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(RIA)2. Ellos fueron los primeros en observar la gran sensor de detección del coágulo y lectura del código
sensibilidad de los métodos basados en la reacción en- de barras. El rendimiento de los autoanalizadores mo-
tre antígeno y anticuerpo mediante el uso de marcado- dernos es aproximadamente de 200 resultados por
res radioisotópicos. hora, con sistemas de autodilución y pruebas reflejas.
El RIA es una técnica de análisis en la que una pe- Sin embargo, no todas las determinaciones hormo-
queña cantidad de sustancia marcada con radiactivos nales han evolucionado de la misma manera. Actual-
es desplazada de su unión específica a un anticuerpo mente, en un laboratorio de un hospital de tercer nivel
por otra similar, no marcada, que va a competir con la aún coexisten técnicas automatizadas (56%) con otras
primera. El isótopo más utilizado para marcar hormo- manuales (RIA o IRMA) de algunos esteroides, activi-
nas es el 125I. dad de renina y algunos marcadores tumorales. Otras
En los años setenta, casi todas las hormonas se de- determinaciones, como las de catecolaminas, se reali-
terminaban por métodos de RIA, técnicas competitivas zan por métodos fisicoquímicos como la cromatogra-
con un anticuerpo, y a veces con un segundo anticuer- fía líquida de alta resolución (HPLC), en la que una
po, para la separación de la fracción unida de la libre. fase móvil, a través en una columna, separa las tres
Estas técnicas de inmunoanálisis isotópicos eran fracciones de catecolaminas, que se cuantifican me-
cien veces más sensibles que los métodos fisicoquími- diante un detector electroquímico.
cos usados hasta el momento para las determinaciones Algunos ejemplos de la evolución de los inmunoaná-
hormonales. lisis en las determinaciones hormonales se observan en
la medición de tirotropina (TSH) y paratirina (PTH).
Segunda generación de inmunoanálisis:
análisis inmunorradiométricos (IRMA) Evolución de los análisis de la tirotropina
Durante los años ochenta aparecieron modificacio- En los años setenta se utilizaban RIA de doble anti-
nes de la primera generación de inmunoanálisis3. Con cuerpo que requerían una incubación de 5 días, y la
la introducción de análisis inmunométricos no compe- sensibilidad de esta primera generación de análisis era
titivos (IRMA) de doble anticuerpo, se consiguió ma- de 1 mUI/l, evidentemente insuficiente para diferen-
yor sensibilidad, ampliar el intervalo de medición y ciar a los pacientes con hipertiroidismo (TSH < 0,5
acortar los tiempos de incubación. mUI/l) de individuos con resultados en el límite bajo
Otro avance importante es la introducción de anti- de la normalidad (0,4-4,0). El hipertiroidismo tenía
cuerpos monoclonales, lo que repercutió en una ma- que ser confirmado por análisis de T4 y T3 y mediante
yor especificidad. el estímulo con protirrelina (TRH).
La aparición en los años ochenta de análisis de se-
Automatización de los inmunoanálisis gunda generación, IRMA, no competitivos con menos
Los isótopos radiactivos limitaban el uso de los in- tiempo de incubación (18 h) aumentó la sensibilidad a
munoanálisis a laboratorios con infraestructura apro- 0,1 mUI/l. En los noventa se desarrollaron los análisis
piada, obligaban al cumplimiento de la normativa vi- de tercera generación, análisis inmunométricos (IMA)
gente sobre protección de las radiaciones ionizantes y semiautomatizados, con sensibilidad de 0,01 mUI/l.
a un tratamiento adecuado de los residuos radiactivos. Después de 2000, se empezó a usar métodos IMA to-
A finales de los años ochenta, la industria desarrolló talmente automatizados que, con una incubación de
marcadores no isotópicos: enzimas, marcadores fluo- 20 min, dan resultados de TSH con una sensibilidad
rescentes y quimioluminiscentes. Los inmunoanálisis de 0,001 mUI/l; son técnicas de cuarta generación.
no isotópicos presentaban más sensibilidad y practica- Un nuevo concepto y un cambio en la práctica clíni-
bilidad, puesto que permitían su automatización4. ca emergieron de esta mejora de la sensibilidad de los
Los primeros métodos semiautomatizados fueron análisis. El concepto de sensibilidad analítica (capaci-
inmunoanálisis de polarización de fluorescencia dad de un método de detectar pequeñas cantidades de
(FPIA), aplicados a hormonas tiroideas. un componente distintas de cero) fue sustituido por el
En la década de los noventa, los análisis no isotópi- de sensibilidad funcional, definida como la concentra-
cos se abrieron totalmente a la automatización y la de- ción mínima de un componente (TSH) que se puede
terminación de hormonas se incorporó a los nuevos medir con una imprecisión entre pruebas (CV) <
autoanalizadores. La automatización tenía la ventaja 20%6. Esta mejora de la sensibilidad permitió un cam-
de una mejora en la precisión, mayor practicabilidad, bio de la estrategia en la práctica clínica: utilizar la
mayor fiabilidad, menor tiempo de respuesta y menor TSH como prueba de primera línea para evaluar la
coste económico. función tiroidea en pacientes ambulatorios y en gran
El 80% de los autoanalizadores actuales están utili- parte de los pacientes hospitalizados sin enfermedad
zando señal quimioluminiscente o electroquimiolumi- no tiroidea grave. La principal limitación en el uso de
niscente, y el resto utiliza fluorometría o son inmuno- la TSH como prueba de primera línea en el escrutinio
análisis enzimáticos5. de la disfunción tiroidea es la falta de sensibilidad
La mayoría de estos instrumentos son capaces de to- para detectar el hipotiroidismo secundario. Sin embar-
mar la muestra directamente del tubo primario, tienen go, la prevalencia del hipotiroidismo primario es muy
cias. Las interferencias en los inmunoanálisis pueden todos los casos, después del tratamiento las cifras de
producir señales falsamente elevadas o disminuidas, lo hCG permanecían inalteradas debido a que eran falsos
que resulta en valores falsamente altos o bajos respec- positivos por anticuerpos heterofílicos.
tivamente. El problema de interferencia por anticuerpos hetero-
Una interferencia puede ser no específica, es decir, fílicos17,18 se debe al uso en los análisis no competiti-
producto de sustancias que no tiene similitud física vos de los anticuerpos con afinidades relativamente
con la hormona (anticuerpos heterofílicos) o puede ser más bajas que los requeridos en análisis competitivos.
un anticuerpo contra el propio analito o contra el fac- Actualmente los fabricantes de kits han incorporado a
tor reumatoide. También, las interferencias pueden de- la mayoría de sus análisis agentes de bloqueo eficien-
berse a la presencia de sustancias en la muestra que tes (inmunoglobulinas animales como conejo, cabra o
tienen similitud inmunológica o física con el analito ratón)19 para minimizar esta interferencia.
(prohormona, isoformas [macroprolactina] o fragmen-
tos del analito). Estos problemas están relacionados Macroprolactina
con la especificidad del anticuerpo. A veces el anti-
La determinación de prolactina presenta algunos
cuerpo puede reconocer moléculas relacionadas (corti-
problemas debido a sus diferentes formas moleculares
sol y cortisona). Los problemas de reactividad cruzada
circulantes. La presencia de macroprolactina puede in-
deben ser conocidos por los fabricantes y esta infor-
terferir en la medición de la prolactina y dar lugar a
mación debe estar incluida en el kit.
una falsa hiperprolactinemia.
Las interferencias más importantes se exponen a
Fahie-Wilson20 describió los resultados obtenidos en
continuación.
distintos laboratorios de Reino Unido distribuyendo
una muestra del control de calidad que contenía 7 µg/l
Autoanticuerpos
de prolactina al que se había añadido un 93% de ma-
La presencia de autoanticuerpos en pacientes con croprolactina. Los resultados variaron desde concen-
enfermedades autoinmunitarias puede dar resultados traciones normales a valores significativamente eleva-
erróneos en algunos analitos11,12. La presencia de auto- dos para un tercio de los 17 métodos utilizados y hasta
anticuerpos endógenos contra el antígeno de interés, valores francamente elevados (2-5 veces el límite su-
como hormonas tiroideas13, antiinsulina14 o antitiro- perior) en la mitad de ellos.
globulina (anti-Tg), puede complicar la interpretación La interferencia por macroprolactina afecta a un
de los resultados de los inmunoanálisis. 20% de todas las muestras de prolactina y se debe ree-
Una interferencia importante es la producida por an- xaminar los resultados elevados después de la precipi-
ticuerpos anti-Tg en la determinación de tiroglobulina. tación con polietilenglicol (PEG) para descartar la
Los análisis inmunométricos no competitivos (IMA) presencia de macroprolactina y medir la concentra-
parecen ser más susceptibles a dicha interferencia que ción de prolactina monomérica. Actualmente los fabri-
los métodos de RIA, lo que causa una subestimación cantes tienden a incorporar a sus técnicas anticuerpos
de la concentración de tiroglobulina total en los pri- altamente específicos de prolactina monomérica para
meros y valores más elevados en los segundos. No minimizar esta interferencia.
existe garantía de que ningún método actual de deter-
minación de tiroglobulina esté libre de interferencias Efecto gancho
por anticuerpos anti-Tg y, como la subestimación que
El efecto gancho se produce ocasionalmente en
se produce con métodos IMA podría enmascarar la
los métodos inmunométricos cuando la concentra-
enfermedad metastásica, los laboratorios no deberían
ción del antígeno que se va a determinar es inusual-
informar valores de tiroglobulina en pacientes con an-
mente elevada y uno o ambos anticuerpos quedan
ticuerpos anti-Tg, concretamente cuando la tiroglobu-
saturados antes de que se forme el sandwich, fenó-
lina es indetectable15.
meno que da lugar a resultados falsamente bajos. El
efecto se puede producir a partir de una determinada
Anticuerpos heterofílicos
concentración, que varía según el método y el fabrican-
Los anticuerpos heterofílicos son anticuerpos anti- te. Se ha descrito efecto gancho en algunos proce-
IgG de animal (ratón, conejo, oveja, etc.), especies dimientos de determinación de tiroglobulina, calcito-
muy utilizadas para la obtención de reactivos para in- nina21, etc., en casos de producción tumoral o de
munoanálisis. Pueden formar falsos sandwich y dar TSH en hipotiroidismo congénito o hipotiroidismo
lugar a resultados falsamente elevados. Hay un au- adquirido largamente mantenido. Cuando se sospe-
mento en la incidencia de los anticuerpos humanos cha este fenómeno, se debe realizar diluciones suce-
anti-ratón (HAMA) debido al uso creciente de anti- sivas de la muestra hasta alcanzar una concentración
cuerpos monoclonales de ratón con fines diagnósticos dentro del intervalo de medición. Afortunadamente
y terapéuticos. Cole et al16 describieron una interferen- este problema es cada vez menos frecuente debido a
cia en hCG en 58 pacientes que causó que el 85% se que los inmunoanálisis no isotópicos actuales dispo-
sometiera a tratamiento por sospecha de un coriocarci- nen de un amplio intervalo de linealidad en la deter-
noma: laparoscopia (45%) e histerectomía (11%). En minación.