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Guía Unificada de Laboratorios
Fundamentos de Microbiología de alimentos
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2. Objetivos
3. Marco Teórico
Número de Muestras: Para que el muestreo tenga utilidad estadística, se debe realizar
sobre un número apreciable de unidades de un lote. El numero de muestras esta en
relación con la precisión que se desee obtener de los resultados.
El número de muestras es el igual a la raíz cuadrada del número total de unidades que
conforman el lote, o tomando el 1 %, del total cuando este es grande y el 10%, cuando el
lote es pequeño. Cuando los productos se controlan con regularidad, es suficiente
analizar de 5 a 10 muestras de cada lote.
- Inspección
- Tamaño del lote (N)
- Tamaño de la muestra(n)
- Muestra
- Toma de muestra
- Muestra defectuosa
- Riesgo del comprador
- Riesgo del vendedor
- Nivel de calidad Aceptable (NCA): Es el porcentaje máximo de unidades defectuosas
(número máximo de unidades defectuosas por cada 100), que se considera
satisfactorio o que se admite en un lote.
Para obtener una muestra representativa se deben cumplir las siguientes condiciones:
- El muestreo sobre lotes o remesas, se puede hacer, usando la técnica del muestreo
aleatorio, aplicando la tabla de números al azar.
- Cuando los envases son muy grandes y difíciles de transportar, se toman,
asépticamente, muestras representativas y se pasan a envases estériles más
pequeños.
Una vez tomadas las muestras, se empaquetan de forma adecuada según su naturaleza,
para evitar las roturas y el deterioro; estos recipientes se maraca correctamente así:
Tipos de Muestreo:
Según la intencionalidad:
Muestreo Aleatorio:
Consiste en elegir las unidades al azar, utilizando tablas matemáticas calculadas para
este fin. Estas tablas se manejan de la siguiente manera:
Se procede a enumerar cada unidad del lote (paquetes, contenedores, unidades del
producto), si el lote esta integrado por 200 unidades, su numeración se marcara de 1 al
200. Con un lápiz se señala un lugar cualquiera en la tabla de números al azar,
coincidiendo con un digito o su proximidad, este dígito sirve de punto de partida para la
separación del número de muestras destinadas al análisis. Supongamos que se ha
punteado con el lápiz un lugar que corresponde a la fila 15 y la columna 10, este numero
es el 1 (uno) y los que le siguen en las columnas 11 y 12, son el 4 y el 6;, en este caso la
unidad que se debe separar del lote esta marcada con el numero146. A continuación se
pasa a la fila 16 y a las mismas columnas 10,11,y 12, a las que corresponde el numero
078, una nueva unidad que se separa del lote, pasando a la fila 17, columnas 10,11,y 12
figura el numero 152,que debe ser también separado del lote. Se procede de la misma
forma hasta obtener el número de muestras señalado previamente.
Pesada de la muestra:
Casi todos los análisis se realizan a partir de una suspensión liquida de concentración
conocida, que se denomina suspensión madre y que tiene una dilución 1:10. Para
conseguir este factor de dilución, se pesa una cantidad de muestra y la pesada que
resulte, se multiplica por 9 (nueve), este nuevo resultado serán los mililitros de diluyente
que se debe añadir a la muestra pesada. A partir de esta dilución se preparan las
siguientes (1:100,1:1000, así sucesivamente....) hasta el factor requerido y establecido por
el laboratorio que realiza el análisis.
RECUENTO MICROBIANO:
Se redondea el resultado a dos cifras significativas; para esto, si la última cifra es inferior
a 5, la unidad anterior no se modifica; si la ultima cifra es 5 o mayor, la unidad anterior no
se modifica; si la última cifra es 5 o mayor, la unidad anterior se incrementa en una
unidad. De esta forma se prosigue hasta obtener dos cifras significativas. Los resultados
se expresan en ufc por gramo o mililitro, del producto, según la naturaleza del mismo
(sólido o líquido), expresado como un numero entre 1.0 y 9.9 (dos cifras significativas, un
entero y un decimal), multiplicado por lux, donde x es la potencia apropiada de 10.
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168+ 215+25
N= ________________
1 (2+(0.1x1))0.01
408
N= ___________________
0.021
N= 19428
Casos Especiales:
CASO 1: Cuando el numero de ufc se encuentra por debajo del rango mínimo en ambas
cajas de una o de las dos diluciones consecutivas, se informará de la siguiente manera:
Se descarta el recuento obtenido en la mayor dilución y se calcula la media aritmética de
las colonias presentes en las dos cajas de la menor dilución, multiplicándose por el
inverso de la dilución, e informando el resultado así:
Conteo Estimado de ufc /g o ml, expresado con las dos cifras significativas por la
potencia adecuada de 10.
Ejemplo: A partir de un análisis de Aerobios mesófilos en una muestra de agua, se obtuvo
este resultado:
N = 45+10/2x10
N = C.E.3,3x102ufc/ml.
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Caso General:
El resultado obtenido se redondea a dos cifras significativas. Para esto, si la última cifra
es inferior a 5, la cifra anterior no se modifica, pero, si la ultima cifra es mayor o igual a 5,
la cifra anterior se incrementa en una unidad y se prosigue así hasta obtener las dos cifras
significativas.
Los resultados se expresan en ufc/g o ml, de producto, según la naturaleza del mismo y
expresado como un número entre 10 y 99 (dos cifras significativas enteras), multiplicado
por 10x donde x es la potencia apropiada de 10.
N = 168+215/2 x100
N = 19150
N= 35+45/2 x 1000
N= 40000
Casos especiales:
CASO 1: Cuando el numero de ufc se encuentra por debajo del rango mínimo en ambas
cajas de una o de las dos diluciones consecutivas, se informará de la siguiente manera:
Se descarta el recuento obtenido en la mayor dilución y se calcula la media aritmética de
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las colonias presentes en las dos cajas de la menor dilución, multiplicándose por el
inverso de la dilución, e informando el resultado así:
Conteo Estimado de ufc/g o ml, expresado con las dos cifras significativas enteras.
NOTA: Cuando el conteo de colonias exceda de 200 en 1/8 de la caja, se reportará como
Conteo Estimado > 1600 ufc/g o ml, multiplicado por el inverso de la mayor dilución.
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5. Reactivos
- Cristal violeta
- Fuschina
- Lugol
- Alcohol Acetona
- α-Naftol
6. Procedimiento
Para muestras sólidas pesar 11 g o 10 g del total del alimento, en un frasco de dilución
que contenga 99 ml o 90 ml de diluyente, tratando de coger de la superficie e interior del
alimento (no debe olvidar que este procedimiento se debe hacer en condiciones de
esterilidad). Guardar una contramuestra para eventuales verificaciones, en condiciones de
refrigeración, congelación o medio ambiento de acuerdo con las características de
almacenamiento del producto.
7. Nivel de Riesgo
2. (bata de laboratorio manga larga, guantes, cofia, zapato cerrado, tacón bajo, pantalón
largo)
8. Bibliografía
9. Anexos
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2. Objetivos:
2.1 Conocer las técnicas empleadas para el recuento de bacterias Mesófilas Aerobias
en alimentos.
2.2 Interpretar los resultados obtenidos y repórtanos correctamente.
2.3 Determinar las implicaciones que para los alimentos tiene un recuento alto de este
tipo de bacterias.
3. Marco teórico:
Para su recuento se utilizan medios de cultivo que no tengan inhibidores para permitir el
crecimiento de los microorganismos. Este recuento no se hace en productos enlatados ni
fermentados, ya que por la naturaleza de estos alimentos, el recuento no sería
representativo.
Los recuentos de bacterias mesófilas son de poco valor a la hora de predecir la vida útil
de un alimento conservado en refrigeración, ya que muchos microorganismos mesófilos
no crecen a temperaturas por debajo de los 5 °C.
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5. Reactivos
6. Procedimiento
- Prepare las diluciones 10-1,10-2 y 10-3 en agua de peptona al 0.1 % a partir de las
muestras de alimentos.
- Siembre en profundidad por duplicado, 1 ml de cada una de las diluciones
seleccionadas.
- Adicione 20 ml de Agar Plate Count (debe estar a una temperatura de
aproximadamente 45ºC).
- Mezcle inmediatamente las cajas con el medio, de acuerdo con los movimientos de las
agujas del reloj, mínimo 5 veces.
- Deje solidificar y adicione una capa sellante sobre la caja, deje solidificar nuevamente.
- Incube a 35 °C durante 48 horas.
- Saque de la incubadora y realice el recuento en cada caso.
- Cuando se va a realizar el recuento seleccione las diluciones para bacterias
mesófilas aerobias, que contengan entre 30 a 300 colonias.
7. Nivel de Riesgo
- 2 bata manga larga, guantes, cofia, zapato cerrado de tacón bajo, pantalón largo.
- Material biológico para descartar se empaca en bolsa, se marca y entrega al
auxiliar.
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8. Bibliografía
9. Anexos
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2. Objetivos:
2.1 Capacitar a los estudiantes con las diferentes metodologías empleadas para el
análisis microbiológico de aguas potables de acuerdo a los requerimientos del
Decreto 475/98
2.2 Identificar la flora contaminante de los tipos de aguas
2.3 Adquirir destrezas en el adecuado manejo de las tablas utilizadas para hacer los
recuentos
3. Marco teórico:
Las aguas no carbonatadas presentan un recuento viable total que va desde 103 hasta
más de 105ufc/ml. Los recuentos en aguas carbonatadas son generalmente más bajos,
debido a su pH y al efecto antimicrobiano directo del CO2.
5. Reactivos
- Reactivo de Kovacs
- Indol, Rojo de metilo,voguesProskauer, Citrato
6. Procedimiento
Análisis Microbiológicos
Prueba Presuntiva
Prueba Confirmativa
- Confirmar los tubos de Caldo Lactosado positivos, transfiriendo 0.1 ml o una asada de
cada tubo positivo a un tubo con 10 ml de Caldo Lactosado Bilis Verde Brillante o
caldo lactosado.
- Incubar los tubos a 35 ºC ± 2 ºC por 24 – 48 horas.
- Pasado el tiempo de incubación, examinar y registrar los tubos que presenten
fermentación con producción de gas (positivos).
- Buscar en la tabla del NMP y anotar el resultado correspondiente al número de tubos
positivos de cada dilución.
- Informar el valor correspondiente como NMP DE Coliformes totales en 100 ml.
- A partir de los tubos positivos del aprueba presuntiva para Coliformes, transferir a
cada tubo una asada de cultivo en:
Caldo Lactosado Bilis Verde Brillante al 2% con campana de
Durham.
Caldo Triptófano.
- Mezclar suavemente los tubos e incubarlos a 44.5 ºC ± 0.5 ºC por 48 horas, en
baño de agua teniendo cuidado que el nivel de agua sobrepase el nivel de caldo
en los tubos.
- Leer la prueba de Mac-kenzie de la siguiente forma:
- Observar la producción de gas en caldo Lactosado bilis verde brillante al 2%
- Revelar en cada Triptófano la formación de Indol, adicionando unas gotas de
Reactivo Kovac’s
- Considerar como Coliformes Fecales, los que demuestren positividad en ambas
pruebas.
- Confrontar los resultados con la tabla NMP y expresar los resultados como
Coliformes Fecales / gr. ml.
Se utilizan membranas milipore tipo HA, que tiene un tamaño de poro de 0.45µm(micras),
ya que la mayoría de los microorganismos a analizar tienen un diámetro superior a
0.45µm.
7. Nivel de Riesgo:
- 2 bata de laboratorio manga larga, cofia, zapato cerrado, tacón bajo, pantalón
largo.
- El materia biológico para descartar se empaca en bolsa, se marca y entrega al
auxiliar
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8. Bibliografía
9. Anexos
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2. Objetivos:
3. Marco teórico:
Las bebidas refrescantes derivan de dos fuentes principales, de las aguas minerales con
gas y aromatizadas con frutas, como: los zumos de frutas, concentrados de zumos de
frutas, bebidas a base de zumos de frutas son las más expuestas a contaminación, en la
mayoría de las veces el azúcar es el portador de flora fúngica y bacteriana (Leuconostoc).
La flora presente en los zumos recién extraídos es muy elevada, predominando las
levaduras, que son las que en un 90% de los casos, alteran las bebidas refrescantes, por
cuanto sus características como: soportar pH bajos y altas concentraciones de azúcar,
tolerar tasas elevadas de CO2 utilizar Nitrógeno inorgánico para su desarrollo favorecen
el crecimiento y multiplicación de este tipo de microorganismos.
Las levaduras aisladas con más frecuencia pertenecen a los géneros: Cándida spp y
Saccharomyces spp. Los mohos por ser aerobios no se desarrollan en las bebidas
gaseosas, pero si se pueden hallar en las bebidas de frutas.
Las bacterias no soportan las condiciones propias de las bebidas gaseosas anteriormente
expuestas. En los zumos de frutas los géneros bacterianos más frecuentes son:
Achromobacter, Pseudomonas, Bacillus, Flavobacterium, Lactobacillus. La flora
acidófila y osmófila puede causar: fermentaciones alcohólicas originadas por
Sacharomycescerevisiae, S. carlsbergensis, S. acidifaciens; produciendo sabor
alcohol y desprendimiento de gas.
5. Reactivos
6. Procedimiento
- Prepare la muestra para su respectivo análisis siguiendo las pautas dadas por el
profesor.
- Realice diluciones iguales a 10-1, 10-2, 10-3, o de acuerdo al criterio o necesidad del
producto.
- Realice los análisis de acuerdo al producto (guíese por la tabla 3, de criterios
microbiológicos).
- Siembre por duplicado, en profundidad 1ml de las diluciones seleccionadas
- Agregar 40 ml agar SPS o TSN fundido previamente atemperado.
- Mezcle las cajas con el medio haciendo movimientos lentos arriba – abajo –
derecha e izquierda.
- Deje solidificar y aplique una capa sellante de 5ml
- Coloque las cajas con la tapa hacia arriba en la campana de anaerobiosis (colocar
el sobre de anaerobiosis y el indicador de oxido – reducción).
- Incube a 35ºC de 48 a 72 horas.
- Seleccione las cajas que contengan entre 20 y 200 colonias color negro.
-
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NOTA: No olvide que para el análisis de E.C.S.R., debe contar con las jarras de
anaerobiosis, los sistemas de anaerobiosis y los indicadores de la atmósfera; así como los
reactivos reveladores de las pruebas que se presenten en los medios de cultivo utilizados.
7. Nivel de Riesgo:
- 2 bata de laboratorio manga larga, cofia, zapato cerrado, tacón bajo, pantalón
largo.
- El materia biológico para descartar se empaca en bolsa, se marca y entrega al
auxiliar
8. Bibliografía
9. Anexos
NORMAS MICROBIOLÓGICAS
ANÁLISIS ESPECIALES Y/O
ANÁLISIS DE RUTINA
ESPORÁDICOS
AEROBIO S.
PRODUCTO NORMA MOHOS Y
S COLIFOR aureus E..C.S. Salmone
E. coli LEVADUR OTROS
MESÓFIL MES COAG( R. lla sp
AS
OS +)
Bebida dietética a base de MS. Res.
<3 <3 100 – 200 -- <10 -- --
jugo de frutas 11488/84
Bebida dietética MS. Res.
<3 <3 <10 -- <10 -- --
carbonatada 11488/84
Bebida hidratante MS. Res.
<3 <3 <10 -- <10 -- --
energética 02229/94
Bebida hidratante MS. Res.
<3 <3 <10 -- <10 -- --
energética en polvo 02229/94
Néctares y refrescos de > 30 MS. Res.
100 – 300 <3 <3 10 – 100 -- <10 -- --
días de duración 07992/91
Néctares y refrescos de 30 MS. Res. 1000 –
9 – 29 <3 100 – 200 -- <10 -- --
días máx. de duración 07992/91 3000
Refrescos INS <30000 11 <3 <300 -- <10 -- --
v.
Gaseosas INS 100 <3 <3 <10 -- <10 -- cholerae
”O”
MS. Res.
Jugo de tomate 100 – 300 3 <3 20 – 50 -- <10 -- --
15789/84
Jugos y pulpas y MS. Res. 1000 –
<3 <3 100 – 200 -- <10 -- --
pasterizados 07992/91 3000
Jugos y pulpas Ultra MS. Res.
100 – 300 <3 <3 <10 -- <10 -- --
pasterizados 07992/91
Jugos-pulpas concentrados MS. Res. 20000/5000
9 -29 <3 1000 - 3000 -- <10 -- --
congelados no pasterizados 07992/91 0
Tabla 3. Criterios microbiológicos para algunas bebidas refrescantes
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MÉTODO A MÉTODO B
10 -¹ 10-² 10-³
80ºC/15min
+
Agua fría
Agar SPS
Adicionar
35+/-2ºC/24-48h
En anaerobiosis
10 ml Agar SPS
Incubar 35+/-2ºC/24h
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PRUEBAS CONFIRMATIVAS
Seleccionar 3 colonias y sembrar en Caldo Tioglicolato
5 ml 35+/-2ºC/4-6h
35+/-2ºC
24 h
Observar burbujas Si no hay cambio de color
Catalasa (-). Agregar pizca de Zinc. Observar
crecimiento
a través de la estría.(-).
o crecimiento difuso
en todo el medio.
FERMENTACIÓN DE LA LICUEFACCIÓN DE LA
LACTOSA GELATINA
2. Objetivos:
3. Marco teórico:
La leche constituye un producto altamente perecedero, que además puede ser vehículo
de bacterias patógenas para el hombre (Mycobacterium tuberculosis, Brucella spp,
Salmonella spp, Escherichia coli. Listeria monocytogenes). En la leche también
pueden estar presentes Micotoxinas procedentes de vacas que han consumido alimentos
contaminados (aflatoxina M segregada por Aspergillus flavus), o del desarrollo directo de
mohos como el Penicillium cyclopium, P. viridicatum o P. stoloniferu, en las leches en
polvo.
Los derivados lácteos, por ser productos obtenidos en algunos casos a partir de leche
cruda, si no se realizan tratamientos adecuados para la reducción o eliminación de
microorganismos patógenos, se pueden encontrar remanentes de microorganismos
asociados a la alteración de estos productos.
La mantequilla por su baja humedad (15%) puede ser alterada por bacterias psicrotroficas
como Pseudomonas fragi y Pseudomona putrefaciens, causantes de enranciamiento y
superficie pútrida, los mohos principalmente son pertenecientes a los géneros Altemarias
spp, Aspergillus spp, Rhizopus spp,
Geotrichum spp, Penicillum spp, Cladosporium spp y Mucor spp, así como algunas
levaduras del genero Torulopsis spp, producen lipólisis y coloraciones verdes, azules,
blancas o grises, dependiendo del color de sus esporas.
En los derivados con altos contenidos de azúcar como la leche condensada y el arequipe,
los microorganismos no tienen un medio fácil de crecimiento y solo cuando las
condiciones de envase y la manipulación no son adecuadas se puede presentar la
entrada y crecimiento de hongos y levaduras osmófilas especialmente en la superficie,
como: Torulopsis lactis- condensi, Torulopsis globula y mohos como Aspergillus spp y
Penicillium spp.
La mayoría de los derivados lácteos se fabrican con leche tratada térmicamente, pero
este proceso de destrucción de microorganismos algunas veces no es eficiente, ya que
existen microorganismos resistentes a estos procesos (microorganismos termodúricos),
como Streptococcus thermophilus, Micrococcus lacteus, Corynebacteriumlacticum,
junto con esporas de Bacillus spp y Clostridium spp.
- Agar almidón
- 2 cajas de petri servidas con Baird Parker Agar
- 1 Tubo bioquímicas con 5ml de BHI
- 1 Tubo con 0.3 ml de plasma humano
- 1 caja de petri servida con Agar DNASA
- 9 Tubos taparrosca con 10 ml de caldo LMX Fluorocult.
5. Reactivos
- Reactivo de Kovacs
- Reactivo de greiss , polvo de zinc
- Alfa-naftol, KOH
6. Procedimiento
NOTA: el tiempo transcurrido entre el momento de depositar las distintas diluciones en las
placas y verter sobre ellas el medio de cultivo no debe ser superior a 10 minutos, así
como la extensión de los inóculos con el asa de vidrio en la superficie de los agares debe
ser inmediata. Del mismo modo, no se superarán los 20 minutos desde que se prepara la
primera dilución en la “serie de diluciones decimales”, hasta que se vierte el agar en la
última placa.
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7. Nivel de Riesgo:
- 2 bata de laboratorio manga larga, cofia, zapato cerrado, tacón bajo, pantalón
largo.
- El materia biológico para descartar se empaca en bolsa, se marca y entrega al
auxiliar
8. Bibliografía
9. Anexos
NORMAS MICROBIOLÓGICAS
ANÁLISIS ESPECIALES
ANÁLISIS DE RUTINA
Y/O ESPORÁDICOS
AEROBI MOHOS S. Bacill
PRODUCTO NORMA
OS COLIFO E. Y aureus E..C.S. us Salmonel OTRO
MESÓFI RMES coli LEVAD COAG( R. cereu la sp S
LOS URAS +) s
Leche con sabores MS. Res. 50000 –
11 – 40 <3 -- -- -- -- -- --
pasteurizada 02310/86 10000
MS. Res. 10000 – 200 – 100 –
Leche condensada <3 <3 -- -- -- --
02310/86 30000 500 200
MS. Dec. 10000 – 200 – < 100 – 100 – 100 –
Leche en polvo <3 <3 0 --
2437/83 30000 1000 200 1000 1000
MS. Dec. 50000 –
Leche pasteurizada 11 – 93 <3 -- -- -- -- -- --
2437/83 100000
Ea/an
Leche UHT envasada e MS. Dec. 20000 –
< 10 – 23 <3 -- -- -- -- -- < 10 -
higienizada 476/98 30000
20
Ea/an
Leche UHT larga vida y MS. Dec.
100 – 200 < 3 – 11 <3 -- -- -- -- -- < 10 -
mediana 476/98
20
MS. Res. 100 – 1000 –
Queso fresco -- * <3 -- -- 0 --
01804/89 500 3000
MS. Res. 30000 – 100 – 100 – 100 – 100 –
Queso fundido 20 – 93 <3 0 --
01804/89 50000 200 200 500 500
Queso semimadurado. MS. Res. 500 –
-- -- <3 -- -- -- 0 --
Madurado 01804/89 1000
MS. Res. 200 –
Yogurt / kumis -- 20 – 93 <3 -- -- -- -- --
02310/83 500
Postre de leche MS. Res. 5000 – 200 – 100 – 100 – 100 –
20 – 50 <3 0 --
pasteurizado 02310/89 10000 500 200 1000 1000
Crema de leche MS. Res. 100 – 100 –
-- 75 – 150 <3 -- -- 0 --
pasteurizada 02310/86 200 200
MS. Res. 500 – 100 –
Mantequilla -- 75 – 150 <3 -- -- 0 --
02310/86 1000 200
MS. Res. 100 –
Arequipe 500 – 2000 11 – 40 <3 10 – 100 -- -- -- --
02310/86 200
MS. Res. 100000 – 100 –
Helados (con leche) 93 – 150 <3 -- -- -- 0 --
01804/84 150000 200
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10 -¹ 10-² 10-³
0.1 ml 0.1 ml
Baird Parker
ó
Salado Manitol
35º+/-2ºC/24h
1-3 ufc
5 ml de Caldo BH
35º+/-2ºC/24 h
35º+/-2ºC
PRUEBA DE LA TERMONUCLEASA
0.1ml
Agar DNAsa
35+/-2ºC/4horas
Bacillus cereus
10 -¹ 10-² 10-³
0.1 ml 0.1 ml
Agar Mossell
ó
Selectivo para
B.cereus
35º+/-2ºC/24-48 h
Seleccionarcolonias típicas entre
20-200 ufc
Realizar Bioquímicas
MÉTODO A MÉTODO B
10 -¹ 10-² 10-³
80ºC/15min
+
Agua fría
Agar SPS
Adicionar
35+/-2ºC/24-48h
En anaerobiosis
10 ml Agar SPS
Incubar 35+/-2ºC/24h
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PRUEBAS CONFIRMATIVAS
Seleccionar 3 colonias y sembrar en Caldo Tioglicolato
5 ml 35+/- 2ºC/4-6h
35+/-2ºC
24 h
Observar burbujas Si no hay cambio de color
Catalasa (-). Agregar pizca de Zinc. Observar
crecimiento
a través de la estría.(-).
o crecimiento difuso
en todo el medio.
FERMENTACIÓN DE LA LICUEFACCIÓN DE LA
LACTOSA GELATINA
Listeria monocytógenes
Enriquecimiento
Selectivo
25 gr
+ 0.1 ml
225 ml 30ºC/24 h
Caldo Agar Mac-Bride, Oxford o Palcam
Palcam 30ºC/48 horas
Sembrar en SIM
Una asada
Tomar una asada del m.o. y sembrar Tomar una asada del m.o. y sembrar
en agar Almidón. En un tubo con VP
37ºC/ 37ºC/
24h 24h
2. Objetivos:
2.1 Determinar los análisis microbiológicos que se realizan a las carnes crudas: rojas y
blancas y sus derivados.
2.2 Identificar la flora microbiana contaminante de cada tipo de carnes
2.3 Conocer las diferentes técnicas empleadas para el aislamiento de Salmonella spp.
2.4 Interpretar los resultados de los análisis y compararlos con las normas vigentes
para este tipo de productos
3. Marco teórico:
proceso, cuando esta es nuevamente almacenada en algunos casos por corto tiempo si
las condiciones higiénicas no son apropiadas.
Muestras: carne fresca de vacuno, porcino, aves, y/o animales de abasto; chorizo,
salchichón, pasta de hamburguesa, cábanos, mortadela, morcilla, salchichas, queso de
cabeza.
5. Reactivos
6. Procedimiento
7. Nivel de Riesgo:
- 2 bata de laboratorio manga larga, cofia, zapato cerrado, tacón bajo, pantalón
largo.
- El materia biológico para descartar se empaca en bolsa, se marca y entrega al
auxiliar
8. Bibliografía
9. Anexos
NORMAS MICROBIOLÓGICAS
ANÁLISIS ESPECIALES Y/O
ANÁLISIS DE RUTINA
ESPORÁDICOS
AEROBI MOHOS
PRODUCTO NORMA S. Bacill
OS COLIFO E. Y E..C.S. Salmon
aureus us OTROS
MESÓFI RMES coli LEVAD R. ella spp
cereus
LOS URAS
Cárnicos cocidos o 200000 – 120 – 100 –
NTC 1325 <3 -- <100 -- 0 --
ecaldados 300000 1100 1000
120
– 100 – 100 –
Cárnicos crudos NTC 1325 -- -- -- -- 0 --
110 1000 1000
0
100
Listeria
NTC – 100 – 100 –
Cárnico crudo – pollo -- -- -- -- 0 monocyti
36442 110 500 1000
genes 0
0
Listeria
Cárnicos crudos 10 –
NTC 1325 -- < 3 – 93 <3 -- <100 -- 0 monocyti
madurados 100
genes 0
120
Pollo – carne cruda – 100 – 100 –
INS -- * -- -- 0 --
adobada 110 1000 1000
0
Tabla 5. Criterios Microbiológicos para algunas Carnes y Derivados cárnicos
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10 -¹ 10-² 10-³
0.1 ml 0.1 ml
Baird Parker
ó
Salado Manitol
35º+/-2ºC/24h
1-3 ufc
5 ml de Caldo BH
35º+/-2ºC/24h
35º+/-2ºC
PRUEBA DE LA TERMONUCLEASA
0.1ml
Agar DNAsa
35+/-2ºC/4horas
Escherichia coli
10 -¹ 10-² 10-³
1 ml 1 ml
Agar EMB
Mac Conkey
ó Endo
44ºC/24-48 h
Realizar Bioquímicas
INDOL RM VP CITRATO
Escherichia coli
SIEMBRA POR NMP EN LMX-F
1 ml
9ml A.P.E.
10 -¹ 10-² 10-³
10 gr/ml de
Muestra
+
90 ml A.P.E.
1 ml 1 ml 1 ml
37ºC/24h
Si se presenta Fluorescencia, adicionar Indol, aparición de un halo rojo indica prueba positiva
para E.coli y coliformes fecales. Informar según la tabla de NMP/gr ó ml.
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Salmonella sp
Pre-enriquecimiento Enriquecimiento
No Selectivo Selectivo
25 gr
+
225 ml 1 ml 10 ml Caldo
A.P.E. Rapport ó Incubar
37ºC/24 horas Tetrationate 37ºC/24 horas
0.1 ml
35º+/-2ºC/24-48 h
MÉTODO A MÉTODO B
10 -¹ 10-² 10-³
80ºC/15min
+
Agua fría
Agar SPS
Adicionar
35+/-2ºC/24-48h
En anaerobiosis
10 ml Agar SPS
Incubar 35+/-2ºC/24h
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PRUEBAS CONFIRMATIVAS
5 ml 35+/-2ºC/4-6 h
35+/-2ºC
24h
Observar burbujas Si no hay cambio de color
Catalasa (-). Agregar pizca de Zinc. Observar
crecimiento
a través de la estría.(-).
o crecimiento difuso
en todo el medio.
FERMENTACIÓN DE LA LICUEFACCION DE LA
LACTOSA GELATINA
2. Objetivos:
2.1 Conocerlas técnicas empleadas para realizar el Test de esterilidad comercial de las
conservas.
2.2 Identificar los diferentes tipos de microorganismos asociados a los procesos de
alteración de este tipo de productos.
3. Marco teórico:
Son aquellos productos que permanecen sin contaminar a temperatura ambiente, durante
largos periodos de tiempo y tienen una vida útil que puede variar desde 6 meses a varios
años.
Para lograr la inocuidad de una conserva, sería suficiente con utilizar un tratamiento
térmico elevado, lo que por otra parte, dará lugar a que los caracteres organolépticos del
producto envasado sufrieran una modificación sensible. Por esta causa, se suelen tener
en cuenta dos conceptos, respecto a la esterilidad de las conservas:
Esterilidad Biológica
Esterilidad Comercial
En la esterilidad biológica, existe una ausencia total de microorganismos y sus toxinas, así
como la inactivación absoluta de enzimas celulares y microbianas.
CLASIFICACIÓN:
Las conservas según su tecnología y con fines de control, las conservas se suelen
clasificar: Según el pH y según el envase.
Poco ácidas, con pH superior a 5.3: como las conservas de carne y pescado
De acidez media, con pH entre 5.3 y 4.5: como las conservas de legumbres y verduras
Ácidas, con pH entre 4.3 y 3.7
Muy ácidas, con pH inferior a 3.7: como el choucroute (o col fermentada).
Según el envase:
Teniendo en cuenta el envase que las contiene, las conservas se pueden clasificar en:
Procedencia de la Microbiota:
Muestreo: Consiste en separar cierto numero de unidades del lote que sean
representativas de este. Se deben dejar contramuestras (mínimo dos recipientes del
mismo lote).
Lavado de Envases: Antes de proceder a su análisis se deben lavar cada una de las
unidades muestreadas, con agua jabonosa y aclarar con agua potable.
- Abombamiento físico
- Oxidación
- Deformación
Con el fin de evitar contaminaciones externas, que pueden falsear los resultados, se
recomienda el uso de cámaras de flujo laminar, por cuanto, en el interior de la conserva
existe un vacío que, al abrir el envase, da lugar a una aspiración de aire exterior, por lo
que, para impedir poluciones, el aire circulante debe ser estéril.
Apertura del envase: La tapa de la conserva que se va a abrir, se lava enérgicamente con
algodón empapado con alcohol de 70°, se vierte una pequeña cantidad de alcohol que
debe actuar durante algunos minutos y desecharse después. La película de alcohol que
permanece se flamea de forma rápida. Este flameado se omite cuando los envases están
abombados.
Cuando se trata de envases abombados, como su apertura puede generar peligro para el
manipulador, se toman precauciones para protegerse de la salida violenta del contenido,
Se recomienda en este caso, usar un embudo de vidrio invertido sobre la conserva, que a
su vez debe estar sobre una bandeja metálica, la tapa de la conserva se perfora con un
punzón metálico estéril, a través del vástago del embudo. Los gases que salen por el
orificio de apertura, se recogen en un tubo de ensayo o en una probeta colocada en
posición invertida sobre el vástago del embudo.
Para detectar la presencia de H;, se aplica una llama a la boca del tubo donde se han
recogido los gases, en caso positivo se producirá una pequeña explosión, La presencia de
CO2, se detecta añadiendo 3ml de KOH al tubo y agitando , previa obturación del tubo con
el dedo.
Olor fecal: Por coniformes procedentes del exterior que indican fisuras del envase.
Se extrae el producto para hacer un examen minucioso del interior del envase, con el fin
de descubrir posibles alteraciones del color de las paredes, debidas generalmente, a
reacciones químicas, así como lesiones de oxidación y desprendimiento del esmalte
protector.
Examen bacterioscopico:
Si esta cifra es alta (>107), significa que la materia prima es microbiológica mente
deficiente. Una buena conserva no debe tener de 2 a 3 bacterias muertas por campo
microscópico, excepto en alimentos cuya elaboración es consecuencia de fermentación
biológica.
La técnica para el examen microscópico, consiste en hacer una extensión fina del
alimento y teñida por tinciones simples o de Gram. y observada bajo el objetivo se
inmersión, se examinan 10-20 campos distintos al azar. Se cuentan las agrupaciones
encontradas (parejas, racimos, cadenas, aislados), Gram positivas y Gram negativas.
De acuerdo con tos exámenes efectuados, para que la estabilidad de una conserva sea
correcta, debe ocurrir:
- 1Pipeteador
- 1 pH - metro
- 1 Abrelatas o punzón de acero inoxidable estériles
- 2 Pipetas de 1 ml estériles
- Incubadoras a 35º C Y 55ºC
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5. Reactivos
- Cristal violeta
- Azul De metileno
- Fascina básica
- Alcohol acetona
6. Procedimiento
- Las muestras también pueden ser sembradas en otros medios líquidos o sólidos, con
el fin de establecer la naturaleza de los microorganismos; el medio de cultivo debe ser
muy nutritivo para que los microorganismos se desarrollen bien; el pH debe ajustarse
al del alimento analizado.
Medios para el crecimiento de aerobios y que favorezcan el crecimiento de
Bacillus spp.
Medios para crecimiento de anaerobios y que favorezcan el crecimiento de
Clostridium spp.
Medios específicos para gérmenes de la familia Bacillaceae.
Medios para mohos y levaduras, sobretodo en conservas de frutas y conservas
ácidas.
Medios para el crecimiento de Lactobacillus spp, sobre todo en conservas de
fruta y otras conservas ácidas.
7. Nivel de Riesgo:
- 3 bata manga larga, guantes, zapato cerrado, gafas protectores, cofia, tapabocas
- El materia biológico para descartar se empaca en bolsa, se marca y entrega al
auxiliar
8. Bibliografía
9. Anexos
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2. Objetivos:
2.1 Conocer las técnicas empleadas para hacer análisis de superficies, equipos,
ambiente y manipuladores de alimentos.
2.2 Desarrollar destrezas para analizar y evaluar si las prácticas de limpieza y
desinfección son efectivas en la industria alimentaria.
3. Marco teórico:
Para garantizar la calidad sanitaria de los productos alimenticios que se procesan en las
fábricas de alimentos, estas deben tener implementados procedimientos adecuados de
limpieza y desinfección, así como, adecuados y suficientes agentes detergentes y
desinfectantes, que permitan mantener a la fábrica libre de focos de contaminación, y
prevenir riesgos que puedan afectar la salud del consumidor.
La limpieza se debe aplicar a todas las áreas de la planta, detectando puntos de control
critico, con énfasis en especial en las superficies de contacto con alimentos.
Desinfección de superficies:
El aire:
La contaminación del ambiente procede de restos de alimentos, en el suelo o sobre las
superficies, favoreciendo el desarrollo de microorganismos, de la manipulación de
embalajes de cartón contaminados en su mayoría con esporas de mohos, de la
contaminación generada por el personal, de las corrientes de aire y de las instalaciones
de aire acondicionado que se encuentran en mal estado. Esta contaminación se puede
reducir mediante el uso de radiaciones ultravioleta, filtración, uso de aerosoles,
pulverizaciones o nebulizaciones que no precipiten rápidamente y que sean seguras para
el personal y el alimento.
El personal:
Utilización de hisopos: La toma de muestras con hisopos se emplea mucho, sobre todo
para el control de material en las salas de despiece, quesería, moldes, bandejas, válvulas,
palas de agitadores y en general de superficies que entren en contacto con el alimento o
donde se sospeche sea una fuente de microorganismos y donde el método sea factible de
aplicación.
Métodos por impresión: Se adaptan bien a las superficies planas, los microorganismos
son extraídos por contacto directo con el medio de cultivo. De esta forma se puede
establecer la localización de los microorganismos en las superficies desinfectadas
(método de placa RODACb).
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Control de aire con placas de medio de cultivo: El control se lleva a cabo exponiendo la
superficie del medio de cultivo a la atmósfera seleccionada por un tiempo determinado
(sedimentación).
Sistemas colectores de aire: Estos equipos toman un volumen de aire determinado en una
unidad de tiempo determinada, proyectando el aire captado sobre la superficie de una
placa de petri con un medio definido. Es una técnica significativa de la contaminación
ambiental.
Muestras: Elegir un área de trabajo en las cual se puedan aplicar los controles de
superficies, operarios, ambiente de trabajo.
- 5 Pipetas de 1 ml estériles
- 2 Pipetas de 0.1 ml estériles
- 5 tubos taparrosca con 10 ml de caldo nutritivo
- 5 cajas de Petri estériles
- 6 hisopos estériles
- 1 plantilla de 5x5 cm2
- Incubadoras
- 20 ml de Agar SPC fundido
- 20 ml de Agar OGY fundido
- 60 ml de EMB fundido
- 2 cajas servidas de Baird Parker Agar
- 2 cajas servidas de OGY Agar
- 2 cajas servidas de SPC Agar
5. Reactivos
6. Procedimiento
Para la misma determinación, realice los métodos de enjuague con caldo nutritivo y
técnica RODAC con los medios adecuados. Incube todos los análisis por el tiempo y
temperatura adecuados.
Toma de muestras de aire. Seleccione del lugar de trabajo, un área, en la cual debe
exponer la superficie de una caja de agar plate Count para conteo total de bacterias y
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NOTA: siempre tenga la precaución de marcar previamente los tubos, cajas y demás
pruebas con la fecha, lugar, análisis, hora, temperaturas de incubación y demás
información necesaria para el correcto desarrollo de las pruebas.
Para poder verificar si un programa de L&D está funcionando correctamente, existen dos
tipos de pruebas que pueden aplicarse: las pruebas rápidas y los métodos tradicionales,
sin embargo estos últimos requieren de tiempo y no permiten determinar en el momento si
el proceso ha quedado en las condiciones óptimas para su utilización; dentro de estos
sistemas el que ha tenido mayor aceptación, es la tecnología del ATP bioluminiscente.
Luminómetro.
Reactivos para realizar la prueba (buffer, enzima, sustrato, e hisopos).
Impresora.
Existen algunos inconvenientes para correlacionar medicines de ATP (las cuales son
expresadas en unidades relativas de luz URL), con el número de microorganismos:
Una limpieza efectiva que remueva los residuos alimenticios y una correcta desinfección
que asegure la lisis y muerte celular microbiana, soportan la razón por la cual este
sistema puede utilizarse como indicador del programa L&D.
Como cualquier técnica, se requiere un conocimiento del sistema para obtener datos
confiables. Es importante recordar que los monitores de ATP son la primera línea de
defensa; usualmente en plantas con superficies sucias, se encuentran tres tipos de ATP,
por ello se debe recordar que las mediciones son del ATP total, es por esta razón que
cada planta antes de poner esta método de detección debe estandarizar los valores de
URL que puedan diferenciar entre superficies sucias e higienizadas correctamente.
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Es importante valorar dentro de una industria aquellos sitios donde es más difícil el
proceso de L&D, como : bandas transportadoras, mesas de corte, cuchillas, equipos como
despulpadoras, molinos, centrífugas de discos y en los servicios de alimentación,
licuadoras y coladores.
En términos generales, los siguientes pasos, son los necesarios para utilizar el sistema de
bioluminiscencia en una planta de proceso:
Como todo sistema novedoso, tiene el inconveniente del costo, sin embargo, cuando en
un proceso se pueden tomar las medidas correctivas a tiempo, la inversión que se hace
es baja, comparada con la calidad final del producto y los costos generados de productos
elaborados en ambientes no adecuados.
7. Nivel de Riesgo:
- 2 bata de laboratorio manga larga, guantes, cofia, zapato cerrado, pantalón largo.
- El materia biológico para descartar se empaca en bolsa, se marca y entrega al
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8. Bibliografía
9. Anexos
NORMAS MICROBIOLÓGICAS
ANÁLISIS ESPECIALES Y/O
ANÁLISIS DE RUTINA
ESPORÁDICOS
AEROBI MOHOS
PRODUCTO NORMA S. Bacill
OS COLIFO E. Y E..C.S. Salmon
aureus us OTROS
MESÓFI RMES coli LEVAD R. ella spp
cereus
LOS URAS
EMP.
Planta ambientes 100 -- -- 30 -- -- -- -- --
PRIVADA
EMP.
Planta agua 100 0 -- -- -- -- -- -- --
PRIVADA
EMP.
Planta manos -- 100 -- -- -- -- -- -- --
PRIVADA
EMP.
Plantas manos (agua) -- 50 -- -- -- -- -- -- --
PRIVADA
Planta superficies EMP.
100 <10 -- -- -- -- -- -- --
preproceso PRIVADA
Planta superficies EMP.
500 <10 -- -- -- -- -- -- --
proceso PRIVADA
Tabla 3. Algunos criterios microbiológicos para ambientes en plantas procesadoras
de alimentos.