MICROPROPAGACIÓN Y

CULTIVO IN VITRO DE
BROTES DE PAPA (Solanum
tuberosum MEDIOS
NOMBRE:
DAVID
VILCA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
MENCIÓN EN MICROBIOLOGÍA Y LABORATORIO
CLÍNICO
PUNO – PERÚ
2016

BIOTECNOLOGIA
VEGETAL
MICROPROPAGACIÓN Y CULTIVO IN VITRO DE BROTES DE PAPA (Solanum tuberosum)
MICROPROPAGATION AND BUDS IN VITRO CULTURE OF POTATO (Solanum tuberosum )
David Vilca Ticona*
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGIA

RESUMEN

En la investigación se realizó en el laboratorio de Micropropagación de la Facultad de Ingenieria

Agronomica de la Universidad Nacional del Altiplano-Puno, en donde utilizaron segmentos uninodales
de plántulas obtenidas por micropropagación, los que se cultivaron autotróficamente, sin agregar
sacarosa ni reguladores del crecimiento; para ello fue necesario evaluar contenedores descartables,
substratos y soluciones nutritivas. Además, se buscó un método que permitiera la propagación de las
plántulas obtenidas autotróficamente, para lo cual se evaluaron microesquejes de distinta ubicación en
la planta madre según su capacidad de regeneración y adaptabilidad al trasplante. Los segmentos,
plantados en vermiculita en cajas de polipropileno y regados con solución nutritiva hidropónica,
enraizaron a los 7 días y a los 15 días desarrollaron una plántula de varios nudos, con buen tamaño y
vigor como para ser trasplantados en invernadero. Este crecimiento se comprobó en 10 variedades
comerciales de papa. Los esquejes de los cortes sucesivos se plantaron en substrato a base de turba
(Sphagnum). Tanto los esquejes apicales como los esquejes medios enraizaron sin la necesidad de
aplicar reguladores del crecimiento; además las plántulas cortadas rebrotaron, optimizándose el uso del
material utilizado. Las plántulas obtenidas autotróficamente presentaron un aspecto morfológico
distinto a las obtenidas comúnmente in vitro, siendo aquéllas de baja altura, pero de tallos robustos y
hojas anchas.

Palabras Clave: Micropropagacion, Plantula, Solamun tuberusm

RESUMEN

The investigation was conducted in the laboratory of micropropagation of the Faculty of Agronomic
Engineering of the National University of the Altiplano-Puno, where they used uninodal segments of
plantlets for micropropagation, which were grown autotrophically without adding sucrose or growth
regulators; for it was necessary to evaluate disposable containers, substrates and nutrient solutions.
Furthermore, a method that allows the propagation of plantlets autotrophically, for which different
location microcuttings were evaluated according to the mother plant regeneration capacity and
adaptability to transplantation sought. Segments, planted in vermiculite in boxes of polypropylene and
washed down with hydroponics nutrient solution, rooted at 7 days and 15 days developed a seedling of
several knots, with good size and vigor to be transplanted in a greenhouse. This growth was found in 10
commercial varieties of potato. Cuttings successive cuts were planted in peat-based substrate
(Sphagnum). Both the apical cuttings and rooted cuttings media without the need for growth regulators;
also cut sprouted seedlings, optimizing the use of the material used. Autotrophically plantlets presented
a commonly different than those obtained in vitro morphological appearance, with those low-rise, but
sturdy stems and broad leaves.
Keywords : micropropagation, Plantula , Solamun tuberusm
INTRODUCCION
La papa (Solanum tuberosum,L) normalmente
es propagada vegetativamente. El método de
crecimiento mínimo in vitro es uno de los más
utilizados y constituye una alternativa de las
técnicas del cultivo de tejidos para mantener
plántulas en mejores condiciones sanitarias.
Mediante esta técnica se obtiene un estricto
control sobre plagas y enfermedades al
encontrarse el material confinado en un
microambiente aséptico, también el sistema
ocupa muy poco espacio y al propagarse
clonalmente permite el mantenimiento del
genotipo (7, 8). Con el presente trabajo se ha
querido lograr una metodología que permita
evaluar y conservar variedades de papa
(Solanum tuberosum L) para asegurar el
mantenimiento de dicho material por largos
periodos. La papa es uno de los cultivos más
estudiados y versátiles en los últimos años en la
implementación de nuevos medios y técnicas de
cultivo de tejidos, que permitan el desarrollo de
plantas completas y sanas a partir de
meristemas apicales, yemas axilares, segmentos
nodales, raíces, tubérculos, protoplastos y
células cultivadas in vitro.
La conservación in vitro en papa se logra bajo
la utilización de dos técnicas diferentes, por
medio de la limitación del crecimiento hasta
tasas mínimas (Conservación in vitro) o la
supresión total del metabolismo celular
(Criopreservación) (1). En papa, se ha
comprobado que los cultivos de yemas,
mantenidos a 9-10° C permanecen viables
durante un año (11) y si esa temperatura
disminuye a 6-8° C pueden mantenerse hasta
períodos de 3 a 5 años (2).
En la multiplicación de plántulas in vitro de
papa (micropropagación) se utilizan medios
nutritivos que incluyen sacarosa y reguladores
del crecimiento. Uno de los problemas comunes
en los laboratorios de cultivos in vitro
comerciales y de investigación, es la
contaminación del medio con microorganismos.
(Liefert et al., 1992; Reed et al., 1994) Esto no
sólo afecta el crecimiento y la sanidad de las
plántulas sino que repercute en el ya elevado
costo de producción de estos laboratorios. El
uso de antibióticos en el medio no ha resultado
una solución práctica debido a que se han
observado efectos fitotóxicos. (Lizárraga et al.,
1991; Gilbert J. E et al., 1991). Kozai et al.
(1992) investigaron las condiciones ambientales
dentro de los envases comúnmente utilizados en
cultivos in vitro y determinaron que
controlando el micro ambiente se logra
favorecer el crecimiento y desarrollo de las
plántulas, reducir los desórdenes fisiológicos,
evitar pérdidas por contaminación y facilitar la
aclimatación durante el trasplante de papa y
otros cultivos, lo que llevaría a una reducción
del costo de producción. Estos autores
observaron que se pueden regenerar plántulas
de papa por medios autotróficos debido a que
los segmentos y las plántulas obtenidas poseen
una alta capacidad para fotosintetizar.
OBJETIVO
 El objetivo de este trabajo fue
desarrollar un método de propagación
rápido basado en los conceptos de un
cultivo autotrófico que favoreciera el
crecimiento de las plántulas de papa y
 además, redujera al mínimo las pérdidas
debido a la contaminación y al shock de
trasplante.
ANTECEDENTES
Henshaw et al, referidos por Lindsey (4),
encontraron en cultivos de meristemas Solanum
spp, que el nivel de sobrevivencia se
incrementó a un 83% cuando las temperaturas
diurna y nocturna fueron de 12° C y 6° C,
respectivamente. Por otra parte, se ha logrado
extender el período de transferencia de ápices
caulinares de papa cuando la temperatura es
reducida y se favorece la sobrevivencia cuando
se incrementa el volumen del medio y la
concentración de sacarosa (12). También se
comprobó que se podía aumentar la tasa de
sobrevivencia a un 60% después de 12 meses,
combinando ácido abscísico y manitol en el
medio (13). Mientras que Warham et al (11)
pudieron establecer las condiciones óptimas de
conservación in vitro de algunos cultivares de
papa. Encontraron que a 10° C bajo 500-1,000
Lux por 18 horas /día y añadiendo manitol al
medio se lograba un 90-100 % de viabilidad al
material vegetal.
En 1962, MURASHIGE y SKOOG (10)
desarrollaron un medio con el cual se ha
obtenido macho éxito en los cultivos de tejidos
vegetales, ellos incrementaron los niveles de
amonio y potasio en relación a otros medios
nutritivos que existían para la época y
demostraron que había un aumento
proporcional en el desarrollo de las plántulas
obtenidas. Los parámetros utilizados fueron: el
incremento en el peso seco y peso fresco en
cultivos de callo de Nicotiana tabacum, a
medida que eran añadidos nuevos elementos al
medio nutritivo en estudio. Aunque este medio
se desarrolló para callos de tabaco, se ha
demostrado que resulta excelente para el cultivo
de meristemas de papa, sin embargo, los
resultados que se obtienen dependen de la
variedad de papa que se estudie.
En Venezuela, los trabajos pioneros en
propagación de plantas "in vitro", se han
realizado en el laboratorio de cultivos de tejidos
vegetales de la Universidad Central, con el
estudio de la propagación de Nicotiana glauca
(11) iniciadas en 1975 y con la propagación de
Dianthus heddwigi (clavel) (3). La presente
investigación se realizó en Solanum
tuberosum y no solo se analizan aspectos
fisiológicos y morfológicos de la propagación
"in vitro" de dicha especie, sine que además se
estudian posibilidades de usar esta metodología
como un medio de obtención de plantas sanas a
partir de plantas contaminadas con virus
sistémico. La variedad utilizada es proveniente
de los Andes venezolanos, "Arbolona negra" y
ha sido estudiada anteriormepte por otros
investigadores, DEBROT, LASTRA, LADERA
(2).
Consistencia adecuada del medio
Los medios solidificados con agar tienen el
gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan
adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusión de este solidificante y de que
otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios sólidos son de uso
universal, por su versatilidad y comodidad, pero
hay también gran cantidad de medios líquidos
cuyo uso está ampliamente extendido en el
laboratorio.
Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar
perfectamente estériles para evitar la aparición
de formas de vida que puedan alterar,
enmascarar o incluso impedir el crecimiento
microbiano normal del o de los especímenes
inoculados en dichos medios. El sistema clásico
para esterilizar los medios de cultivo es el
autoclave (que utiliza vapor de agua a presión
como agente esterilizante)
En este trabajo se cubrieron las siguientes fases:
a) Determinación de un balance óptimo de
sustancias de crecimiento para lograr el mejor
desarrollo de los explantes de meristemas
laterales y apicales, hasta la formación de
plantas completes. b) Establecimiento del
tamaño y constitución del explante más
adecuado, que garantice tanto el normal y
rápido desarrollo de la plántula como la
liberación de contaminación viral de las nuevas
plántulas obtenidas. c) Determinación de las
condiciones de cultivo para asegurar la su
pervivencia de la planta obtenida "in vitro" en
condiciones naturales.
MATERIALES Y METODOS
Materiales y equipos
 Materiales
 Papel craft.
 Papel aluminio.
 Pabilo.
 Agua destilada.
 Placas Petri.
 Autoclave
 Ligas.
 Tubos de ensayo
 Mechero bunsen.
 Lejía.
 Balanza
 Algodón
Métodos
En la investigación se realizó en el laboratorio
de Micropropagacion de la Facultad de
Ingenieria Agronomica de la Universidad
Nacional del Altiplano - Puno, en el primer
nivel de la misma, con ayuda de los reactivos y
materiales del mismo laboratorio.
Se procedió a seleccionar plantas in vitro, que
presentaron uniformidad en tamaño y vigor,
llevándolas a la cámara de flujo laminar,
previamente esterilizada, donde se seccionaron
en nudos de 1 cm de longitud tomados de la
parte media de las plantas, desprovistas de la
yema apical, hojas y raicillas. La implantación
aséptica se realizó en diferentes medios de
cultivo. Fueron utilizados tubos de ensayos de
150 mm x 20 mm, que contenían 20 mi del
medio básico de Murashige y Skoog de 1962
suplementado con los constituyentes orgánicos:
Sacarosa, Manitol y Agar.
Se obtuvieron segmentos de un nudo
(microesquejes uninodales) de plántulas in vitro
de 20 días de crecimiento los cuales se
plantaron en cajas plásticas descartables. Se
comparó el crecimiento y desarrollo de los
microesquejes en dos clases de cajas fabricadas
con distintos materiales (polipropileno y
acetato), dos tipos de substratos inertes
(vermiculita y esponja vegetal) y dos soluciones
nutritivas sin sacarosa ni reguladores de
crecimiento (solución hidropónica SNH y
medio MS líquido). La descripción de los
elementos utilizados y condiciones de cultivo se
presenta en la Tabla 1. A los 7 y 15 días se
midió el crecimiento de la parte aérea (altura de
los segmentos), tasa de multiplicación
(segmentos nuevos producidos/esqueje
trasplantado) y las pérdidas por contaminación.
Se establecieron 8 tratamientos con 3
repeticiones. El sistema que produjo el mejor
crecimiento de los microesquejes, se verificó
con otros10 cultivares para los que se plantaron
24 microesquejes/cultivar
los explantes de los meristemas sembrados en
los medios seleccionados se mantuvieron en
cámara de crecimiento hasta que se
desarrollaron completamente, es decir, hasta la
obtención de la planta completa. con el objeto
de realizar las pruebas virales y verificar la
erradicación del virus en éstas. >;e verificó la
presencia de virus en las plantas indicadoras,
las plantas seleccionadas fueron Nicotiana
tabacum var. White burley y var.Sansum,
Nicotiana glutinosa, Chenopodium
amaranticolor, Datura metel, papa A6 y
Gomphrena globosa.
RESULTADOS
Se determinó que el explante más adecuado
para garantizar el desarrollo normal de la
plántula complete, así como la erradicación del
virus, fue el constituido por el Domo más dos
primordios foliares, la longitud de éste fue de
0,8 mm.
de crecimiento. A pesar que T2 contenía los
mismos inhibidores de crecimiento su efecto
fue contrarrestado con la presencia de mayor
concentración de azúcares (3% sacarosa y 4%
manitol).
Con respecto a la altura de las plántulas, se
pudieron constatar diferencias significativas
entre los tratamientos (Tabla 1), apreciándose
que los que presentaron un menor desarrollo
radical también mostraron el menor desarrollo
del tallo y número de nudos al quinto mes de la
implantación. Mientras que el T4, al que no se
le suministró retardante de crecimiento en el
medio, presentó un desarrollo aéreo y radical
significativamente mayor que los restantes
tratamientos, así como también del callo en la
base de los nudos.
Tabla 1. Valores promedio observados en
plántulas de papa (Solanum tuberosum L)

Transcurridos los primeros días del ensayo, se

hizo notoria la presencia de hongos en el T1, el
cual tuvo que ser eliminado al poco tiempo, por
esa razón no se cuenta con información del
mismo

En el estudio del número de raíces formadas, se

observaron diferencias significativas entre los
tratamientos T2, T4 y T6, mostraron una misma
tendencia respecto a la variable en estudio,
destacando el T4 a los 5 meses, momento en el
cual culminó el ensayo. También se observó,
que los tratamientos T3 y T5 presentaron una
menor altura de plántulas (Tabla 1). Estos
últimos tratamientos tienen en el medio menos
concentración de azúcares y contienen ABA y Figura N° 1. Segundo día de germinación del
CCC produciendo un efecto en la disminución meristemo de la papa
 que, en las primeras etapas de desarrollo de los
explantes, estos experimentaban una
disminución en el contenido de agua, debido a
que estaban pasando por un período de
adaptación a las condiciones de cultivo; el
aumento posterior en el contenido de agua está
asociado a los procesos de alargamiento celular
que experimenta la planta durante su
crecimiento.

- Durante las etapas de desarrollo de los

explantes se observó un aumento en el
contenido de nitrógeno total, que obedece a los
procesos de formación y constitución que están
Figura N° 2. Octavo día de germinación del
ocurriendo en estos explantes; el, posterior
meristemo de la papa
descenso corresponde a un incremento en la
acumulación de otro productos, tal como
carbohidratos, que son necesarios en etapas
posteriores del desarrollo de la planta.

LITERATURA CITADA

1. Bajaj, Y. 1981. Regeneraron of plants

Figura N° 3. Dia 14 de germinación del
meristemo de la papa
CONCLUCIONES
- El explante del meristemo más adecuado, que
permitió el normal y rápido desarrollo del
explante, además de la liberación de la
contaminación viral, fue el constituido por el
Domo más dos primordios foliares y 0,8 mm de
longitud.
- Respecto a la evaluación del crecimiento de
los tejidos en el medio óptimo, se determinó
from potato meristems freezepreserved
for 24 months. Euphytica 30: 141-135.
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