Laboratorio 4

Espectrofotometría
Objetivos:
 Familiarizarse con las técnicas espectrofotométricas.
 Conocer las diversas utilidades que posee es el espectrofotómetro.
 Conocer distintos métodos para determinar la concentración de una muestra de concentración
desconocida.
Materiales

 Reactivos
 Vaso de precipitado de 100 ml
 Pipeta parcial de vidrio de 2 ml
 Propipeta para 10 ml y para 2 ml
 Gradilla para tubos de ensayo
 Plumón
 Reloj
 Cubetas para espectrofotómetro
 Gradilla para cubetas
 Micropipeta de 100-1000 ml
 Agua destilada
 Espectrofótometro Metertek SP-830

Espectrofotómetro
Un espectrofotómetro es un instrumento usado en la física óptica que sirve para medir, en función
de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos
haces de radiaciones. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de
sustancias y microorganismos.
Hay varios tipos de espectrofotómetros, puede ser de absorción atómica o espectrofotómetro de
masa.
Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de una
muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador
realizar dos funciones:
1. Dar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra
2. Indicar indirectamente que cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en la
muestra

ESPECTROFOTOMETRIA:
Se refiere a la medida de cantidades relativas de luz absorbida por una muestra, en función de la
longitud de onda. Cada componente de la solución tiene su patrón de absorción de luz
característico. Comparando la longitud de onda y la intensidad del máximo de absorción de luz de
una muestra versus soluciones standard, es posible determinar la identidad y la concentración de
componentes disueltos en la muestra (solución incógnita).
Las ventajas de la espectrofotometría sobre otros métodos analíticos de laboratorio son varias: es
rápida, precisa, versátil, fácil de usar y eficiente en costo. Los espectrofotómetros se han mejorado
en precisión y versatilidad en los últimos años con los avances de tecnología, y hoy se consideran
indispensables en un laboratorio de química analítica.
La espectrofotometría se usa para diversas aplicaciones, como:
 Análisis cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio de
investigación,
 Estandarización de colores de diversos materiales, como plásticos y pinturas,
 Detección de niveles de contaminación en aire y agua,
 Y determinación de trazas de impurezas en alimentos y en reactivos.
  Para obtener nuestras muestras debemos realizar algunas disoluciones, para lo cual
utilizaremos la siguiente igualdad, y de esta manera sabremos el volumen de la solución de
albúmina que necesitamos ocupar:

V1 * C1 = V2 * C2

La espectrofotometría ultravioleta-visible usa haces de radiación del espectro electromagnético, en

el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800
nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible
del espectro. Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le conoce también como rango de uv cercano
, la espectrofotometría visible solamente usa el rango del campo electromagnético de la luz visible ,
de 400 a 800 nm.

Un espectrómetro típico posee cuatro componentes básicos: una fuente de radiación que tiene
intensidad constante en el rango de longitud de onda que cubre (usualmente es lámpara de
tungsteno para luz visible, y deuterio para ultravioleta), un compartimiento para la muestra, un
monocromador que separa la banda de
longitud de onda deseada del resto del espectro y la dispersa al compartimiento de la muestra, y
un fotodetector, que mide cuantitativamente la radiación que pasa por la muestra.
En general, los espectrómetros miden en % de transmitancia (T) y absorbancia (A). El por ciento de
transmitancia se refiere a la cantidad de radiación que pasa a través de la muestra y alcanza el
detector. Una solución límpida, no absorbente, mostrara una lectura de 100% de transmitancia en
un espectrofotómetro calibrado. Las unidades de absorbancia van de 0 a 2.
Las medidas de absorbancia son frecuentemente usadas en química analítica, ya que la
absorbancia es proporcional al grosor de una muestra y la concentración de la sustancia en ésta.
El espectrofotómetro tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática (de una
longitud de onda particular) a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida
por dicha muestra
El espectrofotómetro mide la absorbancia de una muestra en los espectros de luz ultravioleta y
visible (200 a 850 nm). El largo de onda es determinado por un prisma que descompone el rayo de
luz de acuerdo al largo de onda escogido. Luego la luz pasa por una hendidura que determina la
intensidad del haz. Este haz atraviesa la muestra y llega a un tubo fotográfico, donde es medido.
La cantidad de luz que atraviesa la muestra es el porcentaje (%) de trasmitancia