LABORATORIO MICROBIOLOGIA:

Deteccion Directa en Indirecta:

 Directa: Es porque el MOO esta presente o parte de el.
 Indirecta: Es porque estan presentes ciertos mecanismos como proteinas y AC que produce el agente sobre el cuerpo.

Directa:
 Examen en Fresco: No necesita fijacion, se le pone solucion salina esteril si es semi solido o para que no se seque y luego se cubre,
el examen en fresco es esencial para movilidad  en vagina, es con especulo, con excepcion de las virgenes.
 Microscopio: Es en 10 y 40X en 100X no porque la presion bota la muestra y es riesgo biologico  en vagina se ven celulas
epiteliales, bacterias, leucocitos (deben haber pero poquitos).
 Coloracion:
o Simple: Azul de metileno, morfologia y agrupacion.
o Diferencial: Gram, Ziehl Neelsen  en Gram se ve morfologia, agrupacion (fundamental para coco) y afinidad tintorial. Ejemplo
coco gram positivo en cumulos, diplococos o cocos en parejas gram positivos).
Ziehl Neelsen son para mico bacterias, bacilos acido alcohol reistentes  fuccina se colorea rojo, lo demas mo se echa azul de
metileno.
o Estructural: Esporas Wirtz-Conklin (WC)  se ve espora verde y soma rosado.
o Campo Oscuro: Contraste en donde se ve con luz el MOO y el fondo negro. Se usa para ciertos MOO como espirilos
(leptospirs, treponems y borrelia) sifilis primaria donde la lesion es chancro sifilitico.

 Deteccion de AG: MOO completo y vivo o partes de uno muerto.

Los mejores son proteinas, es necesrio el uso de ac comerciales monoclonales.
 Prueba de Latex: AC contra difernetes bacterias en placa negra se pone muestra con AG diferente para ver la presencia de ls
bacteria, la revelo con ELISA y aglutinacion.
 Inmunofouorescencia: AG en la muestra le doy AC con fluorocromo, veo el microscopio con fluorsencia  chlamidya uretritis no
gonococcica.
 Inumodifusion: Hongos, tenemos en una caja agarosa, dejamos que se gelifique, le hacemos huecos que sirven para poner un AC
que conozco en la mitad y AG al rededor con control negativo y positivo. El AC y las muestras se difunde y cusndo el AG se une con
AC se precipita.

 Cultivo: Crecimiento para identificarlo y hacer el antibiograma.

 Deteccion Acidos Nucleicos: Con tratamiento baja la probabilidad de que MOO esten vivos.

 Deteccion de Proteinas: Las que libera el MOO  electroforesis de proteina (separa por peso y punto isoelectrico), western blot o
inmunoblot (inicia con electrofresis de proteinas se pasa a papel de nitrocelulosa que tiene proteinas que despues reacciona con AC,
VIH, cisticercosis).

Indirecto:

 Deteccion de AC: Serologia, AG concocidos del laboratorio, con el paciente determino AC para saber si hubo contacto con AG, que
tanta respuesta tuvo, enfermedad activa o pasiva (IGM reciente IGG pasada)  ELISA, inmunoblot, inmunodifusion.
 Deteccion de Celulas: Generalmente incluye macrofagos, monocitos, linfocitos, CPA a ver si ya fueron señalizadas por MOO.
 Deteccion de Citoquinas: INF gama para viral, IL1, 6 y FNT es infeccion, moleculas de ashesion (CD).
 Diganostico Microbilogico:
1. Toma de muesta.
2. Observacion microscopica, no siempre se hace.
3. Cultivo hay que saber cuales no crecen treponema pallidus,mycobacterium lepra.
4. ID agente etiologico.
5. Prueba de sensibilidad a los AB, unos no se les hace porque el tratamiento sigue funcionando perfectamente como
treponema pallidus y penicilina, S. aureus siempre y enterobacterias, pseudomonas aeuruginosa.
6. Informe final de laboratorio de microbiologia.
Reaccion leucocitaria con PMG y gram.

Reaccion leucocitaria con Wright o Giemsa.

Pruebas de Suceptibilidad:
Moo aislado e ID, sino esta puro no van a haber errores.
1. Seleccionar colonia pura, se crea a partir de una sola celula.
2. Se hace susoension en medio liquido para tener csntidad spropisda de moo, si hay muchos hay falsa resitencia, y pocos falsa
suceptibilidad.
3. Pongo sobre agar esteril.
4. Pongo discos de AB.
5. Incubo a 37 por 24 H.
 6. Mido halo de inhibicion de crecimeinto.
7. Voy a tablas para ver los mm.

Lab identificación gram -

En coloración gram linfocitos se llama reacción leucocitaria, no siempre habla de infxn, solo de infl
En gram no se dice si son estafilococos o estreptococos
Gram - son:
 Cocos: son aislados o en diplococos→ que tiene forma planada en forma de café. Se mira si están intra o extracell de las
cell sanguíneas como de PMNN
 Bacilos: son barras alargadas, pueden ser tipo
o entérico→ indica que son más gordos que con frecuencias corresponden a enterobacterias
o Delgados: son de gram - no fermentadores
 Cocobacilos: son bacilos cortos o cocos alargados

DIPLOCOCOS GRAM -
Neisseria:
 Meningitis: intracell y a veces extra. Produce mengitis, bacteremia, sepsis. Pierde viabilidad si muestra permanece
refigerada
 Gonorrhoeae: intracell

Pruebas
1. prueba de oxidasa
 Citocromo oxidas: con reactivo se pone de color morado el papel. Si no cambia de color es negativo (Neisseria da +)
2. Producción de DNAasa: enz que degrada DNA con medio que tiene DNA. Si bacteria tiene DNAasa se forma un halo y se
dice que es +. (Moraxella catarrhalis da +)
3. Fermentación de azúcares: Cambio de pH al acido, y se cambia color a amarillo, si no hay fermentación el medio
permanece alcalino y es rojo. Neisseria meningitis fermenta glucosa y maltosa. La gonorrea fermenta solo glucosa

Moraxella: es extracell. Asociado con infecciones de tracto resp sup e inferior

 Superior: otitis, sinusitis
 Inferior: neumonía
Pruebas:
No fermenta carbh→ ninguno

Son Mesófilos y requieren medios enriquecido que son agar chocolate o sangre. Las colonias son puntiformes y brillantes

COCOBACILOS
Haemophilus: implicada en varias enf, como Haemophilus influenza (produce meningitis en niños no vacunados) y parainfluenza,
altera tracto resp superior e inferior

Requiere agar chocolate→ libera factor 5 y 10 para poder crecer, y así se puede diferenciar los tipos de Haemophilus. En Muller
hinton se siembra antibiograma y se pone discos que tengan los factores 5, 10 y el 5y10- se encuba por 24h y se mira crecimiento
alrededor del disco

Si requiere 5 y 10: es H. influenza

Solo 5: parainfluenza
Solo 10: ducreyi

Hemólisis se mira al ver agar sangre

ESPIRILADOS→ no espirilos
 Campylobacter
 Helicobacter pylori
Se diferencia según la muestra dónde se encuentre→ mucosa gástrica es helicobacter; pero si es de materia fecal es
Campylobacter que casa infección intestinal

BACILOS NO FERMENTADORES
Medios de cultivo: no son tan exigentes
Crecen en Muller – hinton, agar chocolate y se usa selectivos y/o diferencial

1. Mc-Conkey: es rosado pero si es pálido es bacilo gram – no fermentador de lactosa pero si es muy rosado es fermentador de
lactosa

2. Agar salmonella-Shigella: son patógenos clásicos. ES MEIDO ROSADO;

 No FERMENTADOR: colonias pálidas
 Fermentador: Colonias rosadas intensas
 Punto negro: hace relación a producción de ac sulfhídrico H2S no fermentora de lactosa

3. Hectoen Agar:
 Negro: H2S
 Color azul: color del medio, no fermentador
 Amarillo salmón es fermentador de la lactosa

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
Prueba de oxidasa
Habla de citocromo oxidasa de las bacterias. Un reactivo es oxidado por la bacteria y da un color morado que indica ser una
prueba positivo, pero si no cambia de color es negativo.

Pruebas metabólicas
3 tipos de presentación según necesidades de O2 necesidades para la prueba
 Cuerpo
 Bisel
 Bisel + cuerpo

Prueba del citrato: solo es en bisel

Es de un color verde: es para ver si bacteria usa citrato como única prueba de carbh. Si lo utiliza, hay cambia del medio del verde
al azul. Si medio se queda verde es negativo

Prueba T.S.I en cuerpo y bisel

Bisel: nominador. Se interpreta la lactosa. Si fermenta es amarillo y sino es rojo
También se puede ver producción de ac sulfhídrico, se ve negro (H2S) se requiere pH por lo que si se presenta se pone “A
H2S”, un ejemplo de esto es Shigella
Si el medio queda arriba del fondo del tubo se ve la producción de gas dada en la fermentación
Cuerpo: Denominador. Se mira fermentación o no de glucosa amarillo. Se cambia de rojo a amarillo y con pH ácido (A); si no
hay fermentación se queda rojo y con pH alcalino (K)

Prueba de la LIA: también es cuerpo y bisel el medio es morado

bisel hay prueba de Desaminación. Morado pasa a rojo es positivo (R). Si morado se mantiene morado es – (K)
cuerpo hay descarboxilación. Si a 24 horas sigue siendo morado indica descarboxilación + (R); pero si pasa a amarillo la
descarboxilación es - R. Es fundamental tiempo de incubación de mínimo 24h
en primeras 12 horas la bacteria usa la glucosa que tiene el medio y hace que el pH se acidifique y el medio se pone amarillo, al
ser ácido y hay descarboxilasa se activa la descarboxilasa y hace que el pH aumenta y hace que tubo quede morado.  esto lo
hace las enterobacterias.
Los bacilos gram – no fermentadores a 12 horas se queda morado, y se mantiene morado. Se diferencia, haciendo prueba de
TSI y que debe estar amarillo para indicar que si descarboxilo
 R/A demaina no descarboxila

SIM sulfuro – indol – movilidad. Solo cuerpo.

 Movilidad: Se inocula en el medio. A 24 horas, se hace lectura. Si crece en línea central la bact es inmóvil, si es centra y
al lados se dice que es móvil movilidad +
 Sulfuro: H2S. Es negro o no. Los que producen H2S siempre son móvil
 Indol: si bacteria dobla indol por medio de triptófano, si al agregar reactivo se forma un anillo rojo + pero si es amarillo es
-
Prueba de ureasa: el medio es rosado claro y pálido
 Al ponerse rosado intenso o morado es +
 Color amarillo es –
Se usa después de endoscopia, indica identificar H. Pilory
 IDENTIFICACIÓN GRAM +
En cúmulos: Staphylococcus
Staphylococcus aureus:
 Celulitis
 Infecciones de herida qx
 Sepsis
 Bacteriemias
 Sind de piel escalda
 Shock tóxico

En cadena: Streptococcus
Hay diplococos gram + Streptococcus pneumonae

PRUEBAS
STAPHYLOCOCCUS
1. Catalasa: la tiene Staphylococcus aureus si es +; si la prueba es – es Streptococcus. En portaobjetos se pone peróxido
de hidrogeno y luego se pone colonia encima. El peróxido de H se desdobla en agua y oxígeno y produce burbujas.
2. Coagulasa: es para Staphylococcus aureus. Hay uno que es negativo que es patógeno urinario Staphylococcus
saprophyticus. Se hace con plasma de conejo
 S. Saprophyticus: se hace por medio de prueba de novobiocina cuando es resistente es saprophyticus y si es
sensible es otro SCN (coag neg) como S. epidermidis
3. Fermentación de manitol: para Staphylococcus aureus. Es como un agar. Si hay S. Aureus es capaz de cambiar pH y
cambiar el color del medio a amarillo

STREPTOCOCCUS
Hemólisis
Beta: hay 2 grupos que son Streptococcus del grupo A (pyogenes) y B (Agalactiae)
 Pyogenes: faringitis, fiebre reumática, pielonefritis, fascitis necrosante
 Agalactiae: importante en neonatos ya que produce sepsis neonatal
Se diferencian por prueba de bacitracina: es sensible pyogenes y puede ser resistente para otros beta hemolíticos
La prueba CAMP es con medio de enriquecimiento que es agar sangre: se usan 2 bacterias que es el S. Aureus que es control de
calidad y es beta hemolítico y otros para saber si es agalactiae una flecha se forma en presencia de agalactie por tener la
enzima CAMP.

Alfa
Se diferencian por prueba de optoquina es resistente de flora normal de faringe que son los Streptococcus viridans y los
sensibles son los Streptococcus pneumoniae

Gamma
Bilis escolina
 +: es enterococo es negra
 -: es amarilla
NaCl al 6.5% purpura de bromopresol
 +: amarillo
 -: negativo

BACILOS GRAM +
Lactobacilos: flora normal de la vagina
Listeria: CAMP, SIM. En la movilidad no crece en la parte de arriba como un sombrero en la parte de arriba, no hay turbidez.

DETECCIÓN DE RESISTENCIA BACTERIANA A LOS ANTIBIOTICOS

BLEES Hay resistencia por plásmidos, beta lactamasa de espectro expandido se usa 2 cefalosporinas
El abtico se pone solo con cefalosporina y el tamizaje es con inh de beta lactamico que es el ac glabular
la diferencia entre los dos halos no debe ser mayor a 5mm, ya que es BLEES positivo.

AmpC: es un grupo que requiere carbapenems, o puede ser resistencia inducible por plásmidos.

KPC carbapenemasa: hay bacterias resistentes a los carbapenems viene de la kliebsella pneumonae

cocos gram +
se hace prueba con oxacilina y se confirma con el cefoxitin este es un abtico que sirve como prueba de tamizaje
MRSA: es gen resistente que es el mecA

MLS macrólidos, licosamidas y Estreptograminas. se hace con clindamicina (CCDA) y eritromicina (E)
Hay 3 fenotipos

1. constitutiva: se ven los 2 puntos

2. inducible: halo de inh de clindamicina está achatado y eritromicina normal
3. a Macrólidos: la clindamicina presenta halo de inh completo y se puede dar completamente la clindamicina