29/05/2018

Apprêtement et présentation des

antigènes

Pr B. Mbengue
FMPO/UCAD – Licence 3 Pharmacie
2017 - 2018

PLAN
Introduction

I – Molécules de présentation des antigènes

II – Apprêtement des antigènes

III – Bases moléculaires de la reconnaissance de l’antigène

Conclusion

1
 29/05/2018

Réponse immunitaire
Infection Immunité protectrice

Apprêtement et
présentation
des antigènes

Présentation des antigènes

des glycoprotéines membranaires ou solubles qui interviennent

PEPTIDE

2
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Variation de la fonctionnalité lymphocytaire

Lymphocyte T Lymphocyte T Lymphocyte T
naïf effecteur mémoire

n’a pas encore vu l’a vu et prend l’a vu , a perdu sa ou ses

l’Ag ses fonctions fonctions et s’en souvient

Présentation
de l‘ antigène

PLAN
Introduction

I – Molécules de présentation des antigènes

II – Apprêtement des antigènes

III – Bases moléculaires de la reconnaissance de l’antigène

Conclusion

3
 29/05/2018

Rôle du SI = reconnaître et détruire le non-soi ou le soi

modifié, reconnaître et protéger le soi.

Importance de la reconnaissance des éléments du soi,

non-soi ou du soi modifié: antigènes et auto-antigènes

Mise en place d’une réponse humorale ou cellulaire efficace

activation et expansion clonale des cellules T par le peptide

antigénique lié à une molécule de CMH

Cellule présentatrice de l’antigène

CMH

Peptide
antigénique CD4 ou
CD8

TCR αβ

Lymphocyte T

CD3

4
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1 – Le système HLA

A - Les molécules HLA-I

Site de liaison du peptide
antigénique de 8 à 14 AA

Chaîne α
45 kDa α2 α1

3 domaines
N

β2-microglobuline (β2m)
α3 β2m
12 kDa, 90 AA
pas dans le CMH
C

I-1 – Le système HLA

A - Les molécules HLA-I

HLA-I = exprimée par toutes les cellules nucléées sauf

Neurones
Cellules germinales
Cellules de l’os et du cartilage

HLA-I = exprimée à une densité de 3,5 105 et renouvelées toutes les 6H

HLA-I = exprimée avec 3 à 6 molécules différentes pour chaque type cellulaire

Chaque molécule de HLA-I exprimée = produit de 2 allèles (origines

paternelle et maternelle)

5
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I-1 – Le système HLA

B - Les molécules HLA-II
Site de liaison du peptide
antigénique de 15 à 25 AA
Chaîne α
Chaîne β
33 à 34 kDa
27 à 29 kDa
NN
α1 β1

α2 β2

C C

I-1 – Le système HLA

B - Les molécules HLA-II
HLA-II = exprimée par toutes les CPA et les LT activés
Cellules endothéliales, épithéliales, fibroblastes de la peau, béta du pancréas
=> expression après stimulation par des cytokines

HLA-II = expression est constitutive (LB) ou dépendante du stade de

différenciation (pas sur le pré-B) ou de l’état d’activation (Mo-Mac)

HLA-II = exprimée env 15 molécules différentes pour chaque type cellulaire

Chaque molécule de HLA-II exprimée = produit de 2 allèles (origines

paternelle et maternelle)

6
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Organisation génomique du HLA

Plusieurs gènes localisés sur le bras court du chromosome 6
Chr 6q Chr 6p

21.3

Chr 6p21.3
3 locus = 4000 kb

Gène de HLA-II (1000 kb) Gène de HLA-III (1000 ) Gène de HLA-I (2000 )

Molécules HLA-II Prot du complément, HSP, Molécules HLA-I

TNF …

Polygénisme

Existence de plusieurs gènes codant les molécules HLA-I et HLA-II

Gène de HLA-II Gène de HLA-III Gène de HLA-I

11 gènes fonctionnels 6 gènes fonctionnels

7 4 HLA-A HLA-E
HLA-DP (2) HLA-DM (2) Gène
HLA-B HLA-F
HLA-DQ (2) HLA-DO (2) codant pour
HLA-C HLA-G
HLA-DR (3) β2m est
invariant
HLA-II HLA-II HLA-I HLA-I
classiques non classiques classiques non classiques
ou CMH-IIa ou CMH-IIb ou CMH-Ia ou CMH-Ib

7
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I-2 – Les molécules CD1

Glycoprotéines (5) avec 25 à 30% d’homologie de séquence avec les HLA

Associées à la β2m
Pas de polymorphisme
Codées par 5 gènes situés sur le Chromosome 1
5 isoformes de CD1 chez l’homme

Groupe 1 Groupe 2
CD1A (49kDa) CD1D (49kDa)
CD1B (45kDa)
CD1C (43kDa)
CD1E (36kDa)

I -2 – Les molécules CD1

5 isoformes de CD1 chez l’homme avec structure similaire à celle de HLA-I

Site de liaison des lipides,

glycolipides

Chaîne α
α2 α1
3 domaines externes

β2-microglobuline (β2m)
α3 β2m
12 kDa, 90 AA
pas dans le CMH
C

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I-2 – Les molécules CD1

CD1 = exprimée surtout par les cellules présentatrice d’Ag, aussi les
thymocytes corticaux, C. interdigitées

Distribution des isoformes = variation en fonction du type cellulaire

C. de Langerhans => CD1A et CD1C
LB sanguins et spléniques => CD1C
DCs des ganglions => CD1B

CD1D = distribution plus large mais exprimée en quantité moins importante

que les autres CD1

CD1E = pas exprimée à la surface des cellules, toujours intracellulaire

(lysosomes) => facilite l’hydrolyse partielle de la partie glucidique de GL

PLAN
Introduction

I – Molécules de présentation des antigènes

II – Apprêtement des antigènes

III – Bases moléculaires de la reconnaissance de l’antigène

Conclusion

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II – Apprêtement des antigènes

Apprêtement Lysosome
endosolique Endosome Endosome
précoce tardif HLA II-Peptide
Phagosome

Pathogène Phagocytose

CD1- lipide
Noyau
HLA I-Peptide
RE
Protéasome Golgi

Apprêtement Peptides

cytosolique
Antigènes

Pathogène

II – Apprêtement des antigènes

Antigènes
natifs

Apprêtement Apprêtement
cytosolique endosolique
endo- antigènes exo-antigènes
peptidiques peptidiques

Petits fragments associés

aux molécules de
présentation

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 29/05/2018

I-1 – Les endo- antigènes peptidiques

Principaux acteurs

I-1 – Les endo- antigènes peptidiques

Le parcours
CTL

Lyse

Présentation
Golgi

RE
HLA- I
Cellule
Apprêtement TAP
infectée
Protéines Peptides
virales

Protéasome

11
 29/05/2018

I-1 – Les endo- antigènes peptidiques

Le parcours

Golgi

RE
HLA-I
TAP

Protéines Peptides

Protéasome

I-1 – Les endo- antigènes peptidiques

Assemblage des molécules HLA-I/peptides antigèniques

RE ERp57 Calréticuline
Calnexine Tapasine
β2m

Calnexine
TAP
HLA-I

ERp57 2m Tapasine

Calnexine Calréticuline
TAP (1 et 2)

TAP1 et TAP2 sélectionnent les peptides de > 8 AA + C terminale hydrophobe

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I-1 – Les endo- antigènes peptidiques

Structure des peptides-HLA-I

I-1 – Les endo- antigènes peptidiques

Le protéasome

Golgi

RE
HLA-I
TAP

Protéines Peptides

Protéasome

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 29/05/2018

I-1 – Les endo- antigènes peptidiques

Le protéasome

= découper en peptides par sa unité 20S les protéines intracellulaires

poly ubiquitinées (du soi ou du non-soi)

I-1 – Les endo- antigènes peptidiques

Le protéasome
19S

20S
19S

Activité protéolytique (20S)

Chaîne de
poly-ubiquitine

Peptides

Protéine

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 29/05/2018

I-1 – Les endo- antigènes peptidiques

Le protéasome
CTL

Lyse

Présentation
Golgi

RE
HLA- I
Apprêtement TAP

Protéines Peptides

Protéasome
standard

I-1 – Les endo- antigènes peptidiques

Le système de présentation cytosolique

- Utilise HLA-I

- Utilise la voie ubiquitine-protéasome

- Apprête des antigènes ENDOGENES

(par ex. des protéines virales ou bactériennes qui envahissent les

cellules infectées, des parasites, et les constituants cellulaires
normaux [!])

- Les peptides antigéniques ont 8-12 AA

15
 29/05/2018

Molécules HLA-I:
vue de dessus

α1

α2

Comparaison des séquences des différentes molécules HLA -I => les régions
variables se trouvent sur les régions α1 et α2.

I-2 – Les exo-antigènes peptidiques

Les acteurs principaux

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 29/05/2018

I-2 – Les exo-antigènes peptidiques

Le parcours
Cytokines Th

LTh
TCR

Golgi
MIIC
ER
HLA-I HLA-II

TAP Endo/lysosome
Protéines
Peptides

Protéasome

I-2 – Les exo-antigènes peptidiques

Assemblage des HLA-II/peptide Surface

cellulaire

Réticulum HLA-DM
endoplasmique ENDOSOME TARDIF
HLA-DO
Chaîne Peptide
invariante Protéases

CLIP

 
HLA-II

CLIP
Chaîne invariante (Class II-associated HLA-DO HLA-DM
Invariant chain Peptide)

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 29/05/2018

I-2 – Les exo-antigènes peptidiques

Structure des peptides-HLA -II

Molécules HLA-II:
vue de dessus
α1

β1

Comparaison des séquences des différentes molécules HLA -II => les régions
variables se trouvent sur les régions α1 et β1.

18
 29/05/2018

I-2 – Les exo-antigènes peptidiques

Le système de présentation endosolique

- Utilise HLA-II

- Utilise des CPA

- Apprête des antigènes EXOGENES

- Les peptides antigéniques ont 13-25 AA

I-1 – Les endo- antigènes peptidiques I-2 – Les exo-antigènes peptidiques

Cas particulier des cellules

dendritiques

Présentation croisée ou cross-présentation

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 29/05/2018

Cas particulier des cellules dendritiques

Lysosome
Apprêtement Endosome Endosome
endosolique précoce tardif HLA II-Peptide
Phagosome

Pathogène Phagocytose

CD1- lipide
Noyau
Présentation HLA I-Peptide
croisée RE
Protéasome Golgi

Peptides
Apprêtement
cytosolique Antigènes

Pathogène

Cas particulier des cellules dendritiques

Présentation croisée (Cross-présentation) = fonction importante des DCs

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 29/05/2018

I-3 – Les antigènes lipidiques

Quelle que soit leur origine (endo ou exo)

Présentés par des molécules CD1

association au niveau des compartiments
endo(phago)cytaires

RE Endosome tardif
CD1 est associée à un Lipide antigénique spécifique de CD1
endolipide => prendre la place de l’endolipide

Présentation au TCRαβ des NKT

Immunité adaptative
Toute protéine présente dans la cellule est découpée en
peptides dont certains sont chargés sur des molécules
présentatrices et présentés au TCR des LT

Pas de discrimination des protéines selon leur

contexte: même mécanisme d’échantillonnage pour
les protéines du soi et les protéines étrangères

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 29/05/2018

III – Les bases moléculaires de la reconnaissance de l’antigène

Les cellules présentatrices d’antigènes

- des CPA conventionnelles: DCs, Mo-Mac

- Peptides endogènes + CMH-I → TCR des TCD8

- Peptides exogènes + CMH-II → TCR des TCD4

- des CPA non conventionnelles: LB

- Peptides exogènes + CMH-II → TCR des TCD4

La synapse immunologique
Synapse immunologique

CPA LT naïf

Evénements
biochimiques
CMH Production d’IL-2
TCR
et IL-2R

LT
mémoire
Prolifération
LT activé
Différenciation
> 20 liaisons LT
effecteur

Plusieurs signaux délivrés par CPA →Ac va on LT→réponse adapta ve

22
 29/05/2018

III – Les bases moléculaires de la reconnaissance de l’antigène

Les cellules présentatrices d’antigènes

- des CPA conventionnelles: DCs, Mo-Mac

- Peptides endogènes + CMH-I → TCR des TCD8

- Peptides exogènes + CMH-II → TCR des TCD4

- des CPA non conventionnelles: LB

- Peptides exogènes + CMH-II → TCR des TCD4

Interaction CPA - LT

Peptide

CMH TCR

Signal 1
CPA LT
Signal 2
CD80/86 CD28

Signal 3

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 29/05/2018

III-1 – Interaction CPA conventionnelle - lymphocyte T

CPA conventionnelle
CD58 B7
ICAM-1 CMH/peptide

1ère étape

CD4 IL-2Rα
LT LFA-1 CD2 CD28
TCR/CD3 ou CD8

Adhérence Activation spécifique Co-stimulation Cytokines

par l’antigène

III--1-1 - Adhérence
III
CPA conventionnelle
DC
DC-SIGN LFA-3
ICAM-1
ICAM-2

LFA-1 ICAM-3CD2 ou
LFA-2
LT
Adhérence et transmission des signaux

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 29/05/2018

III--1-1 - Adhérence
III

ICAM-1
INTEGRINE

B7 CD28

CMH P TCR

CD40
CD40 L

ICAM-1 INTEGRINE

III--1- 1- Adhérence
III

Difficile d’évaluer le rôle précis de chaque

molécule d’adhérence car

Réponses T normales si Permettre aux RI de se

déficience en CD2 REDONDANCE produire en l’absence
(homme et souris) SYNERGIE de l’une d’entre elles

Interaction efficace entre CPA et cellule T naïve

Laisser
aux T naïfs le temps
de tester la présence de leurs
peptides sur les CMH
de la CPA

25
 29/05/2018

III-1-2- Activation spécifique par l’antigène

CPA conventionnelle

CD58 B7
ICAM-1 CMH/peptide

Signal 1

CD4 IL-2Rα
LFA-1 CD2 CD28
TCR/CD3 ou CD8

LT Adhérence Activation spécifique par Co-stimulation Cytokines

l’antigène

III-1-2- Activation spécifique par l’antigène

a) TCR
Un complexe TCR

α β
δ ε Vα Vβ γ ε - Chez tous les T CD4 et T CD8

Cα Cβ -domaines variables V et V

- domaines constants C et C

CC
ITAM

Interaction entre TCR et peptide = 1er

signal d’activation des LT
CD3
ζζ

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 29/05/2018

III-1-2- Activation spécifique par l’antigène

a) TCR
Une spécificité double

V ou V du TCR V ou V du TCR se lient

établissent des liaisons aux domaines variables
spécifiques avec le 1 et 2 de HLA-I ou 1
peptide antigénique α β et 1 de HLA-II
δ ε Vα Vβ γ ε

Cα Cβ

CC

SIGNAL
ζζ

III-1-2- Activation spécifique par l’antigène

b) Autres molécules des LT impliquées dans la stimulation

CD2 (LFA-2)

= molécule d’adhésion impliquée dans l’activation des LT

- Exprimée sur l’ensemble des LT et des NK

- Interagit avec un de ses ligands CD58 (LFA3) ou CD59 ou CD48 des CPA

Interaction délivre un signal d’activation aux LT

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III-1-2- Activation spécifique par l’antigène

CD3
- Sur toutes les cellules T matures
- assure la transduction du signal
α

Surface externe

Membrane plasmique

Cytoplasme

III-1-2- Activation spécifique par l’antigène

CD4
- GP membranaire avec 4 domaines extracellulaires

- sur les LT immatures et 2/3 LT périphériques

D1
- D1 + D2 = site de liaison du 2 de HLA-II
D2 (pouvant lier gp120 du VIH)

D3
Indispensable à la stabilisation du complexe TCR-peptide
D4

Lck - Partie intra-cytoplasmique associée à la protéine

kinase Lck permet le signal d’activation des LT
Lck = p56lck = leucocyte-specific Thyrosine kinase de 56 kDa

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 29/05/2018

III-1-2- Activation spécifique par l’antigène

CD8

α β
- GP membranaire dimérique: 2 chaînes  ou 

- sur les LT immatures et sur les CTL

- se lie au domaine 3 de la molécule HLA-I

Indispensable à la stabilisation du complexe TCR-peptide

Lck - Partie intra-cytoplasmique associée à une kinase

permet le signal d’activation des LT

III-1-2- Activation spécifique par l’antigène

CD4 CD8
Lier le domaine 2 de la Lier le domaine 3 de la
molécule HLA-II molécule HLA-I

D1 β2m α3
α2 β2
D2 α1
α2 α β
α1 β1
D3

D4

Lck Lck

29
 29/05/2018

III-1-3- Co-stimulation CPA conventionnelle

CD58 B7
ICAM-1 CMH/peptide

Signal 2
Anergie clonale si absence de
co-stimulation
CD4 IL-2Rα
LFA-1 CD2 CD28
TCR/CD3 ou CD8

Adhérence Activation spécifique Co-stimulation Cytokines

par l’antigène
LT

III-1-3- Co-stimulation

CD28

- GP homodimérique

- exprimée de manière constitutive par les TCD4 et 50% des TCD8

Interagit avec CD80 (B7.1) ou CD86 (B7.2) des CPA (B7 = B7.1 ou B7.2)

30
 29/05/2018

III-1-3- Co-stimulation
Prévenir l’induction d’une tolérance

CD28 B7

induit un signal induit l’expression de

co-stimulateur au cours de ↗ la transcription CD152 ou CTLA-4 par le
l’activation des T des gènes LT naïfs
de l’IL-2

dans l’activation et la
prolifération

III-1-3- Co-stimulation
CD152 ou CTLA-4 (Protéine 4 associée au CTL)

- GP hétérodimérique

- Exprimée uniquement au niveau des LT activés

Interagit avec les mêmes ligands B7.1 et B7.2 des CPA

- Induit un signal d’inhibition de la prolifération lymphocytaire

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 29/05/2018

III-1-3- Co-stimulation
CD28 CD152 ou CTLA-4

LT naïf CD28

Activation + B7 CPA
Prolifération
-

LT activé CTLA-4

III-1-3- Co-stimulation
B7

Affinité +
Affinité + + +

CD28 CD152
constitutive ITAM après activation ITIM

Lymphocyte T naïf Lymphocyte T activé

ACTIVATION INHIBITION

ITAM = Immunoreceptor tyrosine-based activator motif ITIM = Immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif

32
 29/05/2018

III – Les bases moléculaires de la reconnaissance de l’antigène

Les cellules présentatrices d’antigènes

- des CPA conventionnelles: DCs, Mo-Mac

- Peptides endogènes + CMH-I → TCR des TCD8

- Peptides exogènes + CMH-II → TCR des TCD4

- des CPA non conventionnelles: LB

- Peptides exogènes + CMH-II → TCR des TCD4

III-2 – Interaction entre LB présentant l’Ag et cellule Th2

Interaction entre LB et Th

CD80/86 CD28

LB CMH II PEPTIDE TCR

Th

CD40 CD40 L

33
 29/05/2018

IL-1β TCR
CMH II
TNFα + CD4
LFA-1
ICAM 1
LFA-1 CD43
CD43 ICAM 1
CD58
Cellule B
AMPc CD48 CD2 Cellule T
CD59
+
B7 CD28

CTLA4
CD40 CD40L +

CD72 CD5

CD22 CD45RO

III-2 – Interaction entre LB présentant l’Ag et cellule Th2

LB
CD58 CMH-II/peptide B7
ICAM-1 CD40

IL-4,5,6…

LFA-1 CD2 CD40-L CD28

CD4
TCR/CD3
LT
SIGNAL 1 SIGNAL 2 SIGNAL 3

34
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CD5

- GP transmembranaire

- Exprimée sur l’ensemble des LT et certaines sous-populations de LB = B1

- Interagit avec son ligand CD72 présent à la surface des LB et délivre un

signal co-activateur des LT

CD5
Lymphocytes B
CD19, CD20, CD21, CD22, CD72, CD79, …

B1 B2
CD5+ CD5-
1 à 3% des LB du sang majorité des LB du sang
Surtout péritoine et plèvres OLS, sang et lymphe

35
 29/05/2018

CD45RO

- marqueur des cellules mémoires

- GP membranaire exprimée après stimulation antigénique du lymphocyte

naïf CD45RA+

- Interagit avec son ligand CD22 présent sur les LB et induit un signal
d’inhibition cellulaire

CD22 associé à un ITIM

CD45
LCA = antigène leucocytaire commun (tous les leucocytes)

CD45R
LCA-R = antigène leucocytaire commun restreint
4 iso-formes

CD45RA
CD45RO
T, B, NK,
Mo-Mac, DCs CD45RB CD45RC T, B, NK,
Mo-Mac, DCs
T, B, NK,
Mo-Mac, DCs, PN

36
 29/05/2018

CD40L ou CD154

- Exprimé à la surface des LT activés

- Interagit avec son récepteur CD40 présent à la surface des LB et induit:

- signal de prolifération
- commutation des gènes des chaînes lourdes
Signal 2

LT activé CD40-L CD40 LB

+ Prolifération

Expression de B7

CD40L ou CD154

La signalisation via CD40 est cruciale pour que le LB s’active

et se différencie (réponses Ac contre les Ag T dépendants).

37
 29/05/2018

CD40L ou CD154

Liaison CD40L-CD40 cruciale pour la formation de centres germinatifs

- maturation d’affinité des Ig
- commutation de classe

Muta on géné que → variant non fonc onnel du CD40L si

homozygote: Syndrome d’hyper-IgM

Liaison CD40L-CD40 cruciale pour la formation de centres germinatifs

Rate ou NL
MO
Sang

Niche de survie

Bm

Bm
B IgG
T
IgG

FDC
T
P IgG

Centres germinatifs Plasmocytes

IgM Longue durée
IgM
P IgG

- Prolifération - Switch IgA/G/E

- Différenciation - Maturation d’affinité
- Mutations - Sélection

38
 29/05/2018

Liaison CD40L-CD40 cruciale pour la formation de centres germinatifs

Différenciation en
plasmocytes IgM

Amplification
clonale

MATURATION DE
LA REPONSE Maturation
d’affinité

Signal transduit IgG

par CD40

Commutation
Centres
isotopique
germinatifs

Liaison CD40L-CD40 cruciale pour la formation de centres germinatifs

T CD8+
Anticorps (IgG)
Virus

IgM

T CD4+

3 6 9 12 15 18 48 96
Jour après infection virale
Paul: Fundamental Immunology 5th Edition

39
 29/05/2018

Question 4

FONCTION
NOM LIGAND
adhérence signal
CD4 HLA-II + +
CD8 HLA-I + +
CD2 CD58 + +
LFA1 ICAM-I + ?
CD28 B7 ? +
CTLA-4 B7 ? +
CD5 CD72 ? +
CD45 CD22 + +

III-3 – Mitogènes et superantigènes

Mitogènes

- Phytohémagglutinine (PHA): haricots rouges

- Concanavaline A (Con-A): grains de ricin

se lier aux molécules de surface comme le TCR et CD2,

déclencher leur regroupement et induire une activation.

Activation Anergie
Activation d’un ensemble de LT sans tenir
??????
compte de leur spécificité

40
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III-3 – Mitogènes et superantigènes

Superantigènes

origine surtout bactérienne

Enterotoxine staphylococcique

se lier aux molécules de HLA-II sur les APC et être reconnus par TCR:
Interaction ne s’établit qu’avec la Vβ du TCR

Activation Anergie
plusieurs clones de LT concernés
??????
ayant le même Vβ

PLAN
Introduction

I – Les molécules de présentation des antigènes

II – Apprêtement des antigènes

III – Les bases moléculaires de la reconnaissance de l’antigène

Conclusion

41