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Materia: Microbiología Industrial

Profesor: Justina Ocampo Linares

Profesora Auxiliar: Gloria de los Ángeles Constantino Reyes

Grupo: 8c9A

Horario: Martes de 12:00 – 15:00 hrs y Jueves de


13:00 – 16:00 hrs

Fecha: 1 de Abril del 2018

Práctica #8: “FERMENTACIÓN BACTERIANA DE


CARBOHIDRATOS (PRODUCCIÓN DE ÁCIDO Y
GAS)”
PRACTICA No.8:

“FERMENTACIÓN BACTERIANA DE CARBOHIDRATOS (PRODUCCIÓN DE


ÁCIDO Y GAS)”

Fecha de realización: 1/04/2018

OBEJTIVO:

Al término de la práctica el alumno estará capacitado para realizar pruebas de


fermentación y observar la producción de ácido y gas a partir de azúcares de un
microorganismo determinado.

FUNDAMENTO:

Consiste en inocular un medio especifico que contiene un azúcar determinado con


un microorganismo que al aprovechar el carbohidrato para producir la energía
necesaria va a generar acido y gas.

FERMENTACIÓN BACTERIANA DE CARBOHIDRATOS.

Los carbohidratos son la fuente principal de energía y estructuras de carbono para


la síntesis de sustancias celulares de los microorganismos, la fermentación se
refiere generalmente a la degradación anaerobia de los carbohidratos (aunque
también hay otros sustratos, como los aminoácidos, algunos ácidos orgánicos,
purinas, pirimidinas, etc., por ejemplo, que pueden ser enzimas que contenga el
microorganismo. Los productos finales de la fermentación varían de un organismo
a otro también en función de los jugos 𝐶𝑂2 y otros compuestos orgánicos que son
alejados medio exteriores. En el laboratorio, es posible detectar de manera indirecta,
algunos de estos productos, la presencia de ácido en el medio se puede detectar
agregando un indicador de pH, la producción de gases mediante campanas Durham
invertidas que se encuentran dentro del tubo que se está estudiando. Hay que hacer
notar que cada caldo de fermentación continúe únicamente un solo carbohidrato
específico.

ACTIVIDADES

MATERIAL

a) Siete tubos de ensaye para fermentación, con medio de cultivo adecuado.

b) Mechero

c) Asa bacteriológica

d) Etiquetas
e) Algodón

f) Campanas Durham

MATERIALE BIOLÓGICO

a) Cultivos de Escherichia coli de 24 hrs.

b) Cultivos de Proteus sp de 24 hrs.

c) Cultivos de Staphylococus aureus de 24hrs.

REACTIVOS

a) Purpura de Bromocresol (bromocresol).

b) Caldos nutritivos preparados individualmente con carbohidratos al 1% (


glucosa, lactosa, sacarosa, galactosa, maltosa, xilosa, y manitol)
respectivamente.

TÉCNICA

Las pruebas de producción de acido y gas se puede realizar al mismo tiempo,


en el mismo tubo y utilizando el mismo carbohidrato, pero también se pueden
realizar por separado, si así se desea.

PRODUCCIÓN DE ÁCIDO Y GAS

1. En un tubo de ensaye para fermentación que contenga caldo nutritivo, el


indicador purpura de bromocresol y el carbohidrato indicado inocular un
microorganismo los tubos deben inocularse dobles.

2. Incubar a 35°C por 48 hrs.

3. Anote sus resultados.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

A. PRODUCCIÓN DE GAS.

POSITIVO. Aparecen burbujas dentro del tubo de fermentación.

NEGATIVO. No hay producción de burbujas.

B. PRODUCCIÓN DE ÁCIDO
ACIDEZ. Hay viraje de color, de púrpura a amarillo.

NEGATIVO. No hay viraje de color, continua púrpura.

ALTERNATIVA:

1. En la producción de gas en caso de no contar con tubos Durham, ampolletas


o tubos de vidrio cerrados por uno de sus extremos.

2. En la producción de ácido, el purpura de bromocresol puede ser sustituido


por rojo fenol, obteniéndose resultados semejantes.

Observaciones

1) 2)

Comenzando con la preparación de los tubos de ensaye estériles nos dimos a la


tarea de crear un medio aséptico para evitar la introducción de otros
microorganismos o agentes bacterianos en el interior de los tubos, colocando un
mechero de bunsen y ajustando la flama de manera que este impidiera la expansión
de microorganismos en el aire. Posteriormente, empleando la indumentaria
adecuada colocamos las Campanas Durham en el interior de los tubos, estos se
colocaron junto del mechero de bunsen, posteriormente fueron cubiertos con el
algodón y los gorros de papel traza. Cabe mencionar que las campanas se
colocaron boca debajo de manera que al aplicar los caldos de azúcares estos se
mantuvieran hundido de manera que se pueda observar la formación de burbujas y
determinar si existe una fermentación en el medio o no.
3) 4)

Posteriormente el auxiliar de laboratorio nos brindó los medios realizados, que


consistieron en caldos nutritivos preparados individualmente con carbohidratos al
1% (glucosa, lactosa, sacarosa, galactosa, maltosa, xilosa, y manitol)
respectivamente, se añadieron en los tubos de ensayo y se etiquetaron, estos se
aplicaron a los tubos a una temperatura de 60°C para que no perdieran su
esterilidad. Una vez colocados en los tubos de ensaye cuidadosamente agitamos el
tubo de arriba hacia abajo para que las campanas de Durham se llenarán
completamente de esta manera quedan en la parte inferior del tubo.

5) 6)

Proseguimos a inocular el mismo microorganismo en los medios de cultivo, en


este caso sembramos E. Coli, de manera cuidadosa realizamos la siembra cerca
del mechero de bunsen, creando un medio aséptico se realizó 2 veces la siembra
en cada uno de los tubos de ensayo

7)
8)

Se aplicó el Purpura de Bromocresol (bromocresol) en cada uno de los medios


cambiando de color amarillo a púrpura de esta manera podremos determinar la
acidez una vez pasadas las 48 horas de incubación. Posteriormente se introdujeron
en la incubadora empleando un tiempo de incubación de 48 horas hasta poder
obtener los resultados requeridos para determinar la presencia de fermentación en
los medios respecto al microorganismos aplicado.

Resultados
A) Producción de gas

Mo: E. Coli Producción de gas


Medio de cultivo Positivo Negativo
Maltosa X
Lactosa X
Glucosa X
Galactosa X
Xilosa X

B) Producción de acidez (Viraje de púrpura a amarillo)

Mo: E. Coli Producción de acidez (Viraje de púrpura a amarillo)


Medio de cultivo Positivo Negativo
Maltosa X
Lactosa X
Glucosa X
Galactosa X
Xilosa X

9) 10)

Conclusiones:

Al finalizar la sesión puedo concluir que los medios de cultivo empleados son
adecuados ya que estos atribuyen a los microorganismos altos contenidos de
azúcares, que pueden descomponerse fácilmente, las condiciones del medio fueron
anaerobias (ausencia de oxígeno) los resultados del viraje fueron exitosos en 4 de
los 5 medios en los tubos, también la producción de gas este se dio positivo en
todos los medios. La E. Coli es un microorganismo efectivo para las fermentaciones
ya que recordemos que las condiciones para una fermentación eficaz y rápida
controladas adecuadamente deben ser: temperatura, pH, concentración de
azúcares, agitación mecánica en la fermentación, etc.

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