MicroScan

Prompt™* Inoculation System-D

For Use with Microdilution
Susceptibility Tests 1
Système d’inoculation Prompt™* D
Utilisé pour les tests de
sensibilité en microdilution 2
Sistema di inoculo Prompt™*
D da utilizzare per i test di sensibilità in
microdiluizione 3
Prompt™* Inokulationssystem-D zum
Gebrauch bei Empfindlichkeitstests
im Mikrodilutionsverfahren 4
Sistema de Inoculación Prompt™* D
Para el estudio de la sensibilidad
por microdilución 5
Prompt™* Sistema-D de Inoculação
Para utilização com Testes de
Sensibilidade por Microdiluição 6
Σύστημα ενοφθαλμισμού D-PROMPT™*
Για χρήση στις εξετάσεις ευαισθησίας
στα αντιβιοτικά με μικροαραιώσεις 7
*Trademark of 3M Company, St. Paul, MN USA

03/2015

3251-3000A
3251-3000A
PromptTM* Inoculation System-D
For Use with Microdilution
Susceptibility Tests
Intended Use
The Prompt Inoculation System-D is used to
standardize inocula for microdilution antimicrobial
susceptibility tests.
Summary
The microdilution procedure for antimicrobial
susceptibility testing has provided the clinical
microbiologist with a reliable method for obtaining
meaningful quantitative susceptibility test results.
This procedure is used to determine the minimum
inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial agents
and has rapidly gained broad acceptance in the
clinical laboratory.1 Accuracy and reproducibility in
the MIC procedure depend on use of defined
materials and methods.
One of the important requirements in the MIC
procedure is control of the bacterial population of the
inoculum within defined limits. This step may be
accomplished in two ways:
1) manual adjustment of the inoculum to match a 0.5
McFarland turbidity standard2 followed by
appropriate dilution or
2) incubation to stationary phase in broth culture3
followed by appropriate dilution.
The Prompt Inoculation System-D provides the
microbiologist with a method for obtaining
standardized inocula while eliminating the need for
incubation and turbidity adjustment.4,5,6,7
Microdilution susceptibility results obtained using
the Prompt Inoculation System-D show a correlation
of 97% or greater with the microdilution
susceptibility results obtained with inocula prepared
according to the National Committee on Clinical
Laboratory Standards (NCCLS) procedure.2
Principles
The Prompt Inoculation System-D consists of an
inoculation wand and a bottle of diluent. The wand is
a polypropylene rod with a breakaway collar that
serves as a wiping mechanism. The rod is attached
to a stopper. At the tip of the wand is a groove
designed to hold a specific number of bacteria.
Thirty (30) ml of diluent are provided in the plastic
bottle. The wand is touched to several bacterial
colonies on a primary isolation plate, wiped, then
placed in the plastic bottle. The bacteria are
*Trademark of 3M Company, St. Paul, MN USA
** Registered trademark of BASF Corp., Parsippany, NJ USA
3251-3000A
suspended by shaking the bottle. The bacterial
suspension is stable for four hours. When the
Prompt Inoculation System-D is used within four
hours after preparation, 97% of MICs are within ±
one (1) dilution of the MICs determined by the
conventional method.
The Prompt Inoculation System-D facilitates the
MIC inoculum preparation by eliminating: 1) the
incubation period, and 2) the need to adjust the
inoculum concentration.
Suspending Solution
Prompt Inoculation System-D catalog number
B1026-10D contains 30 ml (± 1.0 ml) of stabilized,
aqueous PLURONIC** surfactants.
Warnings and Precautions
1. For in vitro diagnostic use only.
2. Colonies must be selected from a FRESH culture
plate (< 24 hours).
3. The bacterial suspension should be used within
four hours of preparation.
4. DO NOT FLAME the plastic inoculation wand
under ANY circumstances.
5. To avoid contamination, keep fingers above the
ridge of the stopper and on the outer surface of
the collar.
6. Keep wands covered when not in use.
7. Do not use if colonies are smaller than the wand
tip.
NOTE:
After inoculation, the Prompt inoculation vial,
wand and collar should be considered potential
pathogen carriers. Handle and discard the
product accordingly.
Storage
Prompt units should be stored at 2-27°C. Avoid
direct light. Do not use units beyond the expiration
date shown on the package. Inoculated units may
be stored for up to four hours at room temperature.
Product Deterioration
Prompt bottles should not be used if the bottle or
cap is cracked.
Specimen Collection and Preparation
Specimens received in the laboratory should be
treated in the usual manner for the preparation of a
primary culture plate. Three isolated colonies larger
than the wand tip from an eighteen to twenty-four
(18-24) hour culture are needed for use with the
Prompt Inoculation System-D.
1-1
Procedure
Materials Provided
62 Prompt inoculation wands
60 Prompt inoculation bottles
Prompt Inoculation System-D can be used for
preparation of inocula for microdilution MIC testing
procedures that use the inoculum suspended in a
non-nutritive solution to rehydrate the tray. To use,
follow the instructions below:
A. Preparation of bacterial suspension
1. Remove the required number of Prompt
inoculation bottles from the box.
2. Remove an inoculation wand from the box.
3. Holding the wand tip perpendicular to the agar
surface, touch 3 isolated colonies as large as or
Figure 1-2
larger than the tip. Do not penetrate the agar.
Do not scrape or drag the tip across the
colonies (Figure 1-1). 5. Slide the collar slowly down and off the wand
shaft and discard the collar (Figure 1-3).
6. While holding the inoculation wand with one
hand, pick up a Prompt inoculation bottle.

Figure 1-1

NOTE: Figure 1-3

For very small, pin-point colonies, continue
incubation of the primary plate until they reach 7. Bend the cap of the bottle sideways until it
the diameter of the wand tip. If the colony snaps off (Figure 1-4).
diameter is not likely to reach this size (for
example, some streptococci), an alternate
method for inoculum preparation should be
used.
4. Holding the wand by the handle with one
hand, grasp the collar with the other hand and
pull firmly to break the connection between
the collar and wand shaft. Do Not twist or
bend the collar. Keep the tip pointed toward
the floor, away from yourself and others
(Figure 1-2).

E-0822B

Figure 1-4

1-2 3251-3000A
 8. Place the inoculation wand into the bottle and
press down with a twisting motion to assure a
tight seal (Figure 1-5).
Figure 1-5
9. Shake the bottle vigorously 8 to 10 times to
release the bacteria from the wand tip. If the
organism is not released from the wand, let the
solution sit for 5 minutes and shake again
(Figure 1-6).
Figure 1-6
10.The bacterial suspension should be used
within four hours of preparation. If not used
immediately after preparation, shake
vigorously to resuspend the bacteria just prior
to use.
B. Addition of Suspension to Seed Tray
1. Remove the inoculation wand from the bottle
and discard.
2. Pour the suspension into the seed tray by
gently squeezing the bottle with a pumping
action (Figure 1-7).
3251-3000A 1-3
Figure 1-7
3. Proceed with the appropriate microdilution MIC
procedure.
NOTE:
The inoculated Prompt bottle, wand and collar
should be considered potential pathogen
carriers. Handle and discard appropriately.
Quality Control
Refer to appropriate microdilution susceptibility/ID
system for quality control.
Limitations
1. The Prompt inoculation system-D should not be
used when the colony size is smaller than the
wand tip. Examples of organisms that may not
meet the size requirement are Streptococcus
spp. other than S. bovis and S. agalactiae
(Group B). Picking colonies which are too small
will result in under-inoculation and may cause a
resistant organism to appear to be susceptible.
An alternate method of inoculum preparation
should be used for colonies smaller than the
wand tip.
2. Some mucoid strains of organisms such as
Klebsiella spp. or Pseudomonas spp. may not
adhere to the wand when attempting to pick the
colony. This will be visually apparent. An
alternate method of inoculum preparation should
be used for such organisms.
3. The Prompt System demonstrated elevated MICs
with fluoroquinolones (e.g. gatifloxacin),
lincosamides (e.g. clindamycin), and macrolides
(e.g. erythromycin) with staphylococci when
compared with the Reference method. Inoculum
concentration is critical with these antimicrobic
organism combinations. If an Intermediate or
Resistant interpretation is obtained using the
Prompt System, an alternate method of obtaining
a susceptibility result should be used (e.g.
turbidity using a non-breakpoint format) prior to
reporting results.
Expected Results
When used according to directions the Prompt
Inoculation System-D will provide the proper
inoculum for the microdilution MIC test for most
clinical isolates. MIC results obtained with inocula
prepared with the Prompt Inoculation System-D
show greater than 97% agreement with MIC results
obtained with inocula prepared according to the
NCCLS procedure.2
Specific Performance Characteristics
Microdilution susceptibility results obtained with
inocula prepared by the Prompt system were
compared to the results obtained with inocula
prepared according to the NCCLS procedure.2 Nine
hundred sixteen isolates were tested on MicroScan
dried conventional panels. Testing was performed at
two sites, using both MicroScan instrumentation
and manual verification.
Inocula were prepared according to the Prompt
Inoculation System-D and the NCCLS procedure.
The mean inoculum density for 100 organisms
counted immediately after inoculum preparation
was 6.9 x 105 cfu/ml. The overall percent of results
within +/- 1 dilution was 97%. The MICs for P.
aeruginosa obtained with aminoglycosides (e.g.
amikacin, gentamicin, tobramycin) with Prompt are
97.5% essential agreement (MICs within +/- 1
dilution of MICs obtained with the NCCLS method).
Additional drug-specific performance data is on file.
The penicillin and ampicillin MICs for some
β-lactamase-producing staphylococci are extremely
inoculum dependent. S.aureus ATCC 29213 is one of
these organisms. Penicillin and ampicillin results
should be considered to be in control if this quality
control strain shows any penicillin MIC≥0.25 µg/ml
and any ampicillin MIC≥ 0.5 µg/ml (i.e., no upper
limit should be applied to these control ranges).
When discrepancies for penicillin and ampicillin
were seen between the Prompt system and
standard-method tests (Table 1-1), the organisms
involved were β-lactamase producers. All observed
discrepant MICs would be interpeted as resistant
(MIC 0.25 µg/ml for penicillin). The Prompt system
MICs were invariably higher than the standard
MICs, better indicating the resistant nature of the
bacteria. This phenomenon has also been noted by
Flejzor and Bokkenheuser.8 A similar phenomenon
was also noted with methicillin-resistant
staphylococci and the penicillinase-resistant
penicillins.
Staphylococci colony counts may be elevated with
the Prompt method and may be greater than the
NCCLS expected range. Elevated colony counts
may adversely affect antibiotic results that are
affected by inoculum. Refer to the Limitations
section for antimicrobials which are known to be
inoculum dependent.
1-4
References
1. Gerlach, E.H. in Current Techniques for Antibiotic
Susceptibility Testing, A. Balows, ed. (Charles C.
Thomas, Publisher, Springfield, Illinois) 1974. pp.
63-76.
2. National Committee for Clinical Laboratory
Standards 2000. NCCLS approved Standard
M7-A5: Methods for Dilution Antimicrobial
Susceptibility Tests for Bacteria that Grow
Aerobically. National Committee for Clinical
Laboratory Standards, 771 E. Lancaster Ave.,
Villanova, PA. 19085.
3. Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp. 1970. An
improved single-disc method for testing the
antibiotic susceptibility of rapidly-growing
pathogens, Am. J. Clin. Path. 53:49-158.
4. Wicks, J.H., R.L. Nelson, and G.E. Krejcarek.
1981; A rapid inoculum standardization system:
a novel device for standardization of inocula in
antimicrobial susceptibility testing. J. Clin.
Microbiol. 17:1114-1119.
5. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson.
1983. Inoculum standardization in antimicrobial
susceptibility testing: evaluation of overnight agar
cultures and the rapid inoculum standardization
system. J. Clin. Microbiol. 17:450-457.
6. Lund, M.E. and R.W. Hawkinson. 1983.
Evaluation of the Prompt Inoculation System
for preparation of standardized bacterial inocula.
J. Clin. Microbiol. 18:84-91.
7. Barry, A.L., R.E. Badal, and R. W. Hawkinson.
1983. Influence of inoculum growth phase on
microdilution susceptibility tests. J. Clin.
Microbiol. 18:645-651.
8. Flejzor, B. and V.D. Bokkenheuser. 1985.
Performance of the Prompt System in
identification and antimicrobial susceptibility
testing of clinical isolates. J. Clin. Microbiol.
21:267-268.
Warranty Statement
These products are warranted to perform as
described in their labeling and MicroScan literature
when used in accordance with their instructions.
THERE ARE NO WARRANTIES WHICH EXTEND
BEYOND THIS EXPRESS WARRANTY AND BECKMAN
COULTER DISCLAIMS ANY IMPLIED WARRANTY OF
MERCHANTABILITY OR WARRANTY OF FITNESS
FOR PARTICULAR PURPOSE. The sole obligation of
Beckman Coulter and the purchaser's exclusive
remedy for breach of this warranty shall be, at the
option of Beckman Coulter to repair or replace the
products. In no event shall Beckman Coulter be liable
for any proximate, incidental or consequential
damages in connection with the products.
3251-3000A
Système d’inoculation Prompt™* D
Utilisé pour les Tests de
Sensibilité en Microdilution
Utilisation
Le Système d’inoculation Prompt™ D est utilisé pour
standardiser l’inoculum pour les tests de sensibilité
aux antibiotiques.
Résumé
La procédure de microdilution pour la détermination de
la sensibilité aux antibiotiques fournit au
microbiologiste une méthode sûre pour l’obtention de
résultats quantitatifs des tests de sensibilité.
Cette procédure est utilisée pour déterminer la
concentration minimale inhibitrice (CMI) des
antibiotiques et a rapidement gagné la confiance des
laboratoires de biologie clinique1. La précision et la
reproductibilité de la détermination de la CMI sont
variables en fonction de la méthode et du matériel
utilisés.
Une des exigences importantes dans la procédure de
détermination de la CMI est le contrôle de la
population bactérienne dans l’inoculum. Celui-ci peut
être effectué en deux étapes 1) ajustement manuel de
la turbidité2 jusqu’à 0,5 McFarland suivi d’une dilution
appropriée 2) Incubation en phase stationnaire dans
un milieu de culture3 approprié.
Le Système d’inoculation Prompt™ D fournit au
microbiologiste une méthode pour obtenir un inoculum
directement standardisé tout en supprimant
l’incubation et l’ajustement de la turbidité.4,5,6,7 Les
résultats des tests de sensibilité obtenus avec le
système d’inoculation Prompt montrent une
corrélation de 97% ou plus par rapport aux résultats
obtenus avec une préparation qui suit les procédures
NCCLS2.
Principes
Le système d’inoculation Prompt est composé d’une
pointe calibrée et d’un flacon de diluant. La pointe
calibrée est en polypropylène surmontée d’un collier,
mécanisme qui permet l’élimination du surplus. A
l’extrémité de la pointe calibrée il y a une rainure qui
permet de prélever un nombre précis de bactéries. Le
flacon en plastique contient 30 ml de diluant. Pour
prélever les colonies, piquer plusieurs colonies isolées
sur la boîte, enlever le collier, puis placer la pointe
calibrée dans le flacon de diluant. Mettre les bactéries
en suspension en mélangeant le flacon. La suspension
* Marque commerciale de 3M Company, St. Paul, MN USA
** Tensioactifs PLURONIC®. Marque déposée de BASF Corporation,
Parsippany, NJ USA
3251-3000A
est stable pendant 4 heures. Lorsque le système
Prompt est utilisé dans les 4 heures après la
préparation, 97% des CMI sont conformes à une
dilution près aux résultats obtenus avec la méthode
conventionnelle.
Le système Prompt facilite la préparation de
l’inoculum pour les CMI en éliminant les phases
suivantes : 1) période d’incubation, et 2) ajustement
de la concentration de l’inoculum.
Solution de Suspension
Le système Prompt (B1026-10D) contient 30 ml ±1
ml de solution stabilisée aqueuse avec du
PLURONIC**.
Précautions
1. Usage diagnostic in vitro seulement .
2. Les colonies doivent être prélevées sur une culture
fraîche (< 24 heures).
3. La suspension doit être utilisée dans les 4 heures
suivant la préparation.
4. Ne pas enflammer le système d’inoculation du
Prompt.
5. Afin d’éviter les contaminations, ne pas mettre les
doigts sur la pointe calibrée, qui sera ensuite en
contact avec la solution. Ne mettre les doigts que
sur la surface externe du collier.
6. Garder le coffret de pointes calibrées fermé.
7. Ne pas utiliser le système Prompt si les colonies
sont plus petites que l’extrémité de la pointe
calibrée.
Remarque : après ensemencement, le flacon
d’inoculation Prompt, la pointe calibrée ainsi que
le collier doivent être considérés comme
potentiellement pathogènes. Manipuler et éliminer
ces produits de la manière appropriée.
Conservation
Le Prompt doit être conservé à la température
ambiante (2-27°C). Eviter la lumière directe. Ne plus
utiliser après la date d’expiration notée sur
l’emballage. Les unités inoculées peuvent être
conservées pendant quatre heures à la température
ambiante.
Détérioration du Produit
Le Prompt ne doit pas être utilisé si le flacon ou le
bouchon sont abîmés.
2-1
Préparation de l’Echantillon
Les échantillons reçus au laboratoire doivent être
préparés pour obtenir un premier isolement, incuber
ensuite pendant 18-24 heures. Il est nécessaire d’avoir
3 colonies bien isolées, plus larges que l’extrémité de la
pointe calibrée pour pouvoir utiliser le système
d’inoculation du Prompt.
Procédure
Matériel fourni
62 pointes calibrées Prompt
60 Flacons d’inoculation Prompt
Le Système d’inoculation Prompt™ D est utilisé pour la
préparation des inoculums en solution non nutritive
Ces inoculums seront utilisés pour la réhydratation des
puits et pour la recherche de CMI en microméthode.
Suivre les instructions ci-dessous:
Figure 3-2
A. Préparation de la suspension bactérienne
1. Retirer le nombre nécessaire de flacons Prompt 5. Faire glisser le collier doucement afin de
du coffret l’enlever de la pointe calibrée et jeter le collier
2. Retirer une pointe calibrée de la boîte (Figure 3-3).
3. Tenir la pointe calibrée perpendiculaire à la
surface de la gélose. Piquer 3 colonies aussi
larges ou plus larges que l’extrémité de la pointe
calibrée. Ne pas pénétrer dans la gélose. Ne pas
racler les colonies. (Figure 3-1)

Figure 3-3
6. Prendre une bouteille d’inoculation Prompt.
7. Tordre le haut de la bouteille jusqu’à la rupture
(Figure 3-4).
Figure 3-1
Remarques : Pour les petites colonies,
poursuivre l’incubation jusqu’à l’obtention du
diamètre requis par la pointe calibrée. Si la
colonie n’atteint pas cette taille (exemple pour
certains Streptocoques), utiliser alors une autre
méthode pour l’ensemencement.
4. Tenir la pointe calibrée d’une main et détacher
le collier à l’aide de l’autre main en tirant
fermement pour casser la connexion entre le
collier et la pointe calibrée. Ne pas tordre ou
courber la pointe. Garder la pointe en direction
du sol et à distance. (Figure 3-2)

E-0822B

Figure 3-4

2-2 3251-3000A
 8. Placer la pointe calibrée dans la bouteille et bien
l’enfoncer (Figure 3-5).
Figure 3-5
9. Mélanger la bouteille vigoureusement 8 à 10 fois
pour homogénéiser. Si les bactéries
s’homogénéisent mal, attendre 5 minutes et
mélanger de nouveau (Figure 3-6).
Figure 3-6
10. La suspension doit être ensemencée dans les 4
heures suivant la préparation. Si l’utilisation n’est
pas immédiate, bien mélanger avant de l’utiliser.
B. Addition dans le bac d’inoculation Renok
1. Enlever la pointe calibrée de la bouteille et la
jeter.
2. Vider la suspension dans le bac d’inoculation
Renok en pressant doucement le flacon (Figure
3-7).
3251-3000A 2-3
Figure 3-7
3. Suivre la procédure de microdilution CMI.
Remarque : Le flacon, la pointe calibrée et le
collier doivent être considérés comme
potentiellement pathogènes. Manipuler et
éliminer de manière appropriée.
Contrôle de Qualité
Pour le Contrôle de Qualité, se référer aux systèmes
de microdilution sensibilité/identification
appropriés.
Limites
1. Les systèmes D d’inoculation Prompt ne doivent
pas être utilisés quand le diamètre des colonies
est plus petit que l’extrémité de la pointe
calibrée. Exemple de souches n’ayant pas la
taille requise : Streptococcus spp. autre que
Streptococcus bovis et Streptococcus agalactiae
(Groupe B). En piquant des colonies trop
petites, il y a un risque d’inoculation d’une trop
faible concentration, ce qui peut avoir pour
conséquence l’obtention de fausses sensibilités.
Dans ce cas, une autre méthode
d’ensemencement doit être adoptée.
2. Certaines souches muqueuses comme Klebsiella
spp. ou Pseudomonas spp. peuvent ne pas
adhérer à la pointe calibrée. Ceci se remarque
facilement. Dans ce cas une autre méthode doit
être utilisée.
3. Des CMI élevées ont été obtenues avec le système
Prompt pour les fluoroquinolones
(ex. : gatifloxacine), les lincosamides
(ex. : clindamycine) et les macrolides
(ex. : érythromycine) vis-à-vis des staphylocoques
comparativement aux valeurs données par la
méthode de référence. La concentration de
l’inoculum est déterminante dans ces combinaisons
microorganisme/antibiotique. En cas de résultat
intermédiaire ou de diagnostic de résistance avec le
système Prompt, utiliser une autre méthode de test
de sensibilité (ex. : turbidité avec des concentrations
différentes des points critiques) avant de rapporter
les résultats.
Résultats Attendus
L’utilisation du système d’inoculation Prompt™ D
fournira une méthode correcte de détermination de la
CMI pour la plupart des bactéries. Les résultats de
CMI obtenus avec l’inoculum préparé à l’aide du
système d’inoculation D Renok montrent 97% de
concordance par rapport aux résultats obtenus
suivant la procédure NCCLS2.
Performances Spécifiques
Les résultats des tests de sensibilité obtenus avec le
système Prompt ont été comparés à la procédure
recommandée par la NCCLS.2 916 colonies ont été
testées sur les plaques conventionnelles déshydratées.
Les tests ont été effectués sur 2 sites utilisant la
méthode MicroScan et la méthode manuelle comme
méthode de vérification.
Lorsqu’il est préparé avec la méthode Prompt,
l’inoculum contient 6,9 x105 CFU/ml. Le pourcentage
total de concordance est de 97% (à plus ou moins une
dilution). Les CMI des aminosides (c-à-d. amikacine,
gentamicine et tobramycine) pour le P. aeruginosa
obtenues par inoculation avec le système Prompt
étaient concordantes à 97,5% (CMI à plus ou moins
une dilution). D’autres caractéristiques de
performances spécifiques des antibiotiques sont
disponibles.
Les résultats obtenus avec la pénicilline et l’ampicilline
en ce qui concerne les Staphylocoques producteurs de
béta-lactamase sont dépendants de l’inoculum.
2-4
S. aureus ATCC 29213 fait partie de ces souches.
Les résultats de la pénicilline et de l’ampicilline
doivent être considérés comme corrects si la souche
de Contrôle de Qualité montre une
CMI > 0.25µg/ml pour la pénicilline avec et une CMI
> 0,5µg/ml pour l’ampicilline. Lorsqu’une différence
est observée entre le système Prompt et la méthode
standard pour la pénicilline et l’ampicilline (tableau
1), les bactéries impliquées sont productrices de
béta-lactamase. En fait toute discordance sur la
valeur de la CMI doit faire considérer le germe
comme résistant (CMI à 0,25µg/ml pour la
pénicilline). Le système d’inoculation Prompt donne
des CMI plus élevées que les CMI obtenues avec une
méthode standard et procure un bon indicateur de la
résistance de la souche. Ce phénomène a également
été noté avec la résistance à la méthicilline des
staphylocoques et avec la résistance à la pénicilline.
La numération des colonies de staphylocoques avec
la méthode Prompt peut aboutir à des valeurs
supérieures aux limites prévues par la NCCLS. Des
numérations de colonies élevées ont une incidence
contraire sur les antibiogrammes sensibles à la
concentration de l’inoculum. Consulter la section
«Limites» pour plus d’informations sur les
antibiotiques connus pour être sensibles à la
concentration de l’inoculum.
Conditions de Garantie
Ces produits sont garantis pour se comporter
comme décrit dans leur notice et la documentation
MicroScan lorsqu'ils sont utilisés selon les
instructions fournies avec chaque produit. IL
N'EXISTE AUCUNE GARANTIE PROLONGEANT LA
PRESENTE GARANTIE EXPLICITE ET BECKMAN
COULTER REJETTE TOUTE GARANTIE IMPLICITE
D'ADAPTATION OU D'ADEQUATION A UN BUT
PARTICULIER. La seule obligation de Beckman
Coulter et le seul recours de l'acquéreur pour
violation de cette garantie consisteront, à la seule
discrétion de Beckman Coulter, à réparer ou à
remplacer les produits. Beckman Coulter ne sera en
aucun cas tenu responsable de tout dommage
immédiat, fortuit ou indirect relativement aux
produits.
3251-3000A
Sistema di inoculo Prompt™* D da
utilizzare per i test di sensibilità in
microdiluizione
Uso previsto
Il sistema Prompt D è utilizzato per standardizzare
gli inoculi nei test di sensibilità agli antimicrobici in
microdiluizione.
Riassunto
La procedura in microdiluizione per i test di sensibilità
agli antimicrobici fornisce ai microbiologi un metodo
affidabile per ottenere risultati quantitativi significativi.
Questa procedura viene utilizzata per determinare la
minima concentrazione inibente (MIC) degli
antimicrobici ed è stata rapidamente accettata nei
laboratori clinici.1 La precisione e la riproducibilità della
procedura MIC dipendono dall'uso di materiali e di
metodi ben definiti.
Uno dei requisiti fondamentali della procedura MIC è
il contenimento entro limiti stabiliti della popolazione
batterica dell'inoculo. Questa fase può essere
realizzata in due modi:
1) modifica manuale dell'inoculo fino a che non
corrisponda allo standard 0,5 di torbidità
McFarland2 seguito da una corretta diluizione,
oppure
2) incubazione fino alla fase stazionaria in coltura di
brodo3 seguita da corretta diluizione.
Il sistema di inoculo Prompt D offre al
microbiologo un metodo per ottenere inoculi
standardizzati eliminando la necessità di effettuare
modifiche basate su incubazione e torbidità.4,5,6,7 I
risultati delle sensibilità in microdiluizione ottenuti
con il sistema Prompt D correlano almeno al 97%
con i risultati di test di sensibilità in microdiluizione
ottenuti con inoculi preparati secondo le procedure
del NCCLS (National Committee on Clinical
Laboratory Standards - Comitato Nazionale degli
Standard clinici di laboratorio).2
Principi
Il sistema di inoculo Prompt D è composto da un
puntale per l'inoculo e da un flacone di diluente. Il
puntale è un'asticella in polipropilene dotata di un
collare rimovibile che permette di eliminare I batteri
adesi ai fianchi dell'asticella. L'impugnatura
dell'asticella funge da tappo del flacone di diluente.
Sulla punta dell'asticella è presente una scanalatura
necessaria a trattenere un numero specifico di batteri.
Nel
* Marchio di 3M Company, St. Paul, MN USA
** Marchio registrato di BASF Corp., Parsippany, NJ USA
3251-3000A 3-1
flacone in plastica sono presenti trenta (30) ml di
diluente. Il puntale viene messo a contatto con alcune
colonie batteriche su una piastra di isolamento
primario, si rimuove il collare e si inserisce nel
flacone tappandolo.
I batteri vengono sospesi agitando il flacone. La
sospensione batterica rimane stabile per quattro
ore. Se il sistema di inoculo Prompt D viene
utilizzato entro quattro ore dalla preparazione, il
97% delle MIC sono entro ± uno (1) fattore di
diluizione delle MIC determinate con il metodo
convenzionale.
Il sistema di Inoculo Prompt D semplifica la
preparazione degli inoculi MIC poiché elimina: 1) il
periodo di incubazione e 2) la necessità di dover
aggiustare la concentrazione degli inoculi.
Sospensione della soluzione
Il sistema di Inoculo Prompt D, numero di catalogo
B1026-10D contiene 30 ml (± 1,0 ml) di soluzione
acquosa stabilizzata di tensioattivo PLURONIC**.
Avvertenze e precauzioni d'uso
1. Solo per uso diagnostico in vitro
2. Le colonie devono essere selezionate da una
piastra di coltura FRESCA (< 24 ore).
3. La sospensione batterica deve essere utilizzata
entro quattro ore dalla preparazione.
4. NON PASSARE MAI SU FIAMMA PER ALCUN
MOTIVO il puntale di inoculo in plastica .
5. Per evitare contaminazioni, tenere le dita al di
sopra del bordo di chiusura e sulla superficie
esterna del collare.
6. Tenere i tamponi coperti quando non si stanno
usando.
7. Non usare se le colonie sono più piccole della
punta dell'asticella.
Nota:
Dopo l'uso, il flacone Prompt, il puntale e il collare
sono da considerarsi potenziali portatori di patogeni.
Maneggiare e smaltire il prodotto con le opportune
precauzioni.
Conservazione
Le unità del sistema Prompt devono essere
conservate ad una temperatura compresa tra 2 e
27°C. Evitare il contatto con la luce diretta. Non
usare le unità oltre la data di scadenza indicata sulla
confezione. Le unità inoculate possono essere
conservate fino a quattro ore a temperatura
ambiente.
 dimensione (come nel caso di alcuni
Deterioramento del prodotto
streptococchi), si deve utilizzare un altro
Il sistema Prompt non deve essere utilizzato se il
metodo per la preparazione dell'inoculo.
flacone o il tampone risultano danneggiati.
Raccolta e preparazione dei campioni 4. Tenendo il puntale per l'impugnatura con una
I campioni che giungono in laboratorio devono essere mano, afferrare il collare con l'altra e tirare
trattati nello stesso modo con cui si procede per la con decisione fino a rompere il collegamento
preparazione di una piastra di coltura primaria. Per tra il collare e lo stelo del puntale. Non torcere
utilizzare il sistema di Inoculo Prompt D sono né piegare il collare. Tenere la punta rivolta
necessarie tre colonie isolate provenienti da una verso il basso, lontano da voi e dalla portata
coltura di diciotto-ventiquattro (18-24) ore; tali colonie di altre persone (figura 1-2).
devono essere più grandi della punta dell'asticella.
Procedura
Materiali forniti
Tamponi per inoculo Prompt
Flaconi per diluizione Prompt
Il sistema di Inoculo Prompt D può essere utilizzato
per la preparazione degli inoculi per i test in
microdiluizione MIC che utilizzano una sospensione
batterica in soluzione non nutritiva per reidratare il
pannello. Seguire le istruzioni per l'uso:
A. Preparazione della sospensione batterica
1. Prelevare dalla confezione la quantità necessaria
di flaconi Prompt.
2. Prelevare dalla confezione un puntale per
l'inoculo.
3. Tenendo il puntale perpendicolare alla superficie
dell'agar, toccare 3 colonie isolate grandi come la
Figura 1-2
punta o più grandi. Non penetrare nell'agar. Non
graffiare né trascinare la punta nelle colonie
(figura 1-1). 5. Far scivolare lentamente il collare verso il
basso, sfilarlo dallo stelo e rimuovere il
collare (figura 1-3).
6. Con il puntale in una mano, con l'altra
prendere un flacone di diluizione.

Figura 1-1

Nota:
Per colonie di dimensioni ridottissime, far Figura 1-3
proseguire l'incubazione della piastra primaria
fino a che le colonie non raggiungono il diametro 7. Piegare il tappo del flacone lateralmente fino a
della punta dell'asticella. Se è improbabile che il che non si spezza (figura 1-4).
diametro della colonia raggiunga questa

3-2 3251-3000A

E-0822B
Figura 1-4
8. Posizionare il puntale di inoculo nel flacone e
premere ruotando per chiuderlo
correttamente (figura 1-5).
Figura 1-5
9. Agitare il flacone vigorosamente 8-10 volte per
fare separare i batteri dalla punta dell'asticella.
Se l'organismo non si stacca dal puntale,
lasciare sedimentare la soluzione per 5 minuti,
quindi agitare nuovamente (figura 1-6).
Figura 1-6
10. La sospensione batterica deve essere utilizzata
entro quattro ore dalla preparazione. Se la
sospensione non viene usata immediatamente
dopo essere stata preparata, agitare
vigorosamente un attimo prima dell'uso per
sospendere nuovamente i batteri.
3251-3000A 3-3
B. Aggiunta della sospensione nella vaschetta
per la reidratazione
1. Togliere il puntale dal flacone e gettarlo.
2. Versare la sospensione nella vaschetta
premendo con delicatezza il flacone
(figura 1-7).
Figura 1-7
3. Passare alla procedura di microdiluizione di
MIC.
Nota:
Il flacone di inoculazione Prompt, il tampone e
il collare sono da considerarsi potenziali
portatori patogeni. Maneggiare e smaltire il
prodotto con le opportune precauzioni.
Controllo qualità
Per il controllo qualità fare riferimento all'appropriato
sistema a suscettibilità a microdiluizione e di
identificazione.
Limitazioni
1. Il sistema di inoculazione Prompt D non deve
essere usato se le dimensioni della colonia
sono inferiori a quelle della punta dell'asticella.
Alcuni esempi di organismi che potrebbero
non avere le dimensioni necessarie sono gli
Streptococchi spp. oltre a S Bovis e S
agalactiae (Gruppo B). La scelta di colonie
troppo piccole potrebbe causare sotto-
inoculazione facendo apparire suscettibile un
organismo resistente. In caso di colonie più
piccole della punta dell'asticella si deve
applicare un metodo alternativo per la
preparazione dell'inoculo.
2. Alcuni ceppi mucoidi di organismi quali
Klebsiella spp. o Pseudomonas spp. potrebbero
non aderire al puntale quando si cerca di
raccogliere la colonia. In tal caso ciò sarà
evidente. Nel caso di tali organismi si deve
applicare un metodo alternativo per la
preparazione dell'inoculo.
3. Il sistema Prompt ha evidenziato MIC elevate per la penicillina e l'ampicillina che sono state
con i fluorochinoloni (gatifloxacina), osservate tra il sistema Prompt e altri metodi
lincosamidi (clindamicina) e macrolidi standard (tabella 1-1), gli organismi erano produttori
(eritromicina) sugli stafilococchi quando di β-lattamasi. Tutte le MIC discrepanti osservate
comparati con il metodo di referimento. La erano da interpretare come resistenti (MIC 0,25
concentrazione dell'inoculo è critica con questa µg/ml per la penicillina). Le MIC del sistema Prompt
combinazione organismo/antimicrobico. Se erano costantemente superiori alle MIC ottenute con i
utilizzando il sistema Prompt con questi metodi standard, indicando in modo più chiaro la
organisimi/antimicrobici si ottengono natura resistente dei batteri. Questo fenomeno è stato
interpretazioni di intermedio o resistente, si notato anche da Flejzor e Bokkenheuser.8 Un
deve utilizzare un metodo alternativo. fenomeno simile è stato anche rilevato con gli
stafilococchi resistenti alla meticillina e con le
Risultati previsti
penicilline resistenti alla penicillinasi.
Se il sistema Prompt D viene usato seguendo le
Con gli stafilococchi la carica batterica ottenuta con il
istruzioni, esso fornirà l'inoculo appropriato per il
sistema Prompt, può essere più elevata rispetto
test in microdiluizione MIC per la maggior parte
all’intervallo NCCLS atteso.
degli isolati clinici. I risultati MIC ottenuti con inoculi
preparati con il sistema Prompt D presentano una Bibliografia
corrispondenza del 97% con i risultati di MIC 1. Gerlach, E.H. in Current Techniques for Antibiotic
ottenuti con inoculi preparati secondo la procedura Susceptibility Testing, A. Balows, ed. (Charles C.
NCCLS.2 Thomas, Publisher, Springfield, Illinois) 1974. pp.
63-76.
Caratteristiche particolari di prestazione
2. National Committee for Clinical Laboratory
I risultati delle sensibilità in microdiluizione ottenuti
Standards 2000. NCCLS approved Standard M7-
con inoculi preparati con il sistema Prompt sono
A5: Methods for Dilution Antimicrobial
stati confrontati con i risultati ottenuti con inoculi
Susceptibility Tests for Bacteria that Grow
preparati secondo la procedura NCCLS.2
Aerobically. National Committee for Clinical
Novecentosedici isolati sono stati esaminati su
Laboratory Standards, 771 E. Lancaster Ave.,
pannelli convenzionali essiccati MicroScan.
Villanova, PA. 19085.
L'esame è stato svolto in due laboratori, usando
3. Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp. 1970. An
sia la strumentazione MicroScan che la verifica
improved single-disc method for testing the
manuale.
antibiotic susceptibility of rapidly-growing
Gli inoculi sono stati preparati con il sistema
pathogens, Am. J. Clin. Path. 53:49-158.
Prompt D e secondo la procedura NCCLS. La
4. Wicks, J.H., R.L. Nelson, and G.E. Krejcarek.
densità media degli inoculi per 100 organismi
1981; A rapid inoculum standardization system:
contati subito dopo la preparazione degli inoculi è
a novel device for standardization of inocula in
stata di 6,9 x 105 cfu/ml. La percentuale
antimicrobial susceptibility testing. J. Clin.
complessiva dei risultati entro +/-1 diluizione è
Microbiol. 17:1114-1119.
stata del 97%. Le MIC per P. aeruginosa ottenute
5. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W.
con aminoglicosidi (ad esempio amikacina,
Hawkinson. 1983. Inoculum standardization in
gentamicina, tobramicina) utilizzando il sistema il
antimicrobial susceptibility testing: evaluation of
Prompt concordano al 97,5% (MIC entro +/-1
overnight agar cultures and the rapid inoculum
diluizione rispetto al metodo NCCLS). Sono
standardization system. J. Clin. Microbiol.
disponibili ulteriori informazioni relative a specifici
17:450-457.
antibiotici
6. Lund, M.E. and R.W. Hawkinson. 1983.
Le MIC per la penicillina e l'ampicillina di alcuni
Evaluation of the Prompt Inoculation System for
stafilococchi produttori di β-lattamasi sono
preparation of standardized bacterial inocula. J.
estremamente dipendenti dall'inoculo. Lo S. aureus
Clin. Microbiol. 18:84-91.
ATCC 29213 è uno di questi organismi. I risultati per
7. Barry, A.L., R.E. Badal, and R. W. Hawkinson.
la penicillina e l'ampicillina vanno considerati sotto
1983. Influence of inoculum growth phase on
controllo se questo ceppo nel controllo di qualità
microdilution susceptibility tests. J. Clin.
mostra un valore della MIC ≥0,25 µg/ml per
Microbiol. 18:645-651.
penicillina e ≥ 0.5 µg/ml per l'ampicillina (ovvero
8. Flejzor, B. and V.D. Bokkenheuser. 1985.
non vi sono limiti superiori da applicare a questi
Performance of the Prompt System in
intervalli di controllo). Nelle discrepanze
identification and antimicrobial susceptibility
testing of clinical isolates. J. Clin. Microbiol.
21:267-268.

3-4 3251-3000A
 UTILIZZO PER UNO SCOPO PARTICOLARE.
Garanzia
L'unico obbligo di Beckman Coulter e il solo
Il funzionamento di questi prodotti è garantito nel
rimedio dell'acquirente per violazione della
modo descritto sulla loro etichetta e nella
presente garanzia consiste, a discrezione di
documentazione MicroScan, purché utilizzati
Beckman Coulter, nella riparazione o nella
seguendo le istruzioni. NESSUNA GARANZIA SI
sostituzione dei prodotti. Beckman Coulter non si
ESTENDE OLTRE ALLA PRESENTE GARANZIA
riterrà in alcun caso responsabile di danni
ESPLICITA E BECKMAN COULTER DECLINA OGNI
prossimi, accidentali o consequenziali in relazione
GARANZIA IMPLICITA DI COMMERCIABILITÀ E
ai prodotti.
OGNI GARANZIA DI

3251-3000A 3-5
3-6 3251-3000A
Prompt™* Inokulationssystem-D zum
Gebrauch bei Empfindlichkeitstests
im Mikrodilutionsverfahren
Verwendungszweck
Das Prompt-Inokulationssystem-D wird verwendet zur
Standardisierung von Impflösungen für Antibiotika-
Empfindlichkeitstests im Mikrodilutionsverfahren.
Zusammenfassung
Das Mikrodilutionsverfahren zur Antibiotika-
Empfindlichkeitstestung bietet dem klinischen
Mikrobiologen eine zuverlässige Methode zur
quantitativen Bestimmung von sinnvollen
Empfindlichkeitsangaben. Das Verfahren wird zur
Ermittlung der minimalen Hemmkonzentration (MHK)
eines Antibiotikums eingesetzt und hat schnell breite
Akzeptanz in klinischen Labors gefunden1. Präzision
und Reproduzierbarkeit der MHK-Bestimmung
hängen vom Gebrauch definierter Materialien und
Arbeitsweisen ab.
Eine der wichtigen Voraussetzungen bei der
MHK-Durchführung ist die Kontrolle der
Bakterienpopulation, die bei der Beimpfung innerhalb
gewisser Grenzen liegen muß. Diese Forderung kann
auf zwei Arten erfüllt werden:
1) Inkubation und manuelle Angleichung der
Impfsuspension an einen 0,5 McFarland-
Trübungsstandard2 mit anschließender geeigneter
Verdünnung oder
2) Inkubation bis zu einer stationären
Wachstumsphase in der Nährlösung3 mit
anschließender geeigneter Verdünnung.
Das Prompt-Inokulationssystem-D liefert dem
Mikrobiologen eine Methode zum Erlangen einer
standardisierten Impfsuspension, wobei die Inkubation
und die Angleichung an einen Trübungsstandard
entfällt.4,5,6,7 Die Ergebnisse, die mit den Mikrodilutions-
Empfindlichkeitstesten unter Verwendung des Prompt-
Inokulationssystem-D erzielt werden, zeigen eine 97%-
ige oder höhere Korrelation mit den Ergebnissen nach
NCCLS (National Committee on Clinical Laboratory
Standards2).
Prinzip
Das Prompt-Inokulationssystem-D besteht aus einem
Beimpfungsstäbchen und einer Flasche mit Lösung.
Das Beimpfungsstäbchen besteht aus einem
Polypropylenstift mit einem abbrechbaren Kragen, der
zum Abwischen der Bakterien (Abstreifkragen) dient.
Das Beimpfungsstäbchen ist an einem Stopfen
* Warenzeichen von 3M Company, St. Paul, MN USA
** Eingetragenes Warenzeichen der BASF Corp. Parsippany, NJ USA
3251-3000A
befestigt. An der Spitze des Beimpfungsstäbchens
befindet sich eine Vertiefung, die eine spezifische
Menge an Bakterien aufnehmen kann. In der
Plastikflasche sind 30 ml Lösung enthalten. Mit dem
Beimpfungsstäbchen werden mehrere
Bakterienkolonien von einer primären
Isolationsplatte aufgenommen, mit dem Kragen
abgewischt und in die Plastikflasche eingebracht.
Durch Schütteln werden die Bakterien in der Flasche
suspendiert. Die Bakteriensuspension ist 4 Stunden
stabil. Wenn das Prompt-Inokulationssystem-D
innerhalb 4 Stunden benutzt wird, liegen 97% der
MHKs innerhalb ± 1 Verdünnungsstufe der mit der
konventionellen Methode bestimmten Ergebnisse.
Das Prompt-Inokulationssystem-D erleichtert die
Bereitung der MHK-Impfsuspension durch
Eliminierung 1) der Inkubationsperiode und 2) der
Anpassung der Keimkonzentration.
Suspendierlösung
Das Prompt-Inokulationssystem-D, Bestell-Nr.
B1026-10D, enthält 30 ml (± 1,0 ml) stabilisierte,
wäßrige PLURONIC**-Detergentien.
Vorsichtsmaßnahmen
1. Nur zum Gebrauch als In-vitro-Diagnostikum.
2. Kolonien müssen von einer FRISCHEN
Kulturplatte (< 24 Stunden) abgenommen
werden.
3. Die Bakteriensuspension sollte innerhalb 4
Stunden nach Bereitung weiter verarbeitet
werden.
4. Das Plastik-Beimpfungsstäbchen unter KEINEN
UMSTÄNDEN ABFLAMMEN.
5. Zur Vermeidung von Kontamination mit den
Fingern nur den Rand des Stopfens und die
äußere Oberfläche des Abstreifkragens berühren.
6. Die Verpackung der Beimpfungsstäbchen nach
Gebrauch sogleich wieder schließen.
7. Keine Kolonien aufnehmen, deren Durchmesser
kleiner als die Stäbchenspitze sind.
Anmerkung
Nach Beimpfung sollten die Prompt-
Inokulationsflasche, das Beimpfungsstäbchen und
der Abstreifkragen als Träger potentiell pathogener
Keime angesehen werden. Handhabung und
Abfallbeseitigung sind entsprechend durchzuführen.
4-1
Lagerung Anmerkung
Die Prompt-Systeme sollten bei 2-27°C gelagert Bei sehr kleinen, stecknadelkopfgroßen
werden. Bestrahlung mit direktem Licht vermeiden. Kolonien mit der Inkubation der
Beimpfte Systeme können bis zu 4 Stunden bei Isolationsplatte fortfahren, bis die Kolonien
Zimmertemperatur gelagert werden. den Durchmesser des Beimpfungsstäbchens
Haltbarkeit erreicht haben. Wenn der Durchmesser der
Prompt-Flaschen sollten nicht mehr benutzt werden, Kolonien diese Größe nicht erreicht (z. B. bei
wenn die Flasche oder der Verschluß beschädigt sind. einigen Streptokokken) sollte eine alternative
Nach dem Verfalldatum nicht mehr verwenden. Methode zur Bereitung der Impflösung
angewandt werden.
Anzüchten und Aufbereiten der Keime 4. Den Griff des Beimpfungsstäbchens mit einer
Die an das Labor eingesandten Proben sollten in der Hand halten und den Abstreifkragen mit der
üblichen Weise auf einer Primärkulturplatte anderen Hand fassen und kräftig ziehen, um
angezüchtet werden. Drei abgegrenzte Kolonien, die Verbindung zwischen Abstreifkragen und
größer als die Stäbchenspitze, von einer 18-24 Beimpfungsstäbchen zu lösen. Hierbei den
Stunden alten Kultur werden zum Gebrauch des Abstreifkragen nicht drehen oder biegen.
Prompt-Inokulationssystems-D benötigt. Die Spitze des Beimpfungsstäbchens muß
Mitgeliefertes Material stets nach unten zeigen, niemals auf
62 Prompt Beimpfungsstäbchen Personen richten (Abb. 2-2).
60 Prompt Inokulationsflaschen
Durchführung
Das Prompt Inokulationssystem-D kann zur Bereitung
einer Impfsuspension für die MHK-Testung nach dem
Mikrodilutionsverfahren verwendet werden, wobei das
Inokulum, suspendiert in einer nicht-nutritiven
Lösung, zum Rehydrieren der Testplatten eingesetzt
wird. Hierzu sind folgende Arbeitsschritte
durchzuführen:
A. Bereitung der Bakteriensuspension
1. Die benötigte Anzahl vom Prompt-
Inokulationsflaschen bereitstellen.
2. Die benötigte Anzahl von Beimpfungsstäbchen
bereitstellen.
3. Das Beimpfungsstäbchen senkrecht zur
Oberfläche der Agarplatte halten und mit der Abb. 2-2
Spitze drei Kolonien, mindestens so groß wie
die Spitze, aufnehmen; dabei nicht den Agar
verletzen. Nicht mit der Spitze über die Kolonien 5. Den Abstreifkragen langsam vom Schaft des
kratzen oder schleifen (Abb. 2-1). Beimpfungsstäbchens ziehen und den Kragen
verwerfen (Abb. 2-3).

Abb. 2-1 Abb. 2-3

4-2 3251-3000A
 6. Mit der freien Hand eine Inokulationsflasche
aufnehmen.
7. Den Verschluß der Flasche wie abgebildet
seitwärts biegen, bis er aufbricht (Abb. 2-4).

Abb. 2-6

Weiterverarbeitung nochmals kräftig

aufschütteln.
B. Zugabe der Suspension in die Keimrinne
1. Das Beimpfungsstäbchen aus der Flasche
entfernen und verwerfen.
2. Die Suspension in die Keimrinne gießen. Die
Flasche hierbei leicht pumpend drücken
E-0822B
(Abb. 2-7).
Abb. 2-4

8. Nun das Beimpfungsstäbchen in die Flasche

stecken und mit einer Drehbewegung nach
unten drücken, um eine straffe Abdichtung zu
erreichen (Abb. 2-5).
9. Die Flasche 8 - 10 mal kräftig schütteln, um die
Bakterien von der Spitze des
Beimpfungsstäbchens zu lösen. Wenn sich die
Bakterien nicht vom Beimpfungsstäbchen lösen,
die Lösung 5 Minuten stehen lassen und hierauf
nochmals schütteln (Abb. 2-6).
10. Die Suspension sollte innerhalb 4 Stunden
nach Bereitung weiterverarbeitet werden. Falls
die Suspension nicht unmittelbar nach der
Bereitung verwendet wird, vor der
Abb. 2-7

3. Mit der Durchführung des

Mikrodilutionsverfahrens zur
MHK-Bestimmung fortfahren.
Anmerkung
Die beimpfte Prompt-Flasche, das
Beimpfungsstäbchen und der Abstreifkragen
sollten als potentiell pathogene Keimträger
angesehen werden. Auf entsprechende
Handhabung und Entsorgung achten!
Qualitätskontrolle
Siehe geeignetes Mikrodilutions-System für
Empfindlichkeit/Identifikation für die
Qualitätskontrolle.
Abb. 2-5

3251-3000A 4-3
Anwendungseinschränkungen
1. Das Prompt-Inokulationssystem-D sollte nicht
benutzt werden, wenn die Größe der Kolonie kleiner
als die Spitze des Beimpfungsstäbchens ist.
Beispiele für Keime, die möglicherweise nicht die
geforderte Koloniegröße zeigen sind Streptococcus
spp., nicht hingegen S. bovis und S. agalactiae
(B-Gruppe). Die Verwendung von zu kleinen
Kolonien resultiert in zu schwacher Beimpfung und
kann bewirken, daß ein resistenter Keim als
empfindlich erscheint. Wenn die Kolonien kleiner
als die Spitze des Beimpfungsstäbchens sind,
sollte eine alternative Methode für die Bereitung
der Impflösung gewählt werden.
2. Einige mukoide Stämme wie z.B. ‘fadenziehende’
Klebsiella spp. oder Pseudomonas spp. haften
möglicherweise nicht am Stäbchen, wenn man
diese Keime aufnehmen will, was ggf. deutlich
sichtbar wird. Für solche Keime sollte eine
alternative Methode zur Bereitung der Impflösung
benutzt werden.
3. Das Prompt-System zeigte im Vergleich zur
Referenzmethode erhöhte MHK-Werte bei
Fluorchinolonen (z.B. Gatifloxacin), Lincosamiden
(z.B. Clindamycin) und Makroliden
(z.B. Erythromycin), wenn der getestete Keim zu
den Staphylokokken zählt. Bei diesen
Kombinationen vonn Erreger und Antibiotika ist die
Inokulumkonzentration von entscheidender
Bedeutung. Liefert das Prompt-System die
Interpretation “Intermediate” (Mittel) oder
“Resistant” (Resistent), sollte vor der Ausgabe der
Resultate eine alternative Methode zur Erzielung
eines MHK-Wertes angewandt werden.
Erwartete Ergebnisse
Wenn das Prompt-Inokulationssystem-D gemäß der
Gebrauchsanleitung benutzt wird, werden geeignete
Impflösungen für das Mikrodilutionsverfahren zum
MHK-Test für die meisten klinischen Isolate erhalten.
MHK-Ergebnisse von Impflösungen, die mit dem
Prompt-Inokulationssystem-D hergestellt wurden,
zeigten eine über 97%-ige Übereinstimmung mit MHK-
Resultaten von Impflösungen nach NCCLS-Vorschrift.2
Spezifische Produkteigenschaften
Die Resultate von Empfindlichkeitstesten im
Mikrodilutionsverfahren mit Impflösungen, die mit
dem Prompt-System hergestellt wurden, wurden mit
den Resultaten von Impflösungen gemäß NCCLS-
4-4
Verfahren verglichen.2 Dazu wurden 916 Isolate auf
konventionellen MicroScan-Trockenplatten getestet.
Die Tests wurden in zwei verschiedenen Labors
durchgeführt, die beide MicroScan-Instumente und
manuelle Nachprüfung einsetzten.
Die Impflösungen wurden entsprechend dem
Prompt-Inokulationssystem-D und der NCCLS-
Vorschrift zubereitet. Die durchschnittliche Dichte
für 100 Keime, gezählt unmittelbar nach Bereitung
der Impflösung, betrug 6,9x105 CFU/ml. Das
allgemeine Ergebnis lag bei 97%. Für die MHKs von
P. aeruginosa und Aminoglycosiden (d.h. Amikacin,
Gentamicin, Tobramycin) mit Prompt lag die
essentielle Übereinstimmung bei 97,5% (MHKs
innerhalb ± 1 Verdünnungsstufe der MHKs nach
NCCLS-Methode). Weitere wirkstoffspezifische
Leistungsdaten liegen vor.
Die Penicillin- und Ampicillin-MHKs einiger
β-Lactamase produzierender Staphylokokken sind
extrem abhängig von der Impflösung. S. aureus
ATCC 29213 ist ein solcher Keim. Penicillin und
Ampicillin-Resultate sollten als innerhalb des
Kontrollbereiches angesehen werden, wenn dieser
Qualitätskontrollstamm eine Penicillin-MHK ≥ 0,25
µg/ml und eine Ampicillin-MHK ≥ 0,5 µg/ml zeigt
(d.h. für diese Kontrollbereiche sollte keine
Obergrenze festgesetzt werden). Wenn bei Penicillin
und Ampicillin Unterschiede gefunden werden
zwischen Verwendung des Prompt-Systems und der
Standardmethode (Tabelle 2-1), handelt es sich bei
den fraglichen Keimen um
β-Lactamase-Bildner. Alle beobachteten
abweichenden MHKs sollten als resistent
interpretiert werden (MHK > 0,25 µg/ml für
Penicillin). Die MHK-Werte mit dem Prompt-System
waren stets höher als die MHKs mit der
Standardmethode und zeigten somit deutlicher die
resistenten Eigenschaften der Bakterien auf. Diese
Beobachtung ist auch von Flejzor und Bokkenheuser
beschrieben worden.8 Ein ähnliches Phänomen
wurde auch bei Methicillin-resistenten
Staphylokokken und Penicillinase-resistenten
Penicillinen beobachtet.
Staphylokokken-Koloniezählwerte können bei der
Prompt-Methode höher ausfallen und über dem
NCCLS-Erwartungsbereich liegen. Erhöhte Werte
können die durch das Inokulum beeinflussten
Antibiotikaresultate beeinträchtigen. Bezüglich
antimikrobieller Wirkstoffe mit bekannter Inokulum-
Abhängigkeit, siehe Abschnitt “Einschränkungen”.
3251-3000A

Bibliographie
1. Gerlach, E.H. in Current Techniques for Antibiotic
Susceptibility Testing, A. Balows, ed. (Charles C.
Thomas, Publisher, Springfield, Illinois) 1974. pp.
63-76.
2. National Committee for Clinical Laboratory
Standards 2000. NCCLS approved Standard
M7-A5: Methods for Dilution Antimicrobial
Susceptibility Tests for Bacteria that Grow
Aerobically. National Committee for Clinical
Laboratory Standards, 771 E. Lancaster Ave.,
Villanova, PA. 19085.
3. Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp. 1970. An
improved single-disc method for testing the
antibiotic susceptibility of rapidly-growing
pathogens, Am. J. Clin. Path. 53:49-158.
4. Wicks, J.H., R.L. Nelson, and G.E. Krejcarek. 1981;
A rapid inoculum standardization system: a novel
device for standardization of inocula in
antimicrobial susceptibility testing. J. Clin.
Microbiol. 17:1114-1119.
5. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson.
1983. Inoculum standardization in antimicrobial
susceptibility testing: evaluation of overnight agar
cultures and the rapid inoculum standardization
system. J. Clin. Microbiol. 17:450-457.
6. Lund, M.E. and R.W. Hawkinson. 1983. Evaluation
of the Prompt Inoculation System for preparation
3251-3000A 4-5
of standardized bacterial inocula. J. Clin.
Microbiol. 18:84-91.
7. Barry, A.L., R.E. Badal, and R. W. Hawkinson.
1983. Influence of inoculum growth phase on
microdilution susceptibility tests. J. Clin.
Microbiol. 18:645-651.
8. Flejzor, B. and V.D. Bokkenheuser. 1985.
Performance of the Prompt System in
identification and antimicrobial susceptibility
testing of clinical isolates. J. Clin. Microbiol.
21:267-268.
Gewährleistung
Wir garantieren, dass diese Produkte die
Leistung erbringen, die in der Etikettierung bzw.
Packungsbeilage sowie der MicroScan-Literatur
beschrieben ist, wenn sie anweisungsgemäß
verwendet werden. ÜBER DIESE
AUSDRÜCKLICHE GARANTIE HINAUS WERDEN
KEINE GARANTIEN ÜBERNOMMEN, UND
BECKMAN COULTER LEHNT JEGLICHE
IMPLIZITE GARANTIE DER HANDELSÜBLICHEN
BRAUCHBARKEIT ODER DER EIGNUNG FÜR
EINEN BESTIMMTEN ZWECK AB. Die einzige
Verpflichtung seitens Beckman Coulter und der
einzige Anspruch des Käufers bei
Nichteinhaltung dieser Garantie besteht darin,
dass die Produkte nach dem Ermessen von
Beckman Coulter repariert oder ersetzt werden.
In keinem Fall haftet Beckman Coulter für
unmittelbare oder beiläufige Schäden oder
Folgeschäden in Zusammenhang mit den
Produkten.
4-6 3251-3000A
Sistema de Inoculación Prompt™*-D
Para el estudio de la sensibilidad por
microdilución
Propósito del Uso
El Sistema de Inoculación Prompt-D se emplea para
estandarizar el inóculo empleado en el estudio de
sensibilidad a antimicrobianos por microdilución.
Resumen
El procedimiento de microdilución utilizado en los
estudios de sensibilidad a antimicrobianos ha
proporcionado al microbiólogo clínico un método
fiable con el que obtener resultados cuantitativos en
este tipo de pruebas; se emplea para determinar la
concentración inhibitoria mínima (CIM) de los
agentes antimicrobianos, y ha sido muy bien acogido
en los laboratorios clínicos1. La precisión y la
reproducibilidad del procedimiento en la
determinación de la CIM dependen del uso de los
materiales y los métodos establecidos.
Un requisito importante del procedimiento para la
determinación de la CIM es conseguir un inóculo
bacteriano ajustado dentro de unos límites fijados, lo
cual puede lograrse de dos formas:
1) mediante un ajuste manual del inóculo hasta
alcanzar la turbidez estándar 0,5 de la escala de
McFarland2, seguido por la dilución apropiada, o
2) mediante una incubación hasta la fase
estacionaria del caldo de cultivo3, seguida por la
dilución apropiada.
El Sistema de Inoculación Prompt-D proporciona al
microbiólogo un modo de obtener inóculos
estandarizados, eliminando al mismo tiempo la
necesidad de incubar y ajustar la turbidez.4, 5, 6, 7 Los
resultados de sensibilidad mediante microdilución
obtenidos utilizando el Sistema de Inoculación
Prompt-D coinciden en al menos un 97% con los
resultados obtenidos en estas mismas pruebas con
inóculos preparados siguiendo el procedimiento
establecido por el National Committee on Clinical
Laboratory Standards (NCCLS).2
Principios
El Sistema de Inoculación Prompt-D consiste en una
varilla de inoculación y una botella de líquido de
dilución. La varilla es de polipropileno, lleva una
anilla de seguridad que sirve para secarla, y va unida
a un tapón. La punta de la varilla tiene una hendidura
* Marca registrada de 3M Company (St. Paul, MN EE.UU.)
** Marca registrada de BASF Corp., Parsippany, NJ EE.UU
3251-3000A
diseñada para contener un determinado número de
bacterias. La botella de plástico contiene treinta (30)
ml de líquido de dilución. La varilla se pone en
contacto con diversas colonias bacterianas en una
placa primaria de aislamiento, luego se seca con la
anilla, y posteriormente, se introduce en la botella de
plástico. Las bacterias se disuelven al agitar la
botella, y esta suspensión bacteriana permanece
estable durante cuatro horas. Si se usa el Sistema
de Inoculación Prompt-D dentro de ese margen de
cuatro horas posterior a la preparación, el 97% de
las CMI están comprendidas dentro de un margen
de dilución de ± uno (1) con respecto a las CIM
establecidas mediante los métodos convencionales.
El Sistema de Inoculación Prompt-D facilita la
preparación del inóculo de CMI al eliminar: 1) el
período de incubación y 2) la necesidad de ajustar la
concentración del inóculo.
Suspensión de la solución
El número de catálogo B1026-10D del Sistema de
Inoculación Prompt-D contiene 30 ml (± 1,0 ml) de
solución acuosa con surfactantes PLURONIC**
acuosos estabilizados.
Advertencias y precauciones
1. Para uso diagnóstico in vitro exclusivamente.
2. Seleccionar las colonias de una placa de cultivo
RECIENTE (< 24 horas).
3. Usar la suspensión bacteriana en un plazo de
cuatro horas después de su preparación.
4. NO COLOCAR la varilla de plástico de la
inoculación CERCA DE UNA LLAMA bajo
NINGUNA circunstancia.
5. Mantener los dedos por encima del borde del
tapón y en la superficie externa de la anilla, con
el fin de evitar la contaminax`ción.
6. Mantener cubiertas las varillas cuando no se
estén utilizando.
7. No emplear este procedimiento cuando el
tamaño de las colonias sea inferior al de la
punta de la varilla.
NOTA:
Tras la inoculación, la botella, la varilla y la
anilla de Prompt deben considerarse potencial
mente contaminadas. Manipular y desechar
estos instrumentos en consecuencia.
5-1
 NOTA:
Conservación
En el caso de colonias muy pequeñas, casi
Las unidades de Prompt deben conservarse en un
milimétricas, continúe incubando la placa
intervalo de temperatura de 2 a 27°C. Evitar que
primaria hasta que alcancen el diámetro de la
incida luz directa sobre ellas. No emplear las
punta de la varilla. Si resulta improbable que el
unidades después de la fecha de caducidad que
diámetro de la colonia alcance dicho tamaño
aparece en el paquete. Las unidades inoculadas
(por ejemplo, en el caso de determinados
pueden conservarse a temperatura ambiente hasta
estreptococos), deberá emplearse otro método
un máximo de cuatro horas.
de preparación de inóculos.
Deterioro del producto 4. Asiendo la varilla por el tapón con una mano,
Las botellas de Prompt no deben emplearse si la sujete la anilla con la otra y tire con firmeza
botella o el tapón presentan golpes o grietas. para romper la unión entre la anilla y el vástago
Obtención y preparación de las muestras de la varilla. No retuerza ni doble la anilla.
Las muestras que se reciban en el laboratorio deben Mantenga el extremo de la varilla apuntando
tratarse del modo habitual para preparar una placa de al suelo, alejada de usted y del resto de las
cultivo primaria. Para emplear el Sistema de personas. (Figura 1-2).
Inoculación Prompt-D se necesitan tres colonias
aisladas de un tamaño mayor al de la punta de la
varilla, de un cultivo de dieciocho a veinticuatro (18 a
24) horas.
Procedimiento
Material proporcionado
62 varillas de inoculación de Prompt
60 botellas de inoculación de Prompt
El Sistema de Inoculación Prompt-D puede
emplearse, con el fin de rehidratar la placa, en la
preparación inóculos destinados a determinar la CIM
mediante microdilución en aquellos procedimientos
en los que se emplee un inóculo realizado en una
solución no nutritiva. Para ello, deben seguirse las
siguientes instrucciones:
A. Preparación de la suspensión bacteriana
1. Extraiga de la caja la cantidad de botellas de Figura 1-2
inoculación de Prompt que necesite.
2. Extraiga de la caja una varilla de inoculación. 5. Tire de la anilla lentamente hacia abajo,
sepárela del vástago de la varilla y deséchela.
3. Mantenga la punta de la varilla perpendicular a
(Figura 1-3).
la superficie del agar y toque con ella 3
colonias aisladas cuyo tamaño sea al menos 6. Sujetando la varilla de inoculación con una
tan grande como la punta de la varilla. No mano, coja una botella de inoculación de
perfore el agar. No raspe ni arrastre el extremo Prompt.
de la varilla por las colonias (Figura 1-1).

Figura 1-3

Figura 1-1

5-2 3251-3000A
 7. Doble el cierre de la botella hacia un lado
hasta que éste se parta. (Figura 1-4).
E-0822B
Figura 1-4
8. Introduzca la varilla de inoculación dentro de
la botella y presione hacia abajo con un
movimiento giratorio para asegurarse de que
quede bien cerrado. (Figura 1-5).
Figura 1-5
9. Agite bien la botella durante 8 ó 10 minutos
para que las bacterias se desprendan del
extremo de la varilla. Si no se desprenden,
deje reposar la solución durante 5 minutos y
agite de nuevo. (Figura 1-6).
Figura 1-6
3251-3000A
10. La suspensión bacteriana debe emplearse
dentro de un plazo de cuatro horas después
de su preparación. Si no se utiliza
inmediatamente después de su preparación,
deberá agitarse bien antes de usar, con el fin
de resuspender las bacterias.
B. Colocación de la suspensión en el inoculador
1. Saque la varilla de inoculación de la botella y
deséchela.
2. Vierta la suspensión en el inoculador,
apretando suavemente la botella
(Figura 1-7).
Figura 1-7
3. Proceda a determinar la CIM mediante un
procedimiento de microdilución apropiado.
NOTA:
Tras la inoculación, la botella, la varilla y la
anilla del Prompt deben considerarse
portadoras potencialemente contaminados.
Manipular y desechar estos instrumentos en
consecuencia.
Control de calidad
Para el control de calidad, remítase al identificador
de sistema de la sensibilidad mediante microdilución
adecuado.
Limitaciones
1. El Sistema de Inoculación Prompt-D no debe
emplearse cuando el tamaño de la colonia sea
inferior al de la punta de la varilla. Entre los
organismos que no pueden alcanzar ese
tamaño se encuentran losl Streptococcus spp.
a excepción del S. bovis y el S. agalactiae
(Grupo B). Si se utilizan colonias demasiado
pequeñas, la inoculación será inferior a la
normal y esto puede hacer que un organismo
resistente parezca sensible. En el caso de
colonias con un tamaño inferior al de la punta
de la varilla, deberá emplearse otro método de
preparación de inóculos.
5-3
2. Es posible que algunas cepas mucoides, como
las de Klebsiella spp o Pseudomonas spp, no se
adhieran a la varilla al picar la colonia. Esto
podrá verse claramente. En el caso de este tipo
de organismos, deberá emplearse otro método
de preparación de inóculos.
3. El Sistema Prompt ha mostrado CIMs elevadas
a fluoroquinolonas (p.e. gatifloxacina),
lincosamidas (p.e. clindamicina) y macrolidos
(p.e. eritromicina) en estafilococos, comparado
con el método de referencia. La concentración
del inóculo es crítica en estas combinaciones
de antibiótico y microorganismo. Si usando
Prompt obtenemos una interpretación
Intermedia o Resistente y un método
alternativo es Sensible (p.e. turbidez) debería
repetirse por un método de turbidez antes de
informar los resultados.
Resultados esperados
Si se siguen las indicaciones, el Sistema de
Inoculación Prompt-D proporcionará el inóculo
apropiado para la determinación de la CIM mediante
microdilución en la mayoría de aislamientos
clínicos. Las CIM obtenidas con inóculos
preparados con el Sistema de Inoculación Prompt-
D muestran una coincidencia superior al 97% con
las obtenidas con inóculos preparados siguiendo el
procedimiento establecido por el National
Committee on Clinical Laboratory Standards
(NCCLS).2
Características de comportamiento específicas
Se compararon los resultados de las pruebas de
sensibilidad mediante microdilución obtenidos con
inóculos preparados con el sistema Prompt con los
resultados obtenidos con inóculos preparados
siguiendo el procedimiento establecido por el
National Committee on Clinical Laboratory
Standards (NCCLS).2 Novecientos dieciséis
aislamientos fueron sometidos a prueba en paneles
deshidratados convencionales de MicroScan. Las
pruebas se llevaron a cabo en dos emplazamientos,
utilizando tanto instrumentación MicroScan como
verificación manual.
Los inóculos se prepararon con el procedimiento
del Sistema de Inoculación Prompt-D y con el
procedimiento establecido por el NCCLS. La
densidad media del inóculo en 100 organismos
registrada inmediatamente después de la
preparación del inóculo fue de 6,9 x 105 cfu/ml. El
porcentaje total de resultados en un margen de
dilución de +/- 1 fue de un 97%. Las
concentraciones inhibitorias mínimas para P.
aeruginosa obtenidas con aminoglucósidos
(amikacina, gentamicina, tobramicina, etc.)
mediante el método Prompt concuerdan en un
97,5% (CIM dentro de un margen de dilución de +/-
1 con respecto a las CIM obtenidas con el
5-4
procedimiento establecido por el NCCLS). El resto de
antibióticos estan en concordancia.
En el caso de algunos estafilococos productores de
β -lactamasa, la CIM de la penicilina y de la ampicilina
dependen enormemente del inóculo. El S. aureus
ATCC 29213 es uno de estos casos, por lo que los
resultados de la penicilina y la ampicilina deberán
considerarse bajo control si esta cepa muestra una
CIM de penicilina ≥0,25 µg/ml y una CIM de
ampicilina ≥ 0,5 µg/ml (es decir, no debe aplicarse
ningún límite superior a estos intervalos de control).
Las discrepancias que se observaron en los
resultados de la penicilina y la ampicilina entre el
método de Prompt y los métodos convencionales
(Tabla 1-1) correspondían todas a organismos
productores de β-lactamasa. Todas las
concentraciones inhibitorias mínimas discrepantes
observadas se interpretaron como resistentes (CIM
0,25 µg/ml en el caso de la penicilina). Las CIM
obtenidas mediante el sistema de Prompt fueron
invariablemente mayores que las CIM estándar,
siendo mejores indicativos de la resistencia de las
bacterias. Este fenómeno también ha sido observado
por Flejzor y Bokkenheuser;8 asimismo, se ha
observado un fenómeno similar con estafilococos
resistentes a la meticilina y con las penicilinas
resistentes a la penicilasa.
El contaje de colonias de estafilococos puede ser
elevada usando el método Prompt y puede ser
superior al rango propuesto por NCCLS. El aumento
de colonias puede afectar al resultados de algunos
antibióticos muy inóculo dependientes. En en
apartado de Limitaciones están detallados estos
antibióticos inóculo dependientes.
Referencias bibliográficas
1. Gerlach, E.H. in Current Techniques for Antibiotic
Susceptibility Testing, A. Balows, ed. (Charles C.
Thomas, Publisher, Springfield, Illinois) 1974. pp.
63-76.
2. National Committee for Clinical Laboratory
Standards 2000. NCCLS approved Standard M7-
A5: Methods for Dilution Antimicrobial
Susceptibility Tests for Bacteria that Grow
Aerobically. National Committee for Clinical
Laboratory Standards, 771 E. Lancaster Ave.,
Villanova, PA. 19085.
3. Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp. 1970. An
improved single-disc method for testing the
antibiotic susceptibility of rapidly-growing
pathogens, Am. J. Clin. Path. 53:49-158.
4. Wicks, J.H., R.L. Nelson, and G.E. Krejcarek.
1981; A rapid inoculum standardization system:
a novel device for standardization of inocula in
antimicrobial susceptibility testing. J. Clin.
Microbiol. 17:1114-1119.
5. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W.
Hawkinson. 1983. Inoculum standardization in
antimicrobial susceptibility testing: evaluation of
overnight agar cultures and the rapid inoculum
standardization system. J. Clin. Microbiol.
17:450-457.
3251-3000A
6. Lund, M.E. and R.W. Hawkinson. 1983.
Evaluation of the Prompt Inoculation System for
preparation of standardized bacterial inocula. J.
Clin. Microbiol. 18:84-91.
7. Barry, A.L., R.E. Badal, and R. W. Hawkinson.
1983. Influence of inoculum growth phase on
microdilution susceptibility tests. J. Clin.
Microbiol. 18:645-651.
8. Flejzor, B. and V.D. Bokkenheuser. 1985.
Performance of the Prompt System in
identification and antimicrobial susceptibility
testing of clinical isolates. J. Clin. Microbiol.
21:267-268.
3251-3000A 5-5
Declaración de garantía
Estos productos están garantizados para
funcionar como se describe en el etiquetado y la
literatura de MicroScan cuando se usan siguiendo
las instrucciones. NO HAY GARANTÍAS QUE SE
EXTIENDAN MÁS ALLÁ DE LO EXPRESADO EN
ÉSTA Y BECKMAN COULTER RECHAZA
CUALQUIER GARANTÍA ÍMPLICITA DE
COMERCIALIZACIÓN O ADECUACIÓN A UN
PROPÓSITO CONCRETO. La única obligación de
Beckman Coulter y el exclusivo remedio al
comprador por el incumplimiento de esta garantía
será, a decisión de Beckman Coulter, la reparación
o el reemplazo de productos. En ningún caso
Beckman Coulter será responsable de daños por
proximidad, incidentales o derivados en conexión
con los productos.
5-6 3251-3000A
Prompt™* Sistema-D de Inoculação
Para utilização com Testes de
Sensibilidade por Microdiluição
Fim a que se destina
O Sistema-D de Inoculação Prompt é utilizado para
normalizar os inóculos destinados a testes de
sensibilidade antimicrobiana por microdiluição.
Resumo
O procedimento de microdiluição para o teste de
sensibilidade antimicrobiana fornece ao microbiólogo
clínico um método fiável para obter resultados
consistentes em testes de sensibilidade quantitativa.
Este procedimento é utilizado para determinar a
concentração inibitória mínima (CIM) dos agentes
antimicrobianos e tem ganho uma larga aceitação na
clínica laboratorial.1 A exactidão e a reprodutibilidade
do procedimento de CIM dependem da utilização de
materiais e de métodos definidos.
Uma das necessidades importantes do procedimento
de CIM é o controlo da população bacteriológica do
inóculo dentro de limites definidos. Este passo pode
ser realizado de duas maneiras:
1) ajuste manual do inóculo para se equiparar a
um padrão de turvação de McFarland2 de 0,5
seguido da diluição adequada ou
2) incubação até à fase estacionária em caldo de
cultura3 seguido da diluição adequada.
O Sistema-D de Inoculação Prompt fornece ao
microbiólogo um método de obter inóculos
padronizados enquanto elimina a necessidade de
ajustes por incubação e turvação.4,5,6,7 Os resultados
da sensibilidade por microdiluição obtidos utilizando
o Sistema-D de Inoculação Prompt mostram uma
correlação de 97% ou superior com os resultados de
sensibilidade por microdiluição obtidos com
inoculados preparados conforme o procedimento do
National Committee on Clinical Laboratory Standards
(NCCLS).2
Princípios
O Sistema-D de Inoculação Prompt consiste numa
vara de inoculação e um frasco de diluente. A vara é
de polipropileno e tem um anel retirável que serve
como mecanismo de limpeza. A vara encontra-se
presa a uma tampa. Na ponta da vara encontra-se
uma concavidade concebida para albergar um
número específico de bactérias. São fornecidos trinta
(30) ml de diluente no frasco de plástico. A vara toca
em várias colónias de bactérias numa placa de
isolamento primário, é limpa e, em seguida, colocada
* Marca Registada da 3M Company, St. Paul, MN EUA
** Marca commercial registada da BASF Corporation, Parsippany, NJ, EUA
3251-3000A
no frasco de plástico. As bactérias são suspensas por
agitação do frasco. A suspensão bacteriológica
permanece estável durante quatro horas. Quando o
Sistema-D de Inoculação Prompt é utilizado nas quatro
horas seguintes à preparação, 97% das CIM
encontram-se a ± uma (1) diluição das CIM
determinadas pelo método convencional.
O Sistema-D de Inoculação Prompt facilita a
preparação do inóculo CIM, eliminando: 1) o
período de incubação, e 2) a necessidade de ajuste da
concentração do inóculo.
Solução de suspensão
O Sistema-D de Inoculação Prompt, número de
catálogo B1026-10D, contém 30 ml (± 1,0 ml) de
surfactantes aquosos PLURONIC** estabilizados.
Advertências e precauções
1. Para utilização apenas em diagnóstico in vitro.
2. As colónias devem ser seleccionadas a partir de
uma placa de cultura FRESCA (<24 horas).
3. A suspensão bacteriológica deve ser utilizada nas
quatro horas seguintes à preparação.
4. NÃO APROXIMAR NENHUMA CHAMA da vara de
plástico para inoculação em nenhumas
circunstâncias.
5. Para evitar uma eventual contaminação, manter os
dedos acima da borda da tampa e na superfície
exterior do anel.
6. Manter as varas tapadas quando estas não
estiverem a ser utilizadas.
7. Não utilizar no caso das colónias serem mais
pequenas do que a ponta da vara.
NOTA:
Após a inoculação, o frasco de inoculação
Prompt, a vara e o anel devem ser considerados
potenciais portadores de agentes patogénicos.
Manusear e descartar o produto de forma
adequada.
Armazenamento
As unidades de Prompt devem ser armazenadas a
2-27ºC. Evitar a incidência de luz directa. Não utilizar
as unidades após o fim do prazo de validade
apresentado na embalagem. As unidades inoculadas
podem ser armazenadas até quatro horas à
temperatura ambiente.
6-1
 NOTA:
Deterioração do produto
Para colónias muito pequenas, continuar a incubação
Os frascos de Prompt não devem ser utilizados no
da placa primária até que seja alcançado o diâmetro da
caso do frasco ou da tampa estarem fissurados.
ponta da vara. No caso de não ser previsível que o
Colheita e preparação da amostra diâmetro da colónia alcance este tamanho (por
As amostras recebidas no laboratório devem ser exemplo, alguns estreptococos), deve ser utilizado um
tratadas da maneira habitual para a preparação de método alternativo para a preparação do inóculo.
uma placa de cultura primária. São necessárias três 4. Segurando na vara pela pega com uma mão,
colónias isoladas maiores do que a ponta da vara agarrar o anel com a outra mão e puxar com
provenientes de uma cultura de dezoito a vinte e firmeza para quebrar a ligação entre o anel e o
quatro (18-24) horas para a utilização do Sistema-D eixo da vara. Não torcer ou entortar a vara.
de Inoculação Prompt. Manter a ponta direccionada para o chão,
longe de si e de outras pessoas
Procedimento
(Figura 1-2).
Materiais fornecidos
62 varas de inoculação Prompt
60 frascos de inoculação Prompt
O Sistema-D de Inoculação Prompt pode ser
utilizado para a preparação de inóculos para testes
de CIM por microdiluição que utilizem o inóculo em
suspensão numa solução não nutritiva para
rehidratar o tabuleiro. Para utilizar, seguir as
seguintes instruções:
A. Preparação da suspensão bacteriológica
1. Retirar o número pretendido de frascos de
inoculação Prompt da embalagem.
2. Retirar da embalagem uma vara de
inoculação.
3. Segurando na ponta da vara
perpendicularmente à superfície da gelose,
tocar em 3 colónias isoladas tão grandes ou
maiores do que a ponta. Não penetrar a Figura 1-2
gelose. Não raspar ou arrastar a ponta sobre
as colónias (figura 1-1). 5. Fazer deslizar lentamente o anel para baixo,
retirá-lo do eixo da vara e descartar o anel.
(Figura 1-3)
6. Enquanto se segura na vara de inoculação
com uma mão, pegar num frasco de
inoculação Prompt. 5.

Figura 1-1

Figure 1-3

6-2 3251-3000A
 7. Dobrar a tampa do frasco para o lado até que
esta se quebre (Figura 1-4).
E-0822B
Figura 1-4
8. Colocar a vara de inoculação dentro do
frasco e premir para baixo com um
movimento rotativo para assegurar uma boa
selagem (Figura 1-5).
Figura 1-5
9. Agitar vigorosamente o frasco 8 a 10 vezes
para soltar as bactérias da ponta da vara. No
caso de o microorganismo não se soltar da
vara, deixar repousar a solução durante 5
minutos e voltar a agitar (Figura 1-6).
Figura 1-6
3251-3000A 6-3
10. A suspensão bacteriológica deve ser utilizada
nas quatro horas seguintes à preparação. No
caso de não ser utilizada imediatamente após a
preparação, agitar vigorosamente para voltar a
suspender as bactérias imediatamente antes da
utilização.
B. Colocação da suspensão no tabuleiro de
sementeira
1. Retirar do frasco a vara de inoculação e
descartá-la.
2. Deitar a suspensão no tabuleiro de sementeira,
apertando cuidadosamente o frasco com uma
acção de bombagem
(Figura 1-7).
Figura 1-7
3. Continuar com o procedimento adequado de
CIM por microdiluição.
NOTA:
O frasco Prompt inoculado, a vara e o anel
devem ser considerados potenciais portadores
de agentes patogénicos. Manusear e descartar
de forma adequada.
Controlo da qualidade
Para obter informação acerca do controlo de
qualidade, consultar o sistema adequado de
sensibilidade por microdiluição/ID.
Limitações
1. O Sistema-D de inoculação Prompt não deve ser
utilizado quando o tamanho das colónias for
inferior à ponta da vara. Exemplos de organismos
que podem não alcançar o tamanho mínimo são
as espécies de Streptococcus spp. que não S.
bovis e S. agalactiae (Grupo B). A colheita de
amostras provenientes de colónias demasiado
pequenas resultará em sub-inoculação e poderá
dar origem a que um organismo resistente pareça
ser sensível. Deve ser utilizado um método
alternativo de preparação do inóculo para colónias
mais pequenas que a ponta da vara.
 2. Algumas estirpes mucóides de
microorganismos tais como Klebsiella
spp. ou Pseudomonas spp. podem não
aderir à vara quando se tentar picar a
colónia. Este facto será visualmente
identificável. Deve ser utilizado um
método alternativo de preparação do
inóculo para tais microorganismos.
3. Sistema Prompt demonstrou CIMs
elevadas com fluoroquinolonas
(ex.gatifloxacina), lincosamidas (ex.
clindamicina), e macrólidos(ex.
eritromicina) e estafilococos quando
comparado com o método de referência.
A concentração do inóculo é critica com
esta combinação de
organismo/antimicrobiano.Se se obtem
uma interpretação intermédia ou
resistente com este método deve ser
usado um método alternativo que
permita a obtenção de um resultado
susceptivel antes de reportar os
resultados.
Resultados Esperados
Quando utilizado conforme as instruções, o
Sistema-D de Inoculação Prompt fornecerá os
inóculos apropriados para testes de CIM por
microdiluição para a maioria dos isolados clínicos.
Os resultados de CIM obtidos com inóculos
preparados com o Sistema-D de Inoculação Prompt
apresentam uma concordância superior a 97% com
os resultados de CIM obtidos com inóculos
preparados conforme o procedimento da NCCLS.2
Características específicas de desempenho
Os resultados de sensibilidade por microdiluição
obtidos com inóculos preparados pelo sistema de
Prompt foram comparados com os resultados
obtidos com inóculos preparados conforme o
procedimento da NCCLS.2 Novecentos e dezasseis
isolados foram testados em painéis convencionais
desidratados MicroScan. Os testes foram realizados
em dois locais, utilizando tanto instrumentos
MicroScan, como verificação manual.
Os inóculos foram preparados conforme os
procedimentos do Sistema-D de Inoculação Prompt
e NCCLS. A densidade média do inóculo para 100
microorganismos contados imediatamente após a
preparação do inóculo foi de 6,9 x 105 cfu/ml. A
percentagem global de resultados a +/- 1 diluição foi
de 97%. As CIM para P. aeroginosa obtidas com
aminoglucósidos (p.ex., amicacina, gentamicina,
tobramicina) pelo Prompt têm uma concordância
essencial de 97,5% (CIM a +/- 1 diluição das CIM
obtidas com o método NCCLS). Dados adicionais
sobre a performance especifica de antibioticos
estão disponiveís.
6-4
As CIM de penicilina e de ampicilina para alguns
estafilococos produtores de β−lactamase são
extremamente inóculo-dependentes. S. aureus ATCC
29213 é um desses organismos. Os resultados para a
penicilina e ampicilina devem ser considerados
controlados se essa estirpe de controlo de qualidade
apresentar qualquer CIM de penicilina ≥0,25 µg/ml e
qualquer CIM de ampicilina ≥0,5 µg/ml (ou seja,
nenhum limite superior deve ser aplicado a estes
intervalos de controlo). Quando ocorreram
discrepâncias para penicilina e ampicilina entre o
sistema de Prompt e os testes de método padrão
(Tabela 1-1), os microorganismos envolvidos eram
produtores de β–lactamase. Todas as CIM
discrepantes seriam interpretadas como resistentes
(CIM 0,25 µg/ml para a penicilina). As CIM do sistema
de Prompt foram invariavelmente mais elevadas do
que as CIM padrão, assim indicando melhor a natureza
resistente da bactéria. Este fenómeno também foi
relatado por Fleijzor e Bokkenheuser.8 Um fenómeno
semelhante foi também registado com estafilococos
resistentes à meticilina e as penicilinas resistentes à
penicilinase.
A contagem de colónias de estafilococos pode ser
elevada com o método Prompt em comparação com
os intervalos NCCLS esperados. A contagem elevada
de colónias pode afectar os resultados dos antibióticos
que são afectados pelo inóculo.Consulte a secção de
limitações de antibióticos que são inóculo-
dependentes.
Bibliografia
1. Gerlach, E.H. em Current Techniques for Antibiotic
Susceptibility Testing, A. Balows, ed. (Charles C.
Thomas, Publisher, Springfield, Illinois) 1974. pp.
63-76.
2. National Committee for Clinical Laboratory
Standards 2000. NCCLS Norma aprovada M7-A5:
Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility
Tests for Bacteria that Grow Aerobically. National
Committee for Clinical Laboratory Standards, 771
E. Lancaster Ave., Villanova, PA. 19085.
3. Barry, A.L., F. Garcia, e L.D. Thrupp. 1970. An
improved single-disc method for testing the
antibiotic susceptibility of rapidly-growing
pathogens, Am. J. Clin. Path. 53:49-158.
4. Wicks, J.H., R.L. Nelson, e G.E. Krejcarek. 1981; A
rapid inoculum standardization system: a novel
device for standardization of inocula in
antimicrobial susceptibility testing. J. Clin.
Microbiol. 17:1114-1119.
5. Baker, C.N., C. Thornsberry, e R.W. Hawkinson.
1983. Inoculum standardization in antimicrobial
susceptibility testing: evaluation of overnight agar
cultures and the rapid inoculum standardization
system. J. Clin. Microbiol. 17:450-457.
3251-3000A
6. Lund, M.E. e R.W. Hawkinson. 1983. Evaluation
of the Prompt Inoculation System for preparation
of standardized bacterial inocula. J. Clin.
Microbiol. 18:84-91.
7. Barry, A.L., R.E. Badal, e R. W. Hawkinson. 1983.
Influence of inoculum growth phase on
microdilution susceptibility tests. J. Clin.
Microbiol. 18:645-651.
8. Flejzor, B. e V.D. Bokkenheuser. 1985.
Performance of the Prompt System in
identification and antimicrobial susceptibility
testing of clinical isolates. J. Clin. Microbiol.
21:267-268.
3251-3000A 6-5
Declaração Garantia
Garante-se o desempenho destes produtos como
descrito nas etiquetas e na literatura da MicroScan,
quando utilizados de acordo com as respectivas
instruções. NÃO EXISTEM QUAISQUER GARANTIAS
QUE SE ESTENDAM ALÉM DESTA GARANTIA
EXPRESSA E A BECKMAN COULTER NÃO
RECONHECE QUAISQUER GARANTIAS INFERIDAS DE
MERCANTIBILIDADE OU ADEQUAÇÃO PARA FIM
PARTICULAR. A única obrigação da Beckman Coulter
e a compensação exclusiva para o comprador ao
abrigo desta garantia será, por opção da Beckman
Coulter, proceder à reparação ou à substituição dos
produtos. Em nenhum caso será a Beckman Coulter
responsável por quaisquer danos directos, indirectos
ou consequenciais relacionados com os produtos.
6-6 3251-3000A
Σύστημα ενοφθαλμισμού D-PROMPT™*.
Για χρήση στις εξετάσεις ευαισθησίας στα
αντιβιοτικά με μικροαραιώσεις
Χρήση για την οποία προορίζεται
Το σύστημα-D ενοφθαλμισμού Prompt
χρησιμοποιείται για την δηµιουργία
στανταρισµένων ενοφθαλμισμάτων για
εξετάσεις αντιμικροβιακής ευαισθησίας με
μικροαραίωση.
Περίληψη
Η διαδικασία της μικροαραίωσης για την
εξέταση της αντιμικροβιακής ευαισθησίας έχει
εφοδιάσει τον κλινικό μικροβιολόγο με μία
αξιόπιστη μέθοδο για τη λήψη σημαντικών
ποσοτικών αποτελεσμάτων από εξετάσεις
ευαισθησίας. Η διαδικασία αυτή χρησιμοποιείται
για τον προσδιορισμό της ελάχιστης
ανασταλτικής συγκέντρωσης (MIC)
αντιμικροβιακών παραγόντων και έτυχε ταχείας
και ευρείας αποδοχής στο κλινικό εργαστήριο.1
Η ακρίβεια και η αναπαραγωγιμότητα της
διαδικασίας MIC εξαρτώνται από τη χρήση
καθορισμένων υλικών και μεθόδων.
Μία από τις σημαντικές απαιτήσεις της
διαδικασίας MIC είναι ο έλεγχος του
βακτηριακού πληθυσμού του ενοφθαλμίσματος
εντός καθορισμένων ορίων. Αυτό μπορεί να
επιτευχθεί με δύο τρόπους:
1) Μη αυτόματη ρύθμιση του
ενοφθαλμίσματος ώστε να ταιριάζει με ένα
πρότυπο θολερότητας2 McFarland 0,5, η
οποία ακολουθείται από την κατάλληλη
αραίωση ή
2) Επώαση κατά τη στάσιμη φάση σε
καλλιέργεια σε ζωμό3, που ακολουθείται
από την κατάλληλη αραίωση.
Το σύστημα-D ενοφθαλμισμού Prompt παρέχει
στο μικροβιολόγο μία μέθοδο λήψης
τυποποιημένων ενοφθαλμισμάτων
εξαλείφοντας ταυτόχρονα την ανάγκη επώασης
και ρύθμισης της θολερότητας.4,5,6,7 Τα
αποτελέσματα της ευαισθησίας με
μικροαραίωση που λαμβάνονται με χρήση του
συστήματος-D ενοφθαλμισμού Prompt
παρουσιάζουν μία συσχέτιση 97% ή
μεγαλύτερη με τα αποτελέσματα ευαισθησίας
με μικροαραίωση που λαμβάνονται με
ενοφθαλμίσματα τα οποία παρασκευάζονται
σύμφωνα με τη διαδικασία της National
Committee of Clinical Laboratory Standards
(NCCLS) (Εθνική Επιτροπή Κλινικών
Εργαστηριακών Προτύπων).2
* Εμπορικό σήμα της 3M Company, St. Paul, MN USA.
** Σήμα κατατεθέν της BASF Corp., Parsippany, NJ USA
3251-3000A
Βασικές αρχές
Το σύστημα-D ενοφθαλμισμού Prompt
αποτελείται από μία ακίδα ενοφθαλμισμού και
μία φιάλη αραιωτικού. Η ράβδος είναι
κατασκευασμένη από πολυπροπυλένιο και
φέρει αποσπώμενο κάλυµα, το οποίο
χρησιμεύει ως μηχανισμός αποµάκρυνσης της
περίσσειας. Η ράβδος είναι προσαρτημένη σε
ένα πώμα. Το άκρο της ράβδου φέρει μία
αύλακα σχεδιασμένη για να συγκρατεί
συγκεκριμένο αριθμό βακτηρίων. Στην
πλαστική φιάλη παρέχονται τριάντα (30) ml
αραιωτικού. Η ράβδος έρχεται σε επαφή με
αρκετές βακτηριακές αποικίες σε ένα τρυβλίο
πρωτογενούς απομόνωσης, σκουπίζεται και
κατόπιν τοποθετείται μέσα στην πλαστική
φιάλη. Τα βακτήρια εναιωρούνται ανακινώντας
τη φιάλη. Το βακτηριακό εναιώρημα
παραμένει σταθερό για τέσσερις ώρες. Όταν
το σύστημα-D ενοφθαλμισμού Prompt
χρησιμοποιείται εντός τεσσάρων ωρών μετά
την παρασκευή, το 97% των MIC βρίσκονται
εντός του πεδίου τιμών των MIC που
προσδιορίζονται με τη συμβατική μέθοδο ± μία
(1) αραίωση .
Το σύστημα-D ενοφθαλμισμού Prompt
διευκολύνει την παρασκευή ενοφθαλμισμάτων
MIC καταργώντας: 1) την περίοδο επώασης
και 2) την ανάγκη ρύθμισης της συγκέντρωσης
του ενοφθαλμίσματος.
Διάλυμα εναιώρησης
Το σύστημα-D ενοφθαλμισμού Prompt με
αριθμό καταλόγου B1026-10D περιέχει 30 ml
(± 1,0 ml) σταθεροποιημένων, υδατικών
διαβρεκτικών μέσων PLURONIC**.
Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις
1. Για διαγνωστική χρήση in vitro μόνο.
2. Οι αποικίες πρέπει να επιλέγονται από ένα
τρυβλίο ΦΡΕΣΚΙΑΣ καλλιέργειας (< 24
ώρες).
3. Το βακτηριακό εναιώρημα πρέπει να
χρησιμοποιείται εντός τεσσάρων ωρών
από την παρασκευή του.
4. ΣΕ ΚΑΜΙΑ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΜΗΝ
ΘΕΡΜΑΙΝΕΤΕ ΣΕ ΦΛΟΓΑ την πλαστική
ακίδα ενοφθαλμισμού.
7-1
5. Για να αποφύγετε τη μόλυνση, κρατήστε τα
δάκτυλά σας πάνω από την προεξοχή του
πώματος και στην εξωτερική επιφάνεια του
κάλυμα.
6. Διατηρείτε τις ράβδους καλυμμένες όταν
δεν χρησιμοποιούνται.
7. Μην τις χρησιμοποιείτε εάν οι αποικίες
είναι μικρότερες από το άκρο της ράβδου.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ:
Μετά τον ενοφθαλµίσµατα, το φιαλίδιο
ενοφθαλμισμού, η ράβδος και το κάλυµα
Prompt θα πρέπει να θεωρούνται ως
δυνητικοί φορείς παθογόνων. Ο χειρισμός
και η απόρριψη του προϊόντος πρέπει να
γίνονται λαμβάνοντας υπόψη αυτήν την
πιθανότητα.
Φύλαξη
Οι μονάδες Prompt θα πρέπει να φυλάσσονται
σε θερμοκρασία 2-27°C. Αποφεύγετε την
άμεση έκθεση σε φως. Μη χρησιμοποιείτε τις
μονάδες μετά την ημερομηνία λήξης που
αναγράφεται στη συσκευασία. Οι
ενοφθαλμισμένες μονάδες μπορούν να
φυλάσσονται έως τέσσερις ώρες σε
θερμοκρασία δωματίου.
Αλλοίωση των προϊόντων
Οι φιάλες Prompt δεν θα πρέπει να
χρησιμοποιούνται εάν η φιάλη ή το πώμα έχει
ραγίσει.
Συλλογή και προετοιμασία των
δειγμάτων
Τα δείγματα που λαμβάνονται στο εργαστήριο
θα πρέπει να αντιμετωπίζονται με το συνήθη
τρόπο για την παρασκευή ενός τρυβλίου
πρωτογενούς καλλιέργειας. Για το σύστημα-D
ενοφθαλμισμού Prompt χρειάζονται τρεις
απομονωμένες αποικίες μεγαλύτερες από το
άκρο της ράβδου, από μία καλλιέργεια
δεκαοκτώ έως είκοσι τεσσάρων (18-24) ωρών.
Παρεχόμενα
υλικά της διαδικασίας
62 ράβδοι ενοφθαλμισμού Prompt
60 φιάλες ενοφθαλμισμού Prompt
Το σύστημα-D ενοφθαλμισμού Prompt μπορεί
να χρησιμοποιηθεί για την παρασκευή
ενοφθαλμισμάτων για πλάκες εξέτασης MIC με
μικροαραίωση, οι οποίες χρησιμοποιούν το
ενοφθαλμίσματα εναιωρημένο σε ένα μη
θρεπτικό διάλυμα, για την επανενυδάτωση της
πλάκας. Για να το χρησιμοποιήσετε,
ακολουθήστε τις παρακάτω οδηγίες:
7-2
A. Παρασκευή του βακτηριακού
εναιωρήματος
1. Βγάλτε από του κουτί τον απαιτούμενο
αριθμό φιαλών ενοφθαλμισμού Prompt.
2. Βγάλτε από το κουτί μία ακίδα
ενοφθαλμισμού.
3. Κρατώντας το άκρο της ράβδου κάθετα ως
προς την επιφάνεια του άγαρ, αγγίξτε 3
απομονωμένες αποικίες μεγέθους ίσου ή
μεγαλύτερου από το άκρο. Μη διεισδύετε
στο άγαρ. Μην ξύνετε ή σύρετε το άκρο
κατά πλάτος των αποικιών (Σχήμα 1-1)
Σχήμα 1-1
ΣΗΜΕΙΩΣΗ:
Για πολύ μικρές αποικίες, μεγέθους
μύτης βελόνας, συνεχίστε την επώαση
του πρωτογενούς τρυβλίου μέχρι να
φθάσουν τη διάμετρο του άκρου της
ράβδου. Εάν η διάμετρος της αποικίας
δεν είναι πιθανόν να φθάσει στο μέγεθος
αυτό (για παράδειγμα, ορισμένοι
στρεπτόκοκκοι), θα πρέπει να
χρησιμοποιηθεί μία εναλλακτική μέθοδος
για την παρασκευή του
ενοφθαλμίσματος.
4. Κρατώντας τη ακίδα από τη λαβή με το
ένα χέρι, πιάστε το κάλυµα με το άλλο
χέρι και τραβήξτε σταθερά για να
σπάσετε τη σύνδεση μεταξύ του κάλυμα
και του άξονα της ράβδου. Μη στρίβετε
και μην κάμπτετε το κάλυµα.
Κρατήστε το άκρο στραμμένο προς το
δάπεδο, μακριά από τον εαυτό σας
και άλλα άτομα (Σχήμα 1-2).
3251-3000A

Σχήμα 1-2
5. Σύρετε το κάλυµα αργά προς τα κάτω για
να το αφαιρέστε από τον άξονα της
ράβδου και απορρίψτε το (Σχήμα 1-3).
6. Κρατώντας τη ακίδα ενοφθαλμισμού με
το ένα χέρι, πάρτε μία φιάλη
ενοφθαλμισμού Prompt.
Σχήμα 1-3
7. Λυγίστε το καπάκι της φιάλης προς τα
πλάγια μέχρι να σπάσει (Σχήμα 1-4).
E-0822B
Σχήμα 1-4
3251-3000A
8. Τοποθετήστε τη ακίδα ενοφθαλμισμού
μέσα στη φιάλη και πιέστε την προς τα
κάτω με μία περιστροφική κίνηση, ώστε
να διασφαλιστεί η ερμητική
στεγανοποίηση (Σχήμα 1-5).
Σχήμα 1-5
9. Ανακινήστε έντονα τη φιάλη 8 έως 10
φορές για απελευθερώσετε τα βακτήρια
από το άκρο της ράβδου. Εάν ο
οργανισμός δεν απελευθερωθεί από τη
ακίδα, αφήστε το διάλυμα ακίνητο για 5
λεπτά και ανακινήστε το και πάλι
(Σχήμα 1-6).
Σχήμα 1-6
10. Το βακτηριακό εναιώρημα πρέπει να
χρησιμοποιείται εντός τεσσάρων ωρών
από την παρασκευή του. Εάν δεν
χρησιμοποιηθεί αμέσως μετά την
παρασκευή του, ανακινήστε το έντονα
για να επαναιωρήσετε τα βακτήρια
ακριβώς πριν από τη χρήση.
B. Προσθήκη εναιωρήματος στο σκαφάκι
ενοφθαλμισμού
1. Αφαιρέστε τη ακίδα ενοφθαλμισμού από
τη φιάλη και απορρίψτε την.
2. Εκχύσατε το εναιώρημα στο σκαφάκι
ενοφθαλμισμού σφίγγοντας απαλά τη
φιάλη με μία κίνηση που θυμίζει αντλία
(Σχήμα 1-7).
7-3

Σχήμα 1-7
3. Προχωρήστε στην κατάλληλη διαδικασία
MIC με μικροαραίωση.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ:
Η ενοφθαλμισμένη φιάλη Prompt, η
ράβδος και το κάλυµα θα πρέπει να
θεωρούνται ως δυνητικοί φορείς
παθογόνων. Ο χειρισμός και η απόρριψή
τους πρέπει να γίνονται λαμβάνοντας
υπόψη αυτήν την πιθανότητα.
Ποιοτικός έλεγχος
Ανατρέξτε στο κατάλληλο σύστημα ευαισθησίας
με μικροαραίωση/ταυτοποίησης για τον
ποιοτικό έλεγχο.
Περιορισμοί
1. Το σύστημα-D ενοφθαλμισμού Prompt δεν
θα πρέπει να χρησιμοποιείται όταν το
μέγεθος της αποικίας είναι μικρότερο από
το άκρο της ράβδου. Παραδείγματα
οργανισμών που ενδέχεται να μην
ανταποκρίνονται στην απαίτηση ως προς
το μέγεθος είναι ο Streptococcus spp.
εκτός των S. bovis και S. agalactiae
(Oμάδα B). Η επιλογή αποικιών που είναι
υπερβολικά μικρές θα έχει ως αποτέλεσμα
τον ανεπαρκή ενοφθαλµίσµατα και
ενδέχεται να εμφανίσει έναν ανθεκτικό
οργανισμό ως ευαίσθητο. Για αποικίες
μικρότερες από το άκρο της ράβδου θα
πρέπει να χρησιμοποιείται μία εναλλακτική
μέθοδος παρασκευής ενοφθαλμίσματος.
2. Ορισμένα βλεννώδη στελέχη οργανισμών
όπως η Klebsiella spp. ή Pseudomonas
spp. ενδέχεται να μην προσκολλούνται στη
ακίδα όταν επιχειρείται η επιλογή της
αποικίας. Αυτό θα είναι φανερό και με
γυμνό οφθαλμό. Για παρόμοιους
οργανισμούς θα πρέπει να
χρησιμοποιείται μία εναλλακτική μέθοδος
παρασκευής ενοφθαλμίσματος.
7-4
3. Το σύστηµα Prompt έδειξε αυξηµένες τιµές
MIC στις φλουοροκινολόνες (ή
γκατιφλοξασίνη) λινκοσαµίδες (πχ.
Κλινδαµυκίνη) και µακρολίδες
(ερυθροµυκίνη) µε σταφυλοκόκκους όταν
συγκρίνεται µε τη µέθοδο αναφοράς. Η
πυκνότητα του εναιωρήµατος είναι
καθοριστική στις παραπάνω αυτές
περιπτώσεις. Σε περίπτωση Ανοχής ή
ενδιάµεσης ευαισθησίας, θα πρέπει να
χρησιµοποιηθεί άλλη µέθοδος για την
επίτευξη του τεστ ευαισθησίας πριν δοθούν
τα αποτελέσµατα.
Αναμενόμενα αποτελέσματα
Όταν χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις οδηγίες,
το σύστημα-D ενοφθαλμισμού Prompt θα
παρέχει το σωστό ενοφθαλμίσματα για τη
εξέταση MIC με μικροαραίωση για τις
περισσότερες κλινικές απομονώσεις. Τα
αποτελέσματα MIC που λαμβάνονται με
ενοφθαλμίσματα παρασκευασμένα με το
σύστημα-D ενοφθαλμισμού Prompt
παρουσιάζουν συμφωνία μεγαλύτερη από 97%
με τα αποτελέσματα MIC που λαμβάνονται με
ενοφθαλμίσματα παρασκευασμένα σύμφωνα
με τη διαδικασία της NCCLS.2
Ειδικά χαρακτηριστικά απόδοσης
Τα αποτελέσματα ευαισθησίας με
μικροαραίωση που ελήφθησαν με
ενοφθαλμίσματα, τα οποία παρασκευάστηκαν
από το σύστημα Prompt, συγκρίθηκαν με τα
αποτελέσματα που ελήφθησαν με
ενοφθαλμίσματα που παρασκευάστηκαν
σύμφωνα με τη διαδικασία της NCCLS.2
Εξετάστηκαν εννιακόσιες δεκαέξι απομονώσεις
σε αποξηραμένες συμβατικές πλάκες
MicroScan. Η εξέταση εκτελέστηκε σε δύο
θέσεις, με χρήση τόσο συστήματος οργάνων
MicroScan όσο και μη αυτόματης επαλήθευσης.
Τα ενοφθαλμίσματα παρασκευάστηκαν
σύμφωνα με το σύστημα-D ενοφθαλμισμού
Prompt και τη διαδικασία της NCCLS. Η μέση
πυκνότητα ενοφθαλμίσματος για 100
οργανισμούς που καταμετρήθηκαν αμέσως
μετά την παρασκευή του ενοφθαλμίσματος
ήταν 6,9 x 105 cfu/ml. Ο Το συνολικό ποσοστό
των αποτελεσμάτων +/- 1 αραίωση ήταν 97%.
Οι MIC για τη P. aeruginosa που ελήφθησαν με
αμινογλυκοζίτες (π.χ. αμικασίνη, γενταμυκίνη,
τομπραμυκίνη) με το σύστημα Prompt είναι σε
ουσιαστική συμφωνία 97,5% (MIC, +/- 1
αραίωση, εντός του πεδίου τιμών των MIC που
λαμβάνονται με τη μέθοδο της NCCLS).
Επιπρόσθετες πληροφορίες για άλλα
αντιβιοτικά βρίσκονται σε αρχείο.
3251-3000A
Οι MIC της πενικιλλίνης και της αμπικιλλίνης για
ορισμένους σταφυλόκοκκους που παράγουν β-
λακταμάση εξαρτώνται ιδιαίτερα από το
ενοφθαλμίσματα. Ο S. aureus ATCC 29213 είναι
ένας από τους οργανισμούς αυτούς. Τα
αποτελέσματα της πενικιλλίνης και της
αμπικιλλίνης θα πρέπει να θεωρούνται ότι είναι
υπό έλεγχο, εάν αυτό το στέλεχος ποιοτικού
ελέγχου παρουσιάζει οποιαδήποτε MIC
πενικιλλίνης >0,25 µg/ml και οποιαδήποτε MIC
αμπικιλλίνης > 0,5 µg/ml (δηλ., δεν θα πρέπει να
εφαρμόζεται κανένα άνω όριο σε αυτά τα πεδία
τιμών ελέγχου). Όταν διαπιστώθηκαν
ασυμφωνίες για την πενικιλλίνη και την
αμπικιλλίνη μεταξύ του συστήματος Prompt και
των εξετάσεων τυπικών μεθόδων (Πίνακας 1-1),
οι ενεχόμενοι οργανισμοί ήταν παραγωγοί της β-
λακταμάσης. Όλες οι ασυμφωνίες των MIC που
παρατηρήθηκαν θα ερμηνεύονταν ως ανθεκτικές
(MIC 0,25 µg/ml για την πενικιλλίνη). Οι MIC του
συστήματος Prompt ήταν σταθερά υψηλότερες
από τις τυπικές MIC, υποδηλώνοντας καλύτερα
την ανθεκτική φύση των βακτηρίων. Το
φαινόμενο αυτό παρατηρήθηκε επίσης από τους
Flejzor και Bokkenheuser.8 Ένα παρόμοιο
φαινόμενο παρατηρήθηκε επίσης με ανθεκτικούς
στη μεθικιλλίνη σταφυλόκοκκους και ανθεκτικές
στην πενικιλλινάση πενικιλλίνες.
Ο αριθμός των αποικιών στη περίπτωση των
σταφυλοκόκκων μπορεί να είναι αυξημένος με
στο σύστημα Prompt, μεγαλύτερος από τον
αναμενόμενο κατά των NCCLS. Αυτό μπορεί
να έχει επίδραση στα αποτελέσματα των
αντιβιοτικών που επηρεάζονται από τη
πυκνότητα του εναιωρήματος. Βλέπε την
παράγραφο με τους περιορισμούς για τα
αντιβιοτικά του. Είναι γνωστό ότι είναι
εξαρτώμενο από το εναιώρημα.
Βιβλιογραφικές αναφορές
1. Gerlach, E.H. in Current Techniques for
Antibiotic Susceptibility Testing, A. Balows,
ed. (Charles C. Thomas, Publisher,
Springfield, Illinois) 1974. pp. 63-76.
2. National Committee for Clinical Laboratory
Standards 2000. NCCLS approved Standard
M7-A5: Methods for Dilution Antimicrobial
Susceptibility Tests for Bacteria that Grow
Aerobically. National Committee for Clinical
Laboratory Standards, 771 E. Lancaster
Ave., Villanova, PA. 19085.
3. Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp.
1970. An improved single-disc method for
testing the antibiotic susceptibility of rapidly-
growing pathogens, Am. J. Clin. Path.
53:49-158.
3251-3000A
4. Wicks, J.H., R.L. Nelson, and G.E.
Krejcarek. 1981; A rapid inoculum
standardization system: a novel device for
standardization of inocula in antimicrobial
susceptibility testing. J. Clin. Microbiol.
17:1114-1119.
5. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W.
Hawkinson. 1983. Inoculum
standardization in antimicrobial
susceptibility testing: evaluation of
overnight agar cultures and the rapid
inoculum standardization system. J. Clin.
Microbiol. 17:450-457.
6. Lund, M.E. and R.W. Hawkinson. 1983.
Evaluation of the Prompt Inoculation
System for preparation of standardized
bacterial inocula. J. Clin. Microbiol. 18:84-
91.
7. Barry, A.L., R.E. Badal, and R. W.
Hawkinson. 1983. Influence of inoculum
growth phase on microdilution
susceptibility tests. J. Clin. Microbiol.
18:645-651.
8. Flejzor, B. and V.D. Bokkenheuser. 1985.
Performance of the Prompt System in
identification and antimicrobial susceptibility
testing of clinical isolates. J. Clin. Microbiol.
21:267-268.
Δήλωση εγγύησης
Τα προϊόντα αυτά παρέχονται με την εγγύηση
ότι θα έχουν την απόδοση που περιγράφεται
στην επισήμανσή τους και το έντυπο υλικό της
MicroScan, εφόσον χρησιμοποιούνται σύμφωνα
με τις οδηγίες τους. ΔΕΝ ΥΠΑΡΧΟΥΝ
ΕΓΓΥΗΣΕΙΣ ΠΟΥ ΕΚΤΕΙΝΟΝΤΑΙ ΠΕΡΑΝ ΤΗΣ
ΠΑΡΟΥΣΑΣ ΡΗΤΗΣ ΕΓΓΥΗΣΗΣ ΚΑΙ Η
BECKMAN COULTER ΑΠΟΠΟΙΕΙΤΑΙ
ΟΠΟΙΑΔΗΠΟΤΕ ΣΙΩΠΗΡΗ ΕΓΓΥΗΣΗ
ΕΜΠΟΡΕΥΣΙΜΟΤΗΤΑΣ Ή ΕΓΓΥΗΣΗ
ΚΑΤΑΛΛΗΛΟΤΗΤΑΣ ΓΙΑ ΕΝΑ ΣΥΓΚΕΚΡΙΜΕΝΟ
ΣΚΟΠΟ. Η μοναδική υποχρέωση της Beckman
Coulter και η αποκλειστική μέθοδος
αποκατάστασης του αγοραστή για τυχόν
παραβίαση της παρούσας εγγύησης θα είναι,
κατά την επιλογή της Beckman Coulter η
επιδιόρθωση ή η αντικατάσταση των
προϊόντων. Σε καμία περίπτωση η Beckman
Coulter δεν θα είναι υπεύθυνη για τυχόν άμεσες,
τυχαίες ή παρεπόμενες ζημίες σε σχέση με τα
προϊόντα.
7-5
Beckman Coulter, the stylized logo, and MicroScan, autoSCAN, WalkAway, and RENOK are trademarks of
Beckman Coulter, Inc. Beckman Coulter and the stylized logo are registered with the USPTO.

Made in USA
Beckman Coulter, Inc. Beckman Coulter Eurocenter S.A.
250 S. Kraemer Blvd. 22, rue Juste-Olivier.
Brea, CA 92821 United States Case Postale 1044
www.beckmancoulter.com CH – 1260 Nyon 1, Switzerland
Tel: +41 (0) 22 365 36 11
03/2015

© 2015 Beckman Coulter, Inc.

All Rights Reserved.

Spec: 3240-2855 7-6 3251-3000A