Instrumentación de métodos luminiscentes

Como la mayor parte de los instrumentos utilizados en los métodos espectroscópicos, los
componentes principales de un fluorímetro son: una fuente de radiación, un sistema selector de
longitudes de onda (filtro o monocromador), una célula conteniendo la muestra, y un detector. Sin
embargo, una diferencia importante entre la fluorimetría (también la fosforimetría) y los demás
métodos espectroscópicos es la presencia de dos filtros (o dos monocromadores); uno para
seleccionar la longitud de onda de excitación y otro para la de emisión.

Fuente de radiación: En espectrómetros de luminiscencia se necesitan fuentes de radiación más

intensas que las lámparas de volframio o de deuterio que se utilizan en las medidas de absorción.
Anteriormente se indicó que la intensidad de fluorescencia es directamente proporcional a la
potencia del haz incidente. La lámpara de arco de xenón presenta un espectro esencialmente
continuo que se extiende por las regiones ultravioleta y visible, siendo muy utilizada en
espectrofluorímetros de red. Por otra parte, en los fluorímetros de filtro, suele utilizarse la
lámpara de arco de mercurio, la cual emite un intenso espectro de líneas sobre un fondo continuo.
El uso de esta fuente puede implicar una mayor sensibilidad, debido a la alta intensidad de las
líneas del mercurio.

Filtros y redes Los sistemas para seleccionar la longitud de onda más empleados en instrumentos
de luminiscencia son filtros y redes. De hecho, los instrumentos se clasifican en florímetros de
filtro y espectrofluorímetros de red. De los primeros, los más utilizados son los filtros de
interferencia, por proporcionar pequeñas anchuras de banda. Por lo que respecta a las redes,
ofrecen las ventajas de presentar resolución uniforme y dispersión lineal a todas las longitudes de
onda. El mayor inconveniente es que pasan varios órdenes espectrales, lo cual puede evitarse
usando filtros en el camino óptico.

Los Prismas Los prismas se usan poco en instrumentos para luminiscencia, porque, aunque
proporcionan una gran dispersión en el ultravioleta, es en el visible donde se realizan muchas
medidas, y, además, para obtener una sensibilidad adecuada se necesitaría un prisma muy grande,
lo cual no es económico.

Cubetas Las cubetas utilizadas para contener la muestra suelen ser de cuarzo, para permitir el
paso de la radiación ultravioleta. Las más típicas son de 1 cm de espesor, como las utilizadas para
medidas de absorción, excepto que todas las caras son transparentes a la radiación (están
pulidas), ya que generalmente las medidas de fluorescencia se realizan en un ángulo de 90º
respecto a la radiación incidente; a otros ángulos, la dispersión por la disolución y las propias
paredes de la cubeta puede originar mayor ruido de fondo.

Detectores En cuanto a los detectores, la mayor parte de los fluorímetros y espectrofluorímetros

actuales usan tubos fotomultiplicadores como sistemas para detectar la radiación de
fluorescencia.

Finalmente, mencionar que mientras que los más precisos espectrofotómetros de absorción
ultravioleta y visible utilizan un dispositivo de doble haz, esta operación no es práctica en
instrumentos de luminiscencia. Por ello, hay que tener en cuenta siempre los problemas
inherentes al empleo de haz sencillo.