FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

PROCESO DE DISEÑO CURRICULAR

GUÍA E INFORME DE LABORATORIO
BIOLOGÍA CELULAR
Código: FCQ-P05-F05; Versión: 01: 15 de enero de 2017

1.1 PRACTICA N° 8
1.2 UNIDAD CURRICULAR No. 3
MITOCONDRIAS.- RESPIRACION CELULAR

1.3 TITULO: RESPIRACION CELULAR

1.4 OBJETIVOS:

1.5 FUNDAMENTO TEORICO

1.6 PARTE EXPERIMENTAL

1.6.1 INSTRUCCIONES PREVIAS:

-Tenga cuidado de utilizar la pipeta correspondiente para cada solución y de no confundirlas, de hacerlo,
se alterará la concentración de las soluciones.
- Etiquete debidamente los portaobjetos para evitar confusiones en sus observaciones y resultados.
- Evite la desecación de sus preparaciones

1.6.2 MATERIALES Y REACTIVOS

Equipos reactivos materiales

Solución de hidróxido de sodio al Bureta graduada
0,04 %
Solución de fenolftaleína 3 Erlenmeyer con tapón
biperforado
Solución de hidróxido de sodio Tubos de vidrio
2 Vasos de precipitación Sorbetes
graduados en mL
Ca (OH)2 Agua
suero fisiológico 6 vaso de precipitación
1 ratón

1.6.3 PROCEDIMIENTO

1.6.3.1 DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE LA PRESENCIA DE CO2 EN

EL AIRE EXHALADO.

 Ponga Ca (OH)2 en el Erlenmeyer y tápelo.

 Inspire durante un minuto por el tubo corto, observe si se produce algún cambio y en caso de haberlo
explique a qué se debe.
 Sople durante un minuto por el tubo largo. Observe si hay algún cambio en el líquido, determine a
qué se debe.

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 Escriba la ecuación respectiva.

1.6.3.2 DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LAS MOLÉCULAS DE CO2

EXHALADAS EN UN MINUTO.

 Ponga 100 mL. de agua en cada vaso de precipitación.

 Añada 2 gotas de fenolftaleína en cada vaso y mezcle con el agitador.
 Observe si se produce algún cambio de coloración. Anote por qué?
 Añada gota a gota el NaOH de la bureta, hasta obtener una ligera coloración rosada que se
mantenga estable por un minuto.
 Separe 1 vaso y déjelo como testigo hasta el final de la experiencia.
 Expire normalmente por 1 minuto por el sorbete en la solución del vaso.
 Analice a qué se debe el cambio de color. Escriba la ecuación respectiva.
 Añade nuevamente gota a gota NaOH sobre la solución del vaso, agitándolo constantemente y
continúe agregando hasta obtener el color rosado del vaso testigo y que se mantenga estable por 1
minuto. Escriba la ecuación respectiva.
 Anote el número de mL. de NaOH empleados y múltiplique por 10, así obtendrá el número de
moléculas de CO2 exhaladas en un minuto.

* Repita la experiencia anterior con la participación de estudiantes que hayan hecho un ejercicio
vigoroso unos 5 minutos antes de la prueba.

1.6.3.3 Respiración aeróbica Cambio de coloración del indicador azul de bromotimol, por cambio
de pH. Al exhalar CO2
 En tres erlenmeyers colocar 100mL de Agua destilada, añadir una gota de azul de bromotimol al
0,1% rotular 1, 2 ,3.
 En el erlenmeyer 1, exhala por medio de un sorbete un alumno en condición de reposo, midiendo la
frecuencia respiratoria, medir el tiempo en el que cambia la coloración.
 En el erlenmeyer 2, exhala por medio de un sorbete un alumno que ha realizado ejercicios
moderados, se mide la frecuencia respiratoria y el tiempo en el que cambia la coloración.
 En el erlenmeyer 3, exhala por medio de un sorbete un alumno que ha realizado ejercicios severos,
se mide la frecuencia respiratoria y el tiempo en el que cambia la coloración.

Ejercicio físico Pulsaciones por minuto Tiempo en segundos

hasta viraje del
indicador
Reposo
moderada
severo

1.6.3.4 Respiración aeróbica: determinación de la enzima succinato

deshidrogenasa en el ciclo de Krebs

La enzima succinato deshidrogenasa o deshidrogenasa del ácido succínico es una Oxidorreductasa que
cataliza la oxidación del succinato para formar fumarato siendo la coenzima el FAD. Esta enzima se localiza
en eucariontes en la membrana mitocondrial interna. El H2 cedido por el succinato puede ser transferido del
FADH2 a un colorante susceptible como el azul de metileno que al cambiar su estado redox pasa de
coloreado a incoloro o viceversa.
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EN CELULAS ANIMALES
La enzima se obtiene del hígado o músculo de ratón, recién sacrificado.
 ácido succínico al 2% en solución buffer a pH 7.4. (sustrato)
 En un mortero triturar 1,5g de hígado o músculo de ratón recién sacrificado, utilizando arena de
vidrio para romper las células y sus organelos. Añadir 3mL de suero fisiológico (enzima nativa)

Reactivo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Enzima nativa 1mL 1mL 1mL

Fenol al 10% …... 5gotas …...

Hacer hervir …... …... 10 min en baño

María
Azul de metileno 1gota 1gota 1gota
Sustrato a pH 7,4 4mL 4mL 4mL
Mezclar, el contenido
Aceite 1mL 1mL 1mL
Dejar 10 minutos a 37°C en baño María. Observar los resultados y concluir.
EN CELULAS VEGETALES

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Reactivo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Enzima nativa, célula vegetal 1mL 1mL 1mL

Fenol al 10% …... 5gotas …...

Hacer hervir …... …... 10 min en baño

María
Azul de metileno 1gota 1gota 1gota
Sustrato a pH 7,4 4mL 4mL 4mL
Mezclar, el contenido
Aceite 1mL 1mL 1mL

 Dejar 10 minutos a 37°C en baño María,

 observar los resultados y concluir.
Azul de metileno.- Tiene la función de ser el aceptor de hidrogeniones del complejo succinato-FADH2
Ácido Succinico.- sustrato del que se desprende H2 que reduce al azul de metileno,
Aceite .- Tiene la función de aislar el tubo del aire del ambiente y así prevenir la oxidación temprana del
FADH2.
Fenol.- Inhibe la actividad de las enzimas ya que desnaturaliza las proteínas.

Precursor/es Enzima / Proceso Producto/s Ciclo

Succinato succinato Fumarato , FADH2 ciclo de Krebs

deshidrogenasa, FAD

1.7 RESULTADOS
- Observar y registrar resultados.
- Elaborar un cuadro con los datos obtenidos en estado de reposo y después del ejercicio
físico.

Grupo N° de moléculas N° de moléculas de CO2

de CO2 Ejercicio
Reposo

Promedio: Promedio:

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1.8 DISCUSION DE RESULTADOS

Con base en los resultados obtenidos y tomando como guía los siguientes enunciados, redacte la discusión
de la práctica:

-.Explique los resultados obtenidos en cuanto a producción de CO2 en cada una de las
Muestras

1.9 CONCLUSIONES

 Con base en sus resultados obtenidos y discusión, indique cuáles serían las conclusiones de
esta práctica.

1.10 CUESTIONARIO
 1. ¿Cuál es la función principal del aparato respiratorio humano?
 2. ¿Qué relación hay entre la frecuencia respiratoria y el ritmo cardiaco?
 3. ¿Qué relación existe entre el aparato respiratorio pulmonar del ser humano y la respiración de las
células?
 4. ¿De dónde proviene el C02 que se produce durante la respiración?
 5. ¿Qué tipo de fermentaciones conoce?
 6. ¿Aplicaciones de la fermentación en la industria?

1.11 BIBLIOGRAFIA
- http:// biologíadelcelula.files.wordpress.com/2009/05/pared-celular.pdf

- Karp, G. 2009. Biología celular y molecular: conceptos y experimentos. McGraw-Hill/Interamericana.

México.
- Willey,J.(2004). Bioquímica.Uruguay.Editorial Panamericana.
- Lodish, H., Beerk, A., Zipursky, L., Matsudaira, P., Baltimore, D., Darnell, J. 2002.
Biología Celular y Molecular. Médica Panamericana. México