerando que los
requisitos para que una patología sea incluida en este programa son:
-Causar daños graves e irreversibles.
-Carecer de signos clínicos en el período neonatal.
-Poseer un tratamiento efectivo ante la instalación precoz.
-Poseer una prevalencia lo suficientemente alta como para justificar su investigación.
-Existir un conocimiento acabado del curso clínico de la enfermedad.
-Contar con métodos bioquímicos de diagnóstico y confirmación sensibles, específicos, sencillos y
de bajo costo.
-Contar con un sistema adecuado de recolección, transporte y almacenamiento de muestras.
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Base molecular de la PKU, prevalencia y metabolismo
El metabolismo del aminoácido Phe se realiza, sobre todo, por la hidroxilación a Tyr catalizada por
la enzima fenilalanina hidroxilasa (PAH) y empleando el cofactor tetrahidrobiopterina (BH4). PAH
se expresa en hígado y riñon. La fenilcetonuria clásica (PKU) es causada por mutaciones en el gen
que codifica la enzima PAH, ubicado en el cromosoma 12, produciéndose una proteína inestable y
truncada.
La hiperfenilalaninemia PKU y no-PKU se produce por más de 100 mutaciones de distinto tipo (de
sentido erróneo, sin sentido, inserciones, deleciones) en el gen de PAH.
La actividad de PAH varía desde menos del 1% de lo normal en pacientes con PKU clásica hasta un
máximo de un 35 % de lo normal en aquellos con una forma no-PKU de hiperfenilalaninemia, tal
como un defecto en la producción de BH4.
d-1) Prevalencia: La hiperfenilalaninemia se define como una concentración de Phe plasmática
superior a 150 umol/L (2,5 mg/dL), debida a la incapacidad de convertir Phe en Tyr. La PKU es una
enfermedad de tipo autosómico recesivo, con una prevalencia en la población general de 1/9200
nacimientos (en algunas poblaciones puede ser mayor, como en la escocesa, con una prevalencia de
1/5400 nacimientos).
La Tyr formada por actividad PAH a partir de Phe puede seguir tres rutas metabólicas: dos rutas
sintéticas, una de catecolaminas (DOPA) y otra de melanina; y una ruta catabólica, que la degrada a
acetoacetato y fumarato.
Concentraciones de Phe superiores a 600 umol/L causan graves lesiones neuronales, proporcionales
a la concentración de Phe. (En la PKU severa la concentración de Phe es superior a 1.800 umol/L,
en individuos homocigotas). Debido a la elevada concentración de Phe cobran importancia otras
rutas menores del metabolismo de la Phe, como la formación de derivados cetónicos (fenilpiruvato)
y de ácidos (fenil-lactato, fenilacetato y o-hidroxifenilacetato). Estos metabolitos se eliminan por
orina, donde pueden ser detectados y producen un olor característico “a ratón”. (y color verde al
reaccionar con FeCl3)
d-4) Signos clínicos: en los primeros meses de vida el niño con PKU tiene un desarrollo normal
pero a partir de los dos años se observa un retraso mental que puede ser muy grave y que puede
estar acompañado por episodios convulsivos, hiperactividad y trastornos psiquiátricos de tipo
esquizofrénicos.
En resumen, las principales causas de las alteraciones neurológicas por hiperfenilalaninemia son:
1- Se produce una competencia en el transporte de L- aa al cerebro, alterando la distribución de
los metabolitos. Entre los metabolitos afectados se destaca la disminución cerebral de Tyr (ver pie
de pagina).
2- Esta inhibida la síntesis de mielina y de neurotransmisores, como serotonina, dopamina y
noradrenalina, lo que causa alteraciones neurológicas (la deficiencia de adrenalina provoca
hipoglucemia y la de dopamina hiperprolactinemia).
3- Se acumula el fenilacetato, compuesto neurotóxico, entre otros.
4- La Phe es un inhibidor competivo de la tirosinasa, enzima que inicia la síntesis de melanina,
lo que produce hipopigmentación.
Se puede observar en neonatos una hiperfenilalaninemia transitoria por retraso en la madurez de la
PAH hepática o hijos de madres fenilcetonúricas (sin elevación de la Tyr), o por alteraciones
metabólicas, como la tirosinemia.
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En general se obtiene sangre del talon 4-5 días después del nacimiento y la concentración de Phe en
suero se determina por métodos cromatográficos como HPLC o espectrometría de masas,
estableciéndose un límite de referencia de 150 umol/L, con una relación Phe/Tyr superior a 2,5.
También se determinan los ácidos orgánicos derivados de Phe en la orina, como fenilpirúvico,
fenilacetato y fenil-lactato. Como prueba de confirmación de PKU en individuos con
hiperfenilalaninemia se determina la actividad de PAH en biopsia hepática. Por último, se pueden
hacer pruebas genéticas al individuo portador y a padres y hermanos, para la detección de
portadores.
d-5)Tratamiento de las hiperfenilalaninemias
Actualmente el tratamiento se basa en la restricción dietética de Phe y en algunos pacientes
(aquellos que responden a la recarga con BH 4, recordar que la hiperfenilalaninemia, en el menor de
los casos, puede deberse a deficiencias en la síntesis de BH 4 y no a la de PAH, en la PKU no
clásica), en la administración de BH4.
Existen en el mercado alimentos sintéticos a los cuales se les ha eliminado la Phe.
Un tratamiento dietético de instauración rápida y eficaz en un recién nacido fenilcetonúrico impide
el deterioro mental. Se recomienda entonces un seguimiento semanal hasta los 6 meses de edad,
quincenal hasta los 24 meses y, posteriormente, mensuales. El control de Phe no evita el retraso
mental en las deficiencias de BH4, pero la administración de ciertos precursores puede comportar
cierto beneficio.
Las mujeres embarazadas con PKU deben controlar estrictamente las concentraciones de Phe, ya
que si esta se encuentra aumentada puede causar malformaciones en el feto, microcefalia y retraso
mental. Para ello debe seguir una dieta aún más restrictiva en Phe.
Por las dudas que pregunten: en 2007 se aprobó el Kuvan (Dihidrocloruro de sapropterina), que es
una compuesto sintético biosimilar a la BH4, que favorece el metabolismo de Phe.
Esto queda como adicional (el año pasado se dió en integración metabólica)
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