Cabinas Seguridad Biolgicacualificacin

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Cabinas de Seguridad Biológica: cualificación
Conference Paper · March 2017
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1 author:
Javier Garcia Palomo

Banco Nacional de ADN Carlos III
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CURSO TEÓRICO DE FORMACIÓN
ESPECIALIZADA EN BIOSEGURIDAD
Y BIOCONTENCIÓN
(Universidad de País Vasco, marzo 2017)
CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA

Parte II: Cualificación
Ponente: F. Javier García Palomo

Responsable del Área de Biocontención de nivel III del Banco Nacional de
ADN Carlos III
CURSO TEÓRICO DE FORMACIÓN ESPECIALIZADA
EN BIOSEGURIDAD Y BIOCONTENCIÓN
Uso, mantenimiento y revisión de

Cabinas de Seguridad Biológica (CSB)
Ficha de mantenimiento de CSB:

• Fecha de instalación.
• Horas de funcionamiento (*)
• Presión de trabajo en mm de columna de agua (*)
• Velocidad de aire en m/s (*)
• Docs de revisiones realizadas
• Registro de averías, incidencias, reparaciones,…
Además, en pegatina sobre el frente:

• Fecha de sustitución de filtro HEPA.
• Fecha de sustitución del pre-filtro.
• Fecha de la próxima revisión aconsejada
(*) Muchas cabinas disponen de esa información también en cuadro de control

Uso, mantenimiento y revisión de

Revisión de CSB
- Cuando se instalan.
- A intervalos regulares,
según programa de trabajo
- Cuando se trasladan de
sitio.
Normas aplicables a la certificación y validación

• NSF49. Biosafety Cabinetry certification
• UNE-EN 1822. Filtros absolutos (HEPA y ULPA). Clasificación,
ensayo y marcado.
• EN-12469. Criterios de funcionamiento para las cabinas de
seguridad biológica. Con referencias a:
o EN 12296. Biotecnología – Equipación – Guía para el procedimiento de
testado de limpiabilidad
testado de esterilizabilidad.
testado de estanqueidad
o EN-13091. Biotecnología – Criterios de comportamiento para elementos
de filtración y cajas de filtración.
• ISO 14644. Conjunto de normas sobre control de contaminación en
salas blancas
CUALIFICACIÓN DE CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA.
Norma EN12469:2000
Tipos de pruebas utilizados en la Norma

Norma EN12469:2000
Mantenimiento de barrera
Pruebas de direccionales de humo
Prueba visual de los patrones de

flujo vertical y “cortina” de
protección
https://www.youtube.com/watc
h?v=hEKxfWkD3Z0
Norma EN12469:2000
Comprobación de velocidad de flujo
Con anemómetro calibrado se mide:

FLUJO DESCENDENTE (0,4 m/s)
FLUJO ENTRANTE (caudal entrante)
FLUJO A TRAVES DE FILTROS DE ENTRADA
(para conducto de evacuación informativo, salvo Clase III )
Se deben cumplir las especificaciones del fabricante
CUALIFICACIÓN DE CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA
Norma EN12469:2000
Prueba KI (Protección de operador)
Se micronebuliza, en condiciones
específicas, 20ml de solucion KI dentro de
la cabina y se miden y cuentan las
partículas que salen a través del flujo
laminar hacia fuera de la CSB mediante
discos de impacto montados en aspirador
Índice de
Descripción
estanqueidad (LI)
LI-A N/A
LI-B Fuga detectada

Fuga detectada, con valores inferiores a
LI-C 62 puntos/disco
(<1 :10000 partículas)
Pruebas de efectividad de filtros
EN14644-3, test DOP (Dispersed Oil Particle)

Se micronebuliza, en condiciones específicas, una solución de
partículas sobre el filtro, “aguas arriba” y se mide la cantidad
de ellas (y el tamaño) que consiguen atravesarlo.
Productos utilizados
• DEHS (DOS), líquido, Dietil-hexil sebacato
• DOP, liquido, Di-octil phthalato
• Emery 3004 (PAO), Poli-Alfa Olefina
• PSL (Poly-styrene), esferas de látex
• Shell Ondina EL, aceite mineral
• Total Finaveston A80B, aceite mineral
Inferior a 0,01% para partículas 0,3µm

Pruebas de integridad de filtros
EN14644-3
Para comprobar estanqueidad de filtro, se mueve el
detector por el perímetro de ajuste del filtro,
comprobando que las lecturas del medidor se mantienen en
todos los puntos
Pruebas de integridad de filtros
Elección de medidores de partículas
Contador de partículas (Digital) Contador de partículas (analógico)

Para filtros eficiencia>99,995% Para filtros eficiencia<99,995%
Sirve para cualquier aerosol (0,1-5µm) No sirve para cualquier aerosol
Muy sensible: 0,000001% Sensibilidad 100-0,001%
Cuantifica MPPS Bueno y rápido para estanqueidad
Peor para estanqueidad (se satura)
Calidad del aire interior
(según EN14644-1:2010)
Pruebas de colmatación de filtros
• Se mide la caída de presión que

produce el filtro a la velocidad
típica de funcionamiento
• Se estima que el doble de caída
de la nominal del filtro es la
regla para realizar el cambio de
filtro.
• P.ej., si el Vn=100Pa, el valor
límite serán 200Pa para asumir el
final de vida
Pruebas de estanqueidad de carcasa, juntas, …
En fábrica: Se sella la entrada y la

expulsión y se presuriza el plenum a 250Pa.
Mediante el pintado con una solución
jabonosa (12g/l), se comprueban todas las
uniones, juntas, soldaduras, grifos, del
exterior de la cabina.
Para NSF: la presión no puede caer más de un
10% en 10min. a 500Pa.
In situ: Después de la instalación o

cualquier reubicación (solo en
funcionamiento)
Pruebas de ensayo microbiológico de protección de
producto
La cabina se somete a test mediante el rociado de una concentración
específica de microorganimos (B. subtilis) para determinar el grado
de confinamiento, de protección al operador y frente a la
contaminación cruzada que ofrece la cabina.
El criterio de aceptación
≤10CFU para ensayo con operador, ≤5CFU en ausencia de turbulencia
para protección de producto (=LI-C)
Pruebas de ensayo microbiológico de contaminación
cruzada
Contaminación cruzada
≤2CFU (=LI-C)
Nebulizador solución
biológica
Placa muestreo
(peptona)
Pruebas de limpiabilidad
La cabina se somete a test mediante la impregnación
con leche en superficies y ángulos de aparente
difícil limpieza.
Una vez impregnada, se procede a limpieza con agua y
jabón, y posterior aclarado con alcohol.
Con metodología aséptica, se toman muestras mediante
el kit “HY-RISE®, VWR” (o similar) y se revelan para
presencia de NAD, NADH (cualitativa)
Esterilización por vía aérea: métodos de validación

Reto biológico
• Debe demostrarse la efectividad del método mediante un
bioindicador (BI), (tubos o tiras) con un contenido de esporas de un
organismo resistente (típicamente G. Stearothermophilus o B.
atrophaeus): método cuantitativo.
• Pueden utilizarse Indicadores químicos (cualitativos) específicos
(presencia/ausencia de exposición a agente desinfectante)
EN 12469: reducción logarítmica de la contaminación
4log = clase SI-B, al menos para clase II
6log = clase SI-C
Esterilización por vía aérea: métodos de validación
Ubicación BI (según NSF49), al

menos:
• Dos en el centro de la
superficie del filtro de
salida (zona limpia) y otros
dos cerca de los bordes de
ese filtro, zona sucia
• Dos en la zona contaminada
del plenum (bajo rejillas,
atrás)
• Dos sobre la superficie de
trabajo
• Dos en el centro del filtro
de impulsión, en zona sucia.
• No olvidar un control fuera
de cabina
VIDEOS
Limpieza
Limpieza https://www.youtube.com/watch?v=PCd5CYN
GU6g
Alcohol vs. https://www.youtube.com/watch?v=NgQxOwc

isopropanol OXE0
https://www.youtube.com/watch?v=4St9yxL-
Derrames crw&list=PLDK2bNfiGV_d3h7Xgc2SNedYPcvi9y
fKN
https://www.youtube.com/watch?v=dAOTg-
Errores 3ev-w
ASOCIACIÓN ESPAÑOLA DE BIOSEGURIDAD
2º CONGRESO NACIONAL DE BIOSEGURIDAD Y BIOCONTENCIÓN (2014)
Bibliografía
• Buie, J. “Evolution of biological safety cabinets”.2011. www.labmanager.com

• https://www.uclm.es/servicios/prevencion/documentacion/nanoPRL/2016-04-14_Jornada%20NanoPrevencion_Javier_Ruiz.pdf
• http://www.globalspec.com/learnmore/manufacturing_process_equipment/filtration_separation_products/hepa_filters_ulpa_filters.
• Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 5th Edition. 2011 . Centers for Disease Control and Prevention . National
Institutes of Health (USA). Appendix A – Primary Containment for Biohazards: Selection, Installation and Use of Biological Safety
Cabinets
• http://www.escoglobal.com/resources/pdf/biosafety-booklet.pdf.
• Lin Xiang Qian. “Comparison between EN12469:2000 and ANSI/NSF49:2002 standards” . Technical paper (2002).
www.escoblobal.com.
• Brian Garrett.“The good, the bad and the ugly of UV light usage in a Class II BSC”. 2016. www.labconco.com/news/2-uv-lamp-rules.
• Burgener, j. “Position paper on the Use of UV light in BSC”. 2006. Applied Biosafety, 11(4), 228-230.
• The Baker Company Blog. http://info.bakerco.com/blog
• https://www.slideshare.net/KatieBrown/clean-air-experts
• http://golighthouse.nl/sites/default/files/Lighthouse%20Filter%20Test%20Brochure%20V3.pdf
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Ponente: F. Javier García Palomo

Uso, mantenimiento y revisión de

Ficha de mantenimiento de CSB:

Además, en pegatina sobre el frente:

(*) Muchas cabinas disponen de esa información también en cuadro de control

Uso, mantenimiento y revisión de

Normas aplicables a la certificación y validación

Tipos de pruebas utilizados en la Norma

Prueba visual de los patrones de

Con anemómetro calibrado se mide:

LI-B Fuga detectada

EN14644-3, test DOP (Dispersed Oil Particle)

Inferior a 0,01% para partículas 0,3µm

Contador de partículas (Digital) Contador de partículas (analógico)

• Se mide la caída de presión que

En fábrica: Se sella la entrada y la

In situ: Después de la instalación o

Esterilización por vía aérea: métodos de validación

Esterilización por vía aérea: métodos de validación

Ubicación BI (según NSF49), al

Alcohol vs. https://www.youtube.com/watch?v=NgQxOwc

• Buie, J. “Evolution of biological safety cabinets”.2011. www.labmanager.com

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