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DISCUSIÓN
Para la extracción de DNA comúnmente se usan resinas costosas, o por fenol-cloroformo, siendo
tóxicas o llevando mucho tiempo; por ello actualmente el uso de kits comerciales aseguran un alto
rendimiento y pureza de DNA, a menor tiempo y costo (Thermo Scientific ™, 2018). Se utilizo
sangre bovina recolectada en tubos morados con EDTA (muestra #07) y el kit comercial “GeneJET
Whole Blood Genomic DNA Purification Mini Kit” , un método rápido y eficaz que aseguro la
obtención de DNA no degradado, libre de RNA e inhibidores, gracias a sus columnas con
membranas de sílice; permitiendo visualizar una banda clara y definida en la electroforesis (figura
1).
La electroforesis permite separar el DNA en bandas y observarlas en geles de acrilamida o agarosa,
quedando los fragmentos grandes en la parte superior, mientras que a la parte inferior se van los
más pequeños; y conocer su tamaño al compararlos con un marcador molecular (Fierro,2017). En
el laboratorio se elaboró un gel al 0,8% de agarosa siendo este un porcentaje bajo y por tanto el
tamaño de bandas que se obtuvieron fueron grandes; esto se confirmó al comparar con el marcador
molecular usado (1kb), donde se vio que las bandas obtenidas se ubicaron solo en la parte superior
del gel, correspondiente al DNA genómico.
A demás para la observación de bandas y estimación de la cantidad relativa de DNA en el gel,
colorantes como el bromuro de etidio, SYBR Gold, SYBR Green, cristal violeta, entre otros, son
utilizados (Fierro & Gutiérrez, 2001). En el laboratorio se usó SYBR Safe, ya que posee una buena
sensibilidad y no es cancerígeno como el bromuro.
Para la corrida del gel es necesaria una solución amortiguadora con sales, que permita pasar la
corriente y movilice el DNA, estos son los buffers de electroforesis, tris-borato- EDTA o tris-
acetato EDTA (Lee, 2012). Se utilizó TBE (1x) ya que en comparación con el TAE tiene mejor
capacidad de amortiguación por períodos largos.
CONCLUSIONES
➢ En la investigación y diagnóstico de enfermedades es imprescindible trabajar con una
buena calidad de DNA, que dependerá del proceso de extracción y verificación por técnicas
como electroforesis.
➢ Se obtuvo DNA puro y libre de inhibidores a partir de sangre bovina con un kit comercial
basado en columnas de membranas de sílice, que aseguraron la adhesión del DNA a la
membrana.
➢ Se obtuvo DNA genómico, al observar una banda de tamaño mayor a 1kb, en la parte
superior del gel de electroforesis.
RECOMENDACIONES
➢ Al momento de utilizar SYBER safe hacerlo con mucha precaución.
➢ No descartar ningún tubo ni líquido hasta haber terminado la práctica.
➢ No olvidar la agitación en vórtex para homogeneizar las mezclas.
➢ Los guantes que se usen en el área de Biología Molecular deben ser desechados en la misma
área.
BIBLIOGRAFÍA
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Obtenido de https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/K0782