I.

OBJETIVOS

1.1. OBJETIVO GENERAL:

Ensaya los métodos de identificación diagnóstica in Vitro en el laboratorio

de especies representativas: Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

1.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

Aplicar las técnicas de siembra adecuadas para el sembrado en los

distintos medios de cultivo (Agar gelatina, agar TSI, agar DNASA, Citrato
Simmons, caldo Tioglicolato).

Conocer el Fundamento del agar TSI, agar Gelatina, agar DNASA, Citrato
Simmons y caldo Tioglicolato para el cultivo de microorganismos.

Identificar lo microorganismos en función a su comportamiento

bioquímico.
 V. CONCLUSIONES

Las pruebas bioquímicas se utilizan para determinar la actividad

metabólica de una cepa pura. Son empleadas principalmente la
identificación y clasificación de bacterias. Se pueden resumir en los
siguientes puntos:
•Sustrato (contenido en el medio de cultivo)
•Enzima o vía metabólica (secretada o en el interior del microorganismo)
•Producto
•Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean)

Los medios de cultivo usados en la práctica como Agar Gelatina, Agar

DNASA, Agar TSI, Citrato Simmons y Caldo Tioglicolato; fueron
importantes para la identificación de los microorganismos cultivados en
función a su comportamiento bioquímico.

Las técnicas de siembra se utilizan para inocular por distintos métodos

sobre un medio de cultivo (líquido, semisólido y sólido) una muestra que
contenga bacterias con el fin de reproducirlas para aumentar el número
de individuos de la población y formar colonias en el caso de medios
sólidos.

Las diferentes técnicas de siembra aprendidas en la práctica fueron:

Siembra en punta realizada en Agar Gelatina y en el Caldo Tioglicolato,
siembra redondo en superficie en Citrato Simmons y la siembra en punta
y estría en superficie realizada en Agar TSI y siembra en redondo en
Agar DNASA; estas técnicas de siembra fueron importantes para realizar
correctamente el sembrado en los diferentes medios de cultivo.

VI. DISCUSIONES
 El Agar T.S.I. (Triple Sugar Iron Agar) es un medio de cultivo ampliamente
utilizado para la diferenciación de bacilos Gram negativos entéricos en
base a la fermentación de carbohidratos y la producción de H2S. Los
cambios en el pH se verifican gracias al contenido de rojo de fenol: la
producción de ácido se ve como cambio del color de rojo anaranjado a
amarillo, en tanto que la alcalinización se observa como viraje hacia el
rojo.

El Caldo Tioglicolato se considera un medio de enriquecimiento, no

selectivo ya que permite el desarrollo de la mayoría de las bacterias no
exigentes. Los requerimientos nutricionales son proporcionados por el
extracto de levadura, el digerido pancreático y la glucosa. El mismo medio
regula la cantidad de oxígeno dentro del medio, estando ausente en el
fondo del tubo y en cantidad suficiente en la superficie.

Agar Gelatina Determina si el microorganismo es capaz de degradar la

gelatina. Esta prueba determina la capacidad de un organismo de producir
enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas) que licuen la gelatina.

Agar DNASA es un medio de cultivo para la detección de enzimas

desoxirribonucleasas.Es especialmente útil para la diferenciación de entre
especies de Staphylococcus, así como para la diferenciación de
Serratia spp. De especies de Klebsiella y Enterobacter.

Agar Citrato Simmons es un medio utilizado para la diferenciación de

enterobacterias en base a la capacidad de usar citrato como única fuente
de carbono y energía.

VII. RECOMENDACIONES
Es obligatorio el uso de todos los implementos de bioseguridad como
gorro, guantes, mascarilla, lentes, cubre calzado y guardapolvo.

Se requiere que la puerta del laboratorio esté cerrada y que el ingreso al

laboratorio sea restringido.

Lavarse las manos antes y después de realizar la preparación de medios

de cultivo u otra experiencia que se desee realizar.

Limpiar con alcohol la mesa de trabajo y evitar contaminar con algunos

objetos sobre ella como celulares, cuadernos, cartucheras, mochilas, etc.

Para el sembrado siempre esterilizar antes y después de usar el asa de

siembra para no contaminar otros medios.

Es importante rotular las, placas, y tubos de ensayo indicando la

sustancia o medio de cultivo que contienen.

Lavarse las manos con agua y jabón antes de salir del laboratorio.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Agar T.S.I. (Triple Sugar Iron Agar) .[Internet] .Disponible en:
https://andinamedica.com.pe/wp-content/uploads/2016/08/Medio-TSI.pdf

Pruebas Bioquímicas. .[Internet] Disponible en :

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/10_PruebasBioquimicas_270
69.pdf

Agar DNASA. .[Internet] Disponible en

file:///C:/Users/stefy/Desktop/agar%20dnasa.pdf

Agar Citrato Simmons .[Internet].Disponible en:

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a29779b
d2be8.pdf

Caldo Tioglicolato .[Internet].Disponible en :

https://www.quios.com.co/producto/caldo-tioglicolato/

Caldo tioglicolato: fundamento, preparación y usos. .[Internet].Disponible

en: https://www.lifeder.com/caldo-tioglicolato/