"AÑO DEL DIÁLOGO Y LA RECONCILIACIÓN NACIONAL"

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE CHOTA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA

AGROINDUSTRIAL

INFORME : ESPECTROFOTÓMETRO

CURSO : BIOQUIMICA

DOCENTE : Ing. CRISTIAN QUESQUÉN CHANCAFE

ALUMNOS : FUSTAMANTE RAFAEL, Luz Mery

MORETO RODRIGO, Karina
RIMARACHIN MEDINA, Edin
TICLLA IRIGOÍN, María Yaqueline

CICLO : IV

Chota julio del 2018

I.- INTRODUCCIÓN
Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis
químico que sirve para medir, en función de la longitud de
onda, la relación entre valores de una misma magnitud
fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y
la concentración o reacciones químicas que se miden en una
muestra. También es utilizado en los laboratorios de química
para la cuantificación de sustancias y microorganismos.
Hay varios tipos de espectrofotómetros, puede ser de
absorción atómica, de absorción molecular (que
comúnmente se conoce como espectrofotómetro UV-VIS), y
no debe ser confundido con un espectrómetro de masa.
Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de
una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite
al operador realizar dos funciones:

 Dar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra,

Indicar indirectamente qué cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en la
muestra.

II.- MARCO TEÓRICO

2.1.- ESPECTROFOTÓMETRO: La palabra espectrofotómetro se deriva de la palabra latina
spectrum, que significa imagen, y de la palabra griega phos o photos, que significa luz. El
espectrofotómetro, construido mediante procesos avanzados de fabricación, es uno de los
principales instrumentos diagnósticos y de investigación desarrollados por el ser humano.
Utiliza las propiedades de la luz y su interacción con otras sustancias, para determinar la
naturaleza de las mismas. En general, la luz de una lámpara de características especiales es
guiada a través de un dispositivo que selecciona y separa luz de una determinada longitud
de onda y la hace pasar por una muestra. La intensidad de la luz que sale de la muestra es
captada y comparada con la intensidad de la luz que incidió en la muestra y a partir de esto
se calcula la transmitancia de la muestra, que depende de factores como la concentración
de la sustancia. (Anonimo, 2015)
FOTOGRAFÍAS DEL ESPECTROFOTÓMETRO
PROPÓSITO DEL EQUIPO El espectrofotómetro se usa en el laboratorio con el fin de
determinar la concentración de una sustancia en una solución, permitiendo así la
realización de análisis cuantitativos.

2.2.- COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO El esquema que se presenta a

continuación describe la interrelación de los diversos componentes de un
espectrofotómetro. Los más importantes son los siguientes:
1. La fuente luminosa
2. El monocromador
3. El portador de muestras
4. El sistema detector
5. El sistema de lectura
Se recuerda que los componentes mencionados corresponden a los básicos o generales de
este instrumento y no a los que hayan sido incorporados por diversos fabricantes como
consecuencia del avance tecnológico. Una breve explicación de estos se encuentra a
continuación del esquema.

Fuente luminosa Dependiendo del tipo de espectrofotometría, la fuente luminosa puede ser
una lámpara con filamento de tungsteno para luz visible, o una lámpara de arco de deuterio
para luz ultravioleta. Algunos fabricantes han diseñado espectrofotómetros con lámparas
intermitentes de xenón de alta duración que emiten luz en el rango de la luz visible y
ultravioleta. La lámpara o lámparas vienen montadas de fábrica en una base que permite
asegurar una determinada posición, para que se mantengan las condiciones de ajuste óptico
y enfoque cuando está en operación o se requiere reemplazarla. La energía radiante típica
que emite una lámpara de tungsteno está entre los 2 600 y los 3 000 °K (grados Kelvin).
Monocromador Está compuesto por un conjunto de elementos. En general, dispone de una
rendija o ranura de entrada que limita la radiación lumínica producida por la fuente y la
confina en un área determinada, un conjunto de espejos para pasar la luz a través del
sistema óptico, un elemento para separar las longitudes de onda de la radiación lumínica,
que puede ser un prisma o una rejilla de difracción, y una rendija de salida para seleccionar
la longitud de onda con la cual se desea iluminar la muestra. Las rejillas de difracción tienen
la ventaja de eliminar la dispersión no lineal y son insensibles a los cambios de temperatura.
Portador de muestras Está diseñado para sostener la muestra que se quiere analizar dentro
del rayo de luz de longitud de onda determinada por el monocromador. El elemento que
contiene la muestra es una celda o cubeta, por lo general, rectangular. Las celdas o cubetas
se fabrican de vidrio, si se requieren efectuar estudios en el rango de los 340 a los 1 000 nm
y de sílice, si el análisis está en el rango comprendido entre los 220 y los 340 nm. También
hay celdas en materiales plásticos como estireno o poliestireno. El portador de muestras lo
diseñan los fabricantes de acuerdo al tipo de espectrofotómetro y de muestra a analizar, por
ello se encuentran portadores de muestra con micro celdas, aunque también tubos de
ensayo y otras variantes como las celdas de flujo continuo.
Sistema detector El sistema de detección puede estar diseñado con fotoceldas, fototubos,
fotodiodos o fotomultiplicadores. Esto depende de los rangos de longitud de onda, de la
sensibilidad y de la velocidad de respuesta requeridas. El sistema de detección recibe la
energía lumínica proveniente de la muestra y la convierte en una señal eléctrica
proporcional a la energía recibida. La señal eléctrica puede ser procesada y amplificada,
para que pueda interpretarse a través del sistema de lectura. En la tabla que se incluye a
continuación, se presenta un resumen de las ventajas y desventajas de los dispositivos
normalmente usados en los sistemas de detección.
Sistema de lectura La señal que sale del detector recibe diversas transformaciones. Se
amplifica y se transforma para que su intensidad resulte proporcional al porcentaje de
transmitancia/absorbancia. Existen sistemas de lectura de tipo análogo (muestra la
magnitud leída sobre una escala de lectura) o digital (muestra la magnitud leída en una
pantalla). Los indicadores de tipo análogo reciben tradicionalmente el nombre de metros.
Su exactitud depende, entre otros factores, de la longitud de la escala y del número de
divisiones que tenga. (Mientras más divisiones, más exacto). Su principal desventaja es que
pueden ser mal leídos, por la fatiga de los operadores o errores, cuando disponen de varias
escalas, al tratar de identificar las escalas sobre las que deben realizar la lectura. Los
indicadores digitales usualmente presentan los resultados en una pantalla, en forma de
caracteres alfanuméricos luminosos. Esto los hace menos propensos a que se cometan
errores de lectura.

2.3.- Partes Básicas Del Espectrofotómetro

1. Chasis
2. Porta cubeta
3. Selector de filtro
4. Selector de modo
5. Ajuste grueso
6. Selector de longitud de onda
7. Indicador de longitud de onda
8. Pantalla

2.4.- TIPOS DE ESPECTROFÓMETRO

Espectrofotómetro de absorción atómica
Descripción
El espectrofotómetro de absorción atómica se basa en la medida de la absorbancia de una
radiación electromagnética a una longitud de onda característica del elemento a medir.
Es necesario para la medida, que el elemento se encuentre en su forma atómica. Para ello se
realiza una excitación con una llama de Acetileno/Aire o Acetileno/N2O
Aplicación
Cuantificación de la concentración de metales alcalinos, alcalinotérreos, y de transición y de
otros elementos en disolución acuosa.
Espectrofotómetro UV-Visible

Equipo que permite la determinación cuantitativa de compuestos absorbentes de radiación

electromagnética en solución, para longitudes de onda comprendidas entre 200 y 1100 nm.
Adecuado para la caracterización y análisis de aguas y efluentes papeleros (DQO, color,
hierro, sulfatos, lignina disuelta, etc.), así como la identificación y determinación de aditivos
no celulósicos en el papel, almidón, resinas, etc.
Espectrofotómetro Infrarrojo
Equipo que permite la identificación de grupos funcionales de materiales orgánicos,
pinturas y determinadas estructuras de muestras sólidas y liquidas por transmisión
espectroscopia de infrarrojo por transformada de Fourier (FTIR), en el rango espectral
comprendido entre 400 y 4000 cm-1.
Dispone de un accesorio para trabajar en reflectancia total atenuada (ATR)

2.5.- USO DEL ESPECTROFOTÓMETRO

En el trabajo práctico utilizarán espectrofotómetros digitales, marca Jenway 6300 (Figura
1). Estos equipos permiten variar la longitud de onda (λ) entre 320 y 1000 nm. (Anonimo,
TP. ESPECTROFOTOMETRÍA, 2011)

Figura 1
2.5.1.- INSTRUCCIONES
1.-Encendido del equipo: Una vez que se encuentre ubicado en el lugar donde se lo va a
utilizar, conectar el mismo a la red eléctrica (220V) y encenderlo apretando la tecla
encendido que se encuentra en la parte posterior del equipo (figura 2). Esperar 10 minutos
hasta que se estabilice.
2.- Selección del modo de trabajo: Los espectrofotómetros permiten trabajar en modo
absorbancia (ABS) o transmitancia % (T%). Para seleccionar el modo deseado presionar la
tecla lateral correspondiente. El modo de trabajo seleccionado aparece marcado con una
flecha en la parte inferior de la pantalla de lectura (Figura 3).

3. Selección de la longitud de onda: Apretar las teclas de selección de longitud de onda hasta
obtener el valor numérico deseado. En la pantalla aparece la longitud de onda en nm (Figura
4) Estos equipos permiten variaciones de 1 nm.

Figura 4
4. Puesta a cero: en una cubeta de medida colocar el blanco (que puede ser agua o solvente
dependiendo de la experiencia). Abrir la tapa del equipo y colocar la cubeta en el porta-
cubeta, luego cerrar la tapa. Presionar la tecla CAL y esperar (figura 5). Aparecerá en el visor
la lectura 0,000 de absorbancia ó 100 % de transmitancia, según el modo de trabajo
seleccionado. Una vez realizada la puesta a cero retirar la cubeta con el blanco. La puesta a
cero deberá realizarse cada vez que se modifique la longitud de onda.
5. Medida de la absorbancia de la muestra: Luego de retirar la cubeta con el blanco, colocar
la cubeta con la muestra a medir y cerrar la tapa del espectrofotómetro. Aparecerá en el
visor el valor de ABS o T% de la muestra. Registrarlo.

2.6.- Espectrofotometría
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las
radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro,
en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma. (Armas Cervantes, Cuapio Muños,
Tlahuitzo García, & Vázquez López, 2016)

2.7.-Fuente de Radiación Visible

En espectroscopía el término luz no sólo se
aplica a la forma visible de radiación
electromagnética, sino también a las formas
UV e IR, que son invisibles. En
espectrofotometría de absorbancia se utilizan
las regiones del ultravioleta (UV cercano, de
195-400 nm) y el visible (400-780 nm).

La región UV se define como el rango de

longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es una
región de energía muy alta. Provoca daño al ojo humano, así como quemadura común. Los
compuestos con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces peptídicos, sistemas
aromáticos, grupos carbonilos y otros heteroátomos tienen su máxima absorbancia en la
región UV, por lo que ésta es muy importante para la determinación cualitativa y
cuantitativa de compuestos orgánicos. Diversos factores -como pH, concentración de sal y
el disolvente- que alteran la carga de las moléculas, provocan desplazamientos de los
espectros UV.
La fuente de radiación ultravioleta es una lámpara de deuterio.
En la región visible apreciamos el color visible de una solución y que corresponde a las
longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe es el
complementario del color que transmite.
Por tanto, para realizar mediciones de absorción es necesario utilizar la longitud de onda en
la que absorbe luz la solución coloreada.
La fuente de radiación visible suele ser una lámpara de tungsteno y no proporciona
suficiente energía por debajo de 320 nm.

Bibliografía
Anonimo. (21 de Diciembre de 2011). TP. ESPECTROFOTOMETRÍA. Obtenido de
http://virtual.ffyb.uba.ar/pluginfile.php/24795/mod_resource/content/10/TP_%20M4
_%20ESPECTROFOTO.pdf

Anonimo. (10 de Julio de 2015). Espectrofotometro. Obtenido de

http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/cd29/laboratorio/cap11.pdf

Armas Cervantes, D., Cuapio Muños, U., Tlahuitzo García, E., & Vázquez López, T. ( 2016). El
Espectrofotómetro De Masas, Como Herramienta De Medida. Tlaxcala.