PRÁCTICA 2

RECUENTO DE BACTERIAS DEL AIRE

1.- INTRODUCCIÓN:

Desde hace algunos años atrás, se ha visto necesario conocer sobre la contaminación microbiana
presente en el aire, siendo la calidad de aire uno de los factores principales que afectan la salud y
productividad de las personas, por lo que las bacterias representan un serio problema para la salud
humana.
Esta calidad es de gran preocupación, ya que durante los últimos 20 años el número de infecciones
invasivas ha persistido debido a que estudios principalmente demuestran que el aire dentro de los
edificios cerrados puede estar más seriamente contaminado que el aire exterior. El análisis de la calidad
del aire interno se recomienda para obtener información sobre la mayoría de los microorganismos
relacionados con enfermedades infecciosas o alergénicas.

La calidad del aire interior está ampliamente considerada como un problema significativo de salud
ambiental y económica. Los indicadores de calidad del aire deben determinar que el aire interior:
satisfaga los requerimientos respiratorios, prevenga la acumulación de contaminantes; y permita el
bienestar (BROWN, 1997).

Los microorganismos son, y siempre han sido, un factor importante para la salud humana. La vida se
inició en forma de microorganismos y éstos han desarrollado una extraordinaria capacidad de
supervivencia que les ha permitido colonizar prácticamente cualquier espacio natural de la tierra y por
supuesto, también los hábitats artificiales creados por el ser humano para cobijarse.

2.- OBJETIVOS:

• Cuantificar las unidades formadoras de colonias bacterianas por metro cubico de aire (UFC/m3)
• Determinar la calidad microbiológica ambiental del aire (bacterias heterótrofas)

3.- MATERIALES:

• 1 Matraz
• Agar para recuento en placa, PCA
• Caldo BIH
• Placas Petri
• Cocina
• Incubadora
• Pipetas 1 mL

4.- MÉTODO Y PROCEDIMIENTOS:

TÉCNICA DE SEDIMENTACIÓN EN PLACA

• Verter el medio PCA en las placas Petri.

• Destapar la placa de PCA en el lugar cuyo nivel de contaminación se desee examinar durante
diferentes intervalos de tiempo: 0,5; 1; 1,5 horas.
• Tapar las placas e incubar durante 24-48 horas a 37 °C.
• Determinar el número de aerobios mesófilos totales ambientales.
MUESTREO POR MÉTODO VOLUMÉTRICO EMPLEANDO JERINGA DE 60 mL

 Se preparará un matriz conteniendo caldo para cultivo BHI, considerando 3.3 g del mismo
para 90 mL de agua destilada.
 Para muestrear el aire se utilizó jeringas de 60 mL cada una para cada área a muestrear,
se realizará 20 aspiraciones en cada área.
 Después de realizada cada aspiración se descargará el aire contenido en la jeringa dentro
de un matraz con medio BHI. Se utilizará la metodología de impinger o burbujeo, que
consiste en tomar aire con un dispositivo automático o mecánico y depositarlo en forma
inmediata en un medio de cultivo líquido.
 Incubación de muestras con BHI
 El matraz que contiene el medio BHI para crecimiento de bacterias se incubará a 37°C por
u tiempo de 48 horas.
Enumeración de bacterias

 Para la enumeración se utilizará el método de recuento en placa, con la ayuda de una pipeta
se obtuvo 0,1 mL de muestra del matraz con BHI y se vierte en una placa Petri vacía y
esterilizada, a la cual después se agregará 10 mL de Agar Plate count.
 Luego se agitará mediante movimientos suaves hacia la derecha e izquierda y se dejará
solidificar por 10 minutos.
 De ahí se llevará las placas a estufa a 37°C por 48 horas.
 Después de ese tiempo se realizará el conteo de bacterias
UFC/mL = Nº colonias x inóculo x factor de dilución

4.- EVALUACIÓN Y RESULTADOS:

Niveles de contaminación biológica

La AENOR ha propuesto un Comité Técnico de Normalización (CTN 171) para elaborar

directrices sobre la calidad del aire interior. En este contexto, la Comisión de la Comunidad
Europea ha propuesto cinco categorías diferentes para evaluar el nivel de contaminación
microbiana en el aire en el interior de los ambientes no industriales (CEC, 1993). Estas
categorías se describen en el cuadro 1.

Cuadro 1. Niveles de microorganismos en el aire de ambientes de interiores no industriales

• Según Norma UNE 100012-2005:
 Estándar microbiológico de superficies interiores previo a la limpieza: Se considera
INACEPTABLE la cantidad de flora microbiana en superficies interiores, cuando el recuento es
superior a 100 ufc/25 cm2.
 Estándar microbiológico de superficies, posterior a la limpieza: Se considerarán dos niveles
obtenidos por comparación de los valores previos y posterior a la limpieza:
1. El valor límite de aceptabilidad de flora microbiana, que deberá ser menor de 100 ufc/25 cm2.
2. El valor de porcentaje de reducción, que deberá ser mayor al 85%.