BACILLES A GRAM POSITIF SPOROGENES

FAMILLE DES BACILLACEAE

GENRE BACILLUS
Cours d’introduction aux TP de microbiologie

Famille: les Bacillaceae sont de gros bacilles à Gram positif (parfois faible),
généralement mobiles (ciliature péritriche), parfois immobiles et capables de
sporuler.
Genre : un genre, le genre Bacillus. Les bactéries sont aérobies stricts ou
facultatives, généralement catalase + et faciles à cultiver.

Parmi les différentes espèces bactériennes constituant le genre Bacillus, quelques

unes sont connues pour leur pathogénicité dans diverses maladies (maladie du
Charbon, toxi-infections alimentaires) mais d’autres, plus discrètes, ont un grand
intérêt pour les industriels au niveau des biotechnologies.
HABITAT ET POUVOIR PATHOGÈNE

Ils sont présents dans la nature et l’environnement des humains et des animaux. La
plupart d’entre eux sécrètent des enzymes exo-cellulaires hydrolysant des
macromolécules (protéases, amylases etc … voir cours de microbiologie industrielle
et TP de microbiologie). De ce fait, ils jouent un rôle important dans la minéralisation
de la matière organique (cycles biologiques).
Une minorité d’espèces est pathogène pour l’Homme et les animaux. B. anthracis
est une bactérie à pouvoir pathogène strict (BPS). B. cereus est responsable de
toxi-infections alimentaires collectives (TIAC) et d’autres espèces sont des
pathogènes opportunistes (BPO) chez les sujets immunodéficients.
1.1 Bacillus : BPS
Bacillus anthracis (BPS) ou bactéridie charbonneuse (bacille de Davaine) est une
bactérie très pathogène, responsable de la fièvre charbonneuse mortelle chez les
animaux et du charbon bactérien chez l’humain. Trois formes d’atteintes peuvent être
rencontrées avec une gravité variable. Voir annexe 1

Bacillus cereus (BPS intestinale aéro-anaérobie) : il peut entraîner des

d’intoxications alimentaires.
Il est à l’origine de contaminations alimentaires dont il est difficile de se débarrasser
et peut poser des problèmes en industrie laitière ; on le recherche dans les
conserves où il peut persister sous forme de spores quand elles sont mal stérilisées.
Dans ce cas il ne produit pas de gaz mais peut modifier le goût des conserves.
Il produit 2 toxines :
 la vomitoxine : émétique, thermostable, l’aliment incriminé est le riz ; les
symptômes (vomissements, nausées) apparaissent rapidement (1 à 5 h) ; la
mise en culture des vomissements montre beaucoup de Bacillus cereus (toxi-
infection).
 une entérotoxine nécrosante thermolabile causant des diarrhées : les aliments
responsables sont variés (bouillons, viandes, légumes cuits, produits laitiers) ;
les symptômes (diarrhée) sont plus tardifs (8 à 16 h); la coproculture révèle
peu de Bacillus cereus (intoxination?).

** Prophylaxie des TIAC à Bacillus

Conserves suffisamment stérilisées de manière à réduire les spores
Eviter la rupture de la chaîne du froid (pour empêcher la germination des spores et
la production de toxines dans les aliments).
Les TIA sont plus souvent des intoxinations (ingestion de la seule toxine qui se
trouve dans l’aliment) que des toxi-infections alimentaires (pathologies causées par
la multiplication intestinale du germe et libération de ses toxines dans l’intestin).

1.2 Bacillus : BPO :

Dans ce cas, les Bacillus deviennent pathogènes en cas de contamination par
effraction sur certains « terrains » : traumatismes chez les consommateurs de
drogues, blessures à l’œil, sujets immuno-déprimés.

1.3 Les Bacillus saprophytes

Bactéries ubiquitaires, saprophytes normales du sol et de l’air. Leurs spores leur
permettent de résister très longtemps (quelques dizaines d’années par exemple)
dans des conditions défavorables. Il existe de nombreuses espèces qui sécrètent
des enzymes exocellulaires hydrolysant des macromolécules. Elles jouent un rôle
important dans la minéralisation de la matière organique.

ETUDE SYSTEMATIQUE DES BACILLUS

1.4 Morpholgie

Grands bacilles (3 à 9 µm / 0,6 à 1 µm),

isolés, en diplobacille ou en chaînettes,
à faces parallèles et extrémités
coupées nettes ( bouts carrés )
Gram positif, parfois faible ;
capables de sporuler
Immobiles ( Bacillus anthracis )
ou mobiles ( autres Bacillus).
Bacillus anthracis est capsulé dans les
produits pathologiques.

Il est nécessaire de réaliser une coloration de spores. Rappel du principe : voir

cours de TS1.
L’endospore présente des enveloppes très déshydratées, épaisses et imperméables
aux colorants. La coloration à chaud au vert de malachite permet de provoquer un
choc thermique qui dénature en partie les tuniques ce qui permet la pénétration du
colorant.
Les caractères de la spore permettent de distinguer trois groupes selon la
forme et la position de celle-ci.

groupe 1 groupe 2 groupe 3

Ovale ou ronde non déformante ovoïde, centrale déformante, ronde terminale à
déformante centrale ou ou terminale subterminale
subterminale

Bacillus anthracis correspond à la description du groupe 1

PRÉLÈVEMENTS
Animal : sang, salive, viscères (si suspicion de charbon animal)
Homme :
hémoculture (sang) , pustule , prélèvement d’œil …
selles, vomissures ou produits alimentaires dans le cas de B. cereus.
Suspensions de spores non identifiées

**Annexe « médicale » mise à jour en octobre 2001

Renseignements provenant de sites Internet
Si les renseignements cliniques évoquent la maladie du charbon ce type de prélèvement doit
toujours être manipulé sous PSM et avec des gants et un masque ; ainsi que les cultures de
Bacillus. Les spores sont très volatiles.
Si suspicion de B. anthracis communiquer ce 1er résultat au médecin par téléphone pour une
antibiothérapie de 1ère intention, puis recherche de pouvoir pathogène expérimental (PPE)
sur un cobaye (scarification avec la souche puis pansement très protecteur pour éviter la
dissémination de spores). Il meurt de septicémie en 48 h.

CARACTERES CULTURAUX.

• Tous les Bacillus se développent bien sur tous milieux usuels non sélectifs.
• L’observation de l’hémolyse se fait sur gélose au sang (remarque : les Bacillus ne
cultivent pas sur gélose au sang ANC).
• La température optimale dépend des espèces.
A noter ici l’intérêt en microbiologie alimentaire des Bacillus thermophiles
qui se développent très rapidement (2h30 pour obtenir une culture visible) à
des températures où les autres germes sont inhibés (exemple : 55°C) ; ces
propriétés sont exploitées pour la recherche d’antibiotiques dans le lait. La
variété de Bacillus utilisée étant en plus sensible à de nombreux antibiotiques.
• Ils sont aérobies stricts ou facultatifs selon les espèces.
• En bouillon : on observe un trouble floconneux avec un voile en surface ou des
flocons qui sédimentent laissant le bouillon limpide dans le cas de B. anthracis.
• Sur gélose : les colonies sont volumineuses, plates, opaques, à surface
chagrinée, à bords légèrement dentelés, de type R (exceptions : colonies S).
CARACTERES BIOCHIMIQUES ET IDENTIFICATION :

Du genre Bacillus :
catalase + ; oxydase –

Du groupe :
selon la forme et la position de la spore

Différenciation de l’espèce : cf. tableau et milieux en annexe.

Recherche d’enzymes exocellulaires actives sur des macromolécules :

• lécithinase : gélose à l’œuf (voir fiche)

• amylases : gélose à l’amidon (voir fiche)
• caséinase : gélose au lait (voir fiche)

Les ensemencements se font par spot ou en touches denses afin de pouvoir

observer l’action des exoenzymes diffusibles dans le milieu (attention : éviter de
couler des géloses trop épaisses)

Autres caractères : voir un tableau d’identification « classique »

Galeries miniaturisées par exemple la galerie API 50 CH Bacillus . Il s’agit de

grandes plaques de 50 cupules présentant un auxanogramme du carbone ( étude de
l »assimilation de nombreux glucides dans un milieu adapté ).

Milieux d’isolement spécifique de Bacillus cereus en microbiologie alimentaire :

milieu de MOSSEL (voir fiche)

Galerie type Bacillus

Mise en évidence de la catalase

Mise en évidence de la nitrate réductase

Mise en évidence de l'uréase

Hydrolyse de la caséine

Hydrolyse de la lécithine

Hydrolyse de l'amidon

Dégradation de nombreux glucides (en milieu semi - synthétique)

Production d'AMC (acétoïne) et parfois d'indole

Etude des possibilités métaboliques à diverses températures.

UTILISATION EN BIOTECHNOLOGIE :
(Voir cours de microbiologie industrielle)

Les Bacillus ont un grand intérêt industriel. Leurs utilisations sont très variées.

• Production d’ antibiotiques :
Gramicidine par B. brevis ;
Bacitracine par B. subtilis ;
Polylixine B par B. polymyxa.

• Production d’’enzymes industrielles :

amylases dans l’industrie du pain ;
protéase et cellulase dans l’industrie des détergents.

• Bacillus thuringiensis et la production d’insecticide. Lors de sa

sporulation, il produit une inclusion parasporale protéique. Son contenu se
comporte comme un véritable insecticide biologique (toxine Bt) ; il semble
qu’aucune toxicité n’est connue vis-à-vis d’espèces autres que les insectes
sensibles (utilisé sous forme de poudre à disperser ou sous forme de
« briquettes flottantes » sur l’eau).
Aujourd’hui, les produits Bt font partie des insecticides biologiques les plus
couramment utilisés. Ils sont fabriqués à une échelle industrielle dans des
fermenteurs et sont mêmes autorisés dans l’agriculture biologique.

Remarques : Par génie génétique, des chercheurs ont implantés un gène de B.

thuringiensis dans des plants de maïs ainsi ils peuvent produire eux mêmes un
poison Bt contre les larves de la pyrale (insecte détruisant des champs entiers de
maïs).

• Production d’acide lactique pour fabriquer du plastique biodégradable.

Extrait : une sucrerie veut fabriquer du plastique avec des betteraves.

« On remplace le pétrole par des betteraves sucrières pour fabriquer des emballages
alimentaires ou des bâches agricoles en plastique biodégradable ». La recherche de
nouveaux débouchés se met au service de l'environnement.

Un procédé de fermentation a été mis au point avec l'aide d'une nouvelle bactérie,
Bacillus thermoamylovorans, elle permet de transformer le glucose, l'un des
principaux composants du sucre, en acide lactique (en condition chaude à +55°C).
Les molécules d'acide lactique sont ensuite polymérisées, par un processus
chimique, pour former une matière plastique biodégradable, le PLA (polyacides
lactiques). La matière plastique formée est biodégradable dans l’environnement et
bio-assimilable par des organismes vivants (exemples d’utilisation envisagées :
emballages pour l'industrie alimentaire, bâches agricoles, liens pour les bottes de
paille).
 Annexe 1

**Annexe « médicale » mise à jour en octobre 2001 : à titre documentaire

Les trois formes d’atteintes par B. anthracis :

• L’anthrax : (guérissable si antibiothérapie précoce) : l’Homme peut-être contaminé
par contact avec des animaux malades, des cadavres, ou des produits d’origine
animale (peaux, laine,...). Les spores persistent des décennies dans le sol et,
consommées par des herbivores, elles pourront se développer dans leur système
lymphatique. Par ailleurs des spores en contact avec la peau présentant une petite
lésion peuvent être à l’origine de l’anthrax chez l’Homme. Il n’y a pas de cas de
contamination par voie alimentaire, la seule porte d’entrée étant la voie cutanée
( entraînant des pustules noirâtres, entourées d’une couronne de vésicules,
accompagnées d’oedème, pouvant évoluer en septicémie).
• Le « charbon pulmonaire » : gravissime et presque toujours mortel (par toxémie)
• Le « charbon intestinal » : gravissime et presque toujours mortel (par toxémie)
Une capsule est responsable du pouvoir invasif dans les ganglions, la rate, le sang.
2 exotoxines
• une protéine responsable causant un œdème au niveau du foyer infectieux
• une protéine rendant le sang noirâtre et incoagulable donnant un aspect « cuit » aux
organes atteints : elle est létale

**Prophylaxie de la maladie du Charbon ( à titre documentaire et sous réserve

d’actualisation):
Transport obligatoire des cadavres d’herbivores dans les centres d’équarrissage et
incinération des cadavres morts de maladie.
Ne pas fabriquer d’aliments pour bétail à partir de farines de viandes et d’os importés
Ne jamais labourer, ne jamais faire paître des herbivores sur des terrains ayant servi de
cimetière pour animaux car les spores peuvent rester viables très longtemps et les vers de
terre peuvent les faire remonter à la surface
Vaccination annuelle des herbivores (vaccin vivant atténué mais peu protecteur).