UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

CURSO: MÉTODOS DE ANÁLISIS CUANTITATIVO E INSTRUMENTAL
Espectrofotometría
I.- INTRODUCCIÓN:

La mayoría de los problemas analíticos reales comienzan con una compleja mezcla a partir de la cual es
necesario aislar, identificar y cuantificar uno o más componentes de la misma. Se pueden plantear las
siguientes cuestiones: una, de carácter cualitativo (¿de qué componente se trata?), y otra de carácter
cuantitativo (¿cuánto hay de ese componente?). Para ello, se puede utilizar el método instrumental de análisis,
como es la espectrofotometría para medir la absorción de radiación ultravioleta y visible que interactúa con la
materia (átomos y moléculas), la misma es considerada una técnica cualitativa y cuantitativa basándose en la
medición del color o de la longitud de onda de una radiación e intensidad de la misma.

II.- MARCO TEÓRICO:

2.1. Espectrofotometría:

La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y

bioquímicas. La espectrofotometría es un método analítico que utiliza los efectos de la interacción de las
radiaciones electromagnéticas con la materia (átomos y moléculas) para medir la absorción o la transmisión de
luz por las sustancias. La espectrofotometría se refiere a los métodos, cuantitativos, de análisis químico que
utilizan la luz para medir la concentración de las sustancias químicas. Se conocen como métodos
espectrofotométricos y, según sea la radiación utilizada, como espectrofotometría de absorción visible
(colorimetría), ultravioleta, infrarroja.

2.2. Principio de la Espectrofotometría

Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece ser completamente
transparente absorbe radiación de longitudes de ondas que no pertenecen al espectro visible; el agua absorbe
fuertemente en la región del infrarrojo. La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas
depende de la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química. Cuando la luz
atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto
sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz
blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas.

La espectrofotometría ultravioleta-visible utiliza haces de radiación del espectro electromagnético, en el rango

UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 700 nm , por lo que es
de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible del espectro. Al campo de
luz UV de 200 a 400 nm se le conoce también como rango de UV cercano, la espectrofotometría visible
solamente usa el rango del campo electromagnético de la luz visible, de 400 a 700 nm. Además, no está de
más mencionar el hecho de que la absorción y trasmitancia de luz depende tanto de la cantidad de la
concentración como de la distancia recorrida.

2.3. Absorción y emisión de radiación por parte de la materia.

Una descripción simplificada de la estructura de la materia permite explicar los enlaces entre los átomos para
formar moléculas en términos de la localización de ciertas partículas subatómicas, los electrones, entre esos
átomos. Esas “partículas” evidencian sus características ondulatorias ya que interactúan con la radiación

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electromagnética. La molécula en su forma estable bajo las condiciones ambientales corrientes se encuentra en
un determinado nivel energético. Si se logra hacer incidir sobre esa molécula un fotón de radiación
electromagnética con la energía apropiada, la molécula incrementa su contenido energético absorbiendo ese
fotón. Se dice entonces que la molécula pasó a un estado excitado.

La molécula energizada se encuentra en un estado que no es estable en las condiciones ambientales corrientes;
por lo tanto tiende a regresar a la condición estable y para lograrlo emite un fotón con la energía que logró
excitarla antes; por lo tanto cuando un elemento irradia energía no lo hace en todas las longitudes de onda.
Solamente en aquellas de las que está “provisto”. Esas longitudes de onda sirven para caracterizar, a cada
elemento. También ocurre que cuando un elemento recibe energía no absorbe todas las longitudes de onda,
sino solo aquellas de las que es capaz de “proveerse”. Coinciden por tanto, las bandas del espectro en las que
emite radiación con los huecos o líneas negras del espectro de absorción de la radiación, como si un espectro
fuera el negativo del otro.

2.4. Ley de Bourguer-Lambert- Beer:

Bourguer, Lambert y Beer, a través de sus observaciones establecieron relaciones de la variación de la

intensidad de luz transmitida por una muestra con el espesor de ella o con la concentración de la sustancia,
para materiales translúcidos. Estas relaciones se conocen como la ley de Bourguer-Lambert-Beer o ley
general de la espectrofotometría que permite hallar la concentración de una especie química a partir de la
medida de la intensidad de luz absorbida por la muestra.

Esta ley se puede expresar en términos de potencia de luz o de intensidad de luz, asumiendo luz
monocromática, como:

It / I0 = 10 -e bc
Donde: It, : es la intensidad de la luz transmitida por la muestra.

I0, : es la intensidad de la luz que incide sobre la muestra y que proviene de la

fuente. (Figura 1)

e, : es el coeficiente de absortividad molar en unidades de M-3. cm-1

b : es la longitud de la trayectoria del haz de luz a través de la muestra o el espesor de la celda en cm

o lo que se conoce como paso óptico.

Fig. 1: Esquema de la incidencia de la luz sobre una muestra

La relación It / I0 se conoce como transmitancia, T, y es la medida primaria que se realiza en los instrumentos
para medir la absorción de luz por parte de una muestra. Si la relación se expresa en forma porcentual,
entonces se llama porcentaje de transmitancia:

% T = 100.It / I0

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La luz absorbida sería I0 − It es decir, la diferencia entre la intensidad de la luz incidente y la intensidad
transmitida después de pasar a través de la muestra. A veces se expresa en forma porcentual, en función de la
transmitancia medida como:

Porcentaje de absorción = (Tblanco – Tmuestra) x 100 o absorbancia.

Cuando se toma el logaritmo decimal negativo de la relación It / I0, entonces:

-log It / I0 = - log T ó log I0 /It = logI0 - logIt

La relación que representa la cantidad de luz absorbida por la muestra es -log It / I0 = - log T, y recibe
el nombre de Absorbancia, y se designa con la letra A.

La ley de Bourguer-Lambert-Beer se puede entonces escribir de las siguientes formas:

 It / I0 = 10 -e bc

 -log T = e . b . c

 -log T = A = e . b . c
Donde:
C: es la concentración del soluto en moles / litro de solución.
e : es una constante denominada coeficiente de absortividad molar cuyas unidades son: cm -1 litro / mol.

b : es la longitud de la trayectoria en cm.

Se llega, entonces, a que la absorbancia es adimensional.

El coeficiente de absortividad molar “e” es función de la longitud de onda, del índice de refracción de la
solución y es característico de cada sistema soluto-solvente. Es una propiedad intensiva, que no depende de la
concentración de la sustancia y representa la absorción de luz por parte de un mol de soluto para una longitud
de onda dada.

Si no se conoce el peso molecular de la sustancia la ley de Beer se puede expresar como:

A=a.b.c
Donde “a” se denomina coeficiente de absortividad y sus unidades dependen de las unidades de
concentración utilizadas, que pueden estar en g/L o g/100mL.

El registro de la variación del coeficiente de absortividad molar e , o de la absorbancia A, o de la

transmitancia T, en función de la longitud de onda da origen a lo que se denomina "espectro" o curva
espectral.

2.5. Espectrofotómetro:

El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una
solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la
misma sustancia. Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir,
en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos

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haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. También es
utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos. Hay varios
tipos de espectrofotómetros, puede ser de absorción atómica o espectrofotómetro de masa y visuales. (Figuras
2 y 3)

Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de una muestra y
medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le una muestra y medir la cantidad de luz
que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones:

1. Dar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra

2. Indicar indirectamente qué cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en la muestra

Fig. 2: A) Esquema de un espectrofotómetro de un solo haz

B) Esquema de un espectrofotómetro de doble haz, en el cual se corrigen las

variaciones espectrales de los diferentes elementos ópticos que lo componen

Fig. 3: Espectrofotómetro UV – visible.

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La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolución se miden con un aparato denominado
espectrofotómetro, el cual consta básicamente de los siguientes componentes:

 Fuente de luz: Lámpara que emite una mezcla de longitudes de onda. La fuente de luz que ilumina la
muestra debe cumplir con las siguientes condiciones: estabilidad, direccionabilidad, distribución de
energía espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de wolframio (también
llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón y lámpara de deuterio que es utilizada en los
laboratorios atómicos.
 Monocromador: Dispositivo que selecciona luz de una única longitud de onda y aísla las radiaciones
de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz
monocromática. Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de
dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que lleva el haz de
luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa todas las
longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz
hacia la rendija de salida.
 Compartimiento de muestra: Es donde tiene lugar la interacción, R.E.M con la materia (debe
producirse donde no haya absorción ni dispersión de las longitudes de onda). Es importante destacar,
que durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su máxima expresión, con base en sus
leyes de absorción, en lo que concierne al paso de la molécula de fundamental-excitado.
 Detector fotoeléctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el desplazamiento de
electrones en el metal del detector, produciendo una corriente eléctrica que es proporcional a la
intensidad de la luz recibida. El detector, es quien detecta una radiación y a su vez lo deja en
evidencia, para posterior estudio. Hay de dos tipos:

a) los que responden a fotones;

b) los que responden al calor

 Registrador: Mide la señal del detector, la compara y genera una medida en una escala determinada.
Convierte el fenómeno físico, en números proporcionales al analito en cuestión.

Fig. 4: Cubetas de espectrofotometría. En un primer plano, dos de cuarzo aptas para el trabajo con luz
ultravioleta; en segundo plano, de plástico, para colorimetría (es decir, empleando luz visible).

2.6. El espectro electromagnético:

Desde Newton, sabemos que la luz blanca se descompone en los colores que la integran si la hacemos pasar a
través de un prisma. Es el efecto que se repite, por ejemplo en el arco iris, el cual se dice es el espectro de la
luz visible procedente del sol, son las gotas de lluvia y el aire atmosférico lo que hacen de espectroscopio. La

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principal emisión de radiación de los cuerpos es la radiación electromagnética en forma de luz visible, de la
misma manera cada elemento químico absorbe y emite luz de colores que componen su espectro.

La longitud de onda de la radiación puede ser desde muy pequeña, en el caso de la llamada radiación gamma,
hasta muy grande en las ondas de radio. Se mide, pues, usando desde nanómetros y ángstroms hasta cientos de
metros. Recordemos que un nanómetro es la milmillonésima parte de un metro (1 m = 10 9 nm) y que un
Ángstrom es la diez mil millonésima parte de un metro (1 m = 10 10 A), por lo que un nanómetro equivale a 10
Ángstrom (1nm = 10 A)

La luz que recibimos del Sol es radiación electromagnética que se desplaza a 300.000 kms/s, en su totalidad,
pero la longitud de onda no es la misma en todos los fotones luminosos, sino que varía entre los 4000 A y los
7000 A, aproximadamente, o lo que es lo mismo, entre los 400 nm y los 700 nm. La luz blanca se
descompone, en definitiva, en un espectro de diferentes bandas coloreadas, cada una definida por una longitud
de onda distinta. Así, la luz de menor longitud de onda es la luz violeta, que es de alrededor de unos 4000
Ángstroms, y la luz de mayor longitud de onda es la luz roja, que es de alrededor de unos 7000 Ámgstroms.
Sin embargo, hay radiaciones de mayor y también de menor longitud de onda, es decir, que tienen una
longitud de onda inferior a 4000 Angstroms y que tienen una longitud de onda superior a los 7000 Angstroms.

Las radiaciones que van desde el violeta al rojo se dice que forman el espectro visible, pues proceden de la
descomposición de la luz blanca. Las radiaciones de longitud de onda inferior al violeta se llaman radiaciones
ultravioletas, rayos X y rayos gamma, por orden decreciente en la longitud de onda. Las radiaciones de
longitud de onda superior al rojo son las denominadas infrarrojas, microondas y ondas de radio, por orden
creciente en longitud de onda.

Fig. 5. El espectro de la radiación

Tabla 1: Colores de luz visible

Longitud de onda de la Color absorbido Color observado
absorción máxima (nm).
380 – 420 Violeta Amarillo - verdoso
420 – 440 Azul - violeta Amarillo
440 – 470 Azul Naranja
470 – 500 Verde - azuloso Rojo
500 – 520 Verde Púrpura
520 – 550 Verde amarillento Violeta
550 – 580 Amarillo Azul - violeta
580 – 620 Naranja Azul
620 – 680 Rojo Verde - azuloso
680 – 780 Púrpura Verde

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 Tabla 2: Tipos de radiaciones e intervalos de longitudes de onda.

TIPO DE RADIACION Intervalos de las longitudes de onda

Rayos Gamma inferiores a 10-2 nanómetros

Rayos X entre 10-2 nanómetros y 15 nanómetros

Ultravioleta entre 15 nanómetros y 4.102 nanómetros

entre 4.102 nanómetros y 7,8.102 nanómetros

ESPECTRO VISIBLE
(4000 Angstroms y 7800 Angstroms)

Infrarrojo entre 7,8.102 nanómetros y 106 nanómetros

Región de Microondas entre 106 nanómetros y 3.108 nanómetros

Ondas de Radio mayores de 3.108 nanómetros

(1 metro = 102 cms = 103 mms = 109 nanómetros = 1010 angstroms)

2.6.1-La luz visible

Es una región muy estrecha pero la más importante, ya que nuestra retina es sensible a las radiaciones de estas
frecuencias. A su vez, se subdivide en seis intervalos que definen los colores básicos (rojo, naranja, amarillo,
verde, azul y violeta).

2.6.2-Radiación ultravioleta

Los átomos y moléculas sometidos a descargas eléctricas producen este tipo de radiación. No debemos olvidar
que la radiación ultravioleta es la componente principal de la radiación solar. La energía de los fotones de la
radiación ultravioleta es del orden de la energía de activación de muchas reacciones químicas lo que explica
muchos de sus efectos.

2.6.3.-La radiación electromagnética y su interacción con la materia:

Los modelos explicativos de la estructura de la materia que tienen como fundamento las características
ondulatorias de las partículas que la constituyen proporcionan un marco de referencia conveniente para
describir las interacciones entre la radiación electromagnética y la materia. Estas interacciones a su vez son el
fundamento de las aplicaciones espectroscópicas.

La energía radiante se encuentra constituida por fotones cada uno de los cuales tiene como característica una
longitud de onda. Toda la radiación electromagnética se mueve a la misma velocidad en el vacío y esa
velocidad de desplazamiento en el vacío es la máxima observada en el universo. En algún medio material, la
interacción entre los campos eléctricos y magnéticos que existen en la materia y los correspondientes de la

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radiación pueden llegar a reducir esa velocidad de propagación; por esta razón es solamente en el vacío en
donde se observa esa velocidad máxima. Si se asigna una longitud de onda característica a cada tipo de
radiación, la propagación de esa onda se hará con una frecuencia tal que al multiplicarla por su longitud debe
dar la velocidad de propagación.

Esto es: λ=c/γ, de manera que: γ=c/λ

La letra griega lambda (λ), representa la longitud de onda.

La letra griega nu (γ), representa la frecuencia de esa onda.

La letra “c” representa la velocidad de la luz en el vacío y su valor es: 2,99792458×108 m·s-1.

La radiación electromagnética que constituyen las ondas de radio de banda AM, de la frecuencia 1000 kHz
(kilohercios) tiene, en consecuencia, una longitud de 2,99792458×108 m·s-1/1,0×106 s-1 = 299,8 m. Esta onda
se convierte en señal, la cual se interpreta mediante el uso de un circuito apropiado que se encuentra en el
aparato receptor de radio.

Ondas más cortas que la referida antes son las que se interpretan con los ojos, sin ayuda de ningún traductor
construido artificialmente. La radiación electromagnética que se percibe como color rojo tiene una longitud
del orden de los 700 nm, por lo tanto su frecuencia debe ser :

2,99792458×108 m·s-1/7,0×10-7 m = 4,28×1014 s-1. Es decir 428 THz (terahercios).

La energía asociada con cada una de esas ondas, se obtiene mediante la ecuación de Planck:

E=h.v

Para las dos ondas descritas antes las energías respectivas serán:

ERF = 6,6260755×10-34 J·s×1,0×106 s-1 = 6,626×10-28 J [0,0006626 yJ (yoctoJulios)]

Eroja = 6,6260755×10-34 J·s×4,28×1014 s-1 = 2,836×10-19 J [0,2836 aJ (attoJulios)]

2.7 -Aplicaciones de la espectrofotometría visible y ultravioleta.

En bioquímica se utiliza por ejemplo para:

1. Identificar compuestos por su espectro de absorción.

2. Conocer la concentración de un compuesto en una disolución.

3. Determinar la glucosa en sangre en un laboratorio de análisis químico.

4. Seguir el curso de reacciones químicas y enzimáticas.

El espectrofotómetro es de gran utilidad en análisis cuantitativo de proteínas, en la determinación de ácidos

nucleicos incluyendo ADN / ARN, enzimas.

Determinar la cantidad de concentración en una solución de algún compuesto utilizando las fórmulas ya
mencionadas.

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Para la determinación de estructuras moleculares.

La identificación de unidades estructurales especificas ya que estas tienen distintos tipos de absorbancia
(grupos funcionales o isomerías).

Determinar constantes de disociación de indicadores ácido-base.

Colorimetría
I.- DEFINICIÓN

La colorimetría es la ciencia que estudia la medida de los colores y que desarrolla métodos para la
cuantificación del color, es decir la obtención de valores numéricos del color.

II.- PROCEDIMIENTO DE LA MEDIDA DEL COLOR

Existe una necesidad de estandarizar el color para poderlo clasificar y reproducir. El procedimiento utilizado
en la medida del color consiste sustancialmente en sumar la respuesta de estímulos de colores y su
normalización a la curva espectral de respuesta del fotorreceptor sensible al color. Como referencia, se utiliza
la curva espectral codificada de la Comisión Internacional de Iluminación, (conocida por sus siglas CIE en
francés), la llamada función colorimétrica. Debe notarse que el color es una característica subjetiva, pues solo
existe en el ojo y en el cerebro del observador humano, no siendo una característica propia de un objeto. Los
fotorreceptores del ojo humano son los conos de la retina, de los que existen diferentes tipos, con
sensibilidades diferentes a las distintas partes del espectro luminoso.

El matemático alemán Hermann Grassmann enunció unas leyes sobre la mezcla aditiva del color.1 Estas
muestran que cualquier color puede expresarse como suma de tres colores primarios, es decir, de tres colores,
cada uno de los cuales no puede obtenerse por la mezcla de los otros dos. Aplicando sus leyes, se obtiene la
denominada ecuación unitaria del color, que representada, da una forma parecida a un triángulo, el triángulo
internacional de color. El área dentro de las tres curvas que se obtienen con este procedimiento dan origen a
tres valores: las coordinadas triestímulo X, Y y Z ligadas a las coordinadas de cromaticidad x e y por
relaciones lineales. El paso de un espacio de colores a otro son datos de relaciones de transformación de
coordenadas.

2.1. Percepción

El matiz es el estado puro del color: rojo, amarillo, azul... La saturación de un color es su grado de pureza. Un
color está más saturado cuanto menor sea su contenido de grises o de blancos. Los colores de la naturaleza
siempre son más o menos saturados. La intensidad, o luminosidad de un color, es la característica que hace
que este aparezca más claro, independientemente de su saturación.

2.2. Evolución

La colorimetría ha tenido una gran expansión debido a la industria cosmética por el estudio de sombras, tintas,
polvos y colores para el cabello. En la actualidad, otra importante expansión se ha debido a los problemas de
gráficos por ordenador y a la reproducción de colores, así como por el análisis y la documentación de

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superficies antiguas, como cuadros y policromados. Utilizando técnicas para el análisis colorimétrico es
posible llegar a un análisis químico del material superficial que se está analizando, como el análisis de la
respuesta espectral.

III.- Colorímetro

Un colorímetro es cualquier herramienta que identifica el color y el matiz para una medida más objetiva del
color. El colorímetro también es un instrumento que permite medir la absorbancia de una solución en una
específica frecuencia de luz a ser determinada. Es por eso, que hacen posible descubrir la concentración de un
soluto conocido que sea proporcional a la absorbancia.

Diferentes sustancias químicas absorben diferentes frecuencias de luz. Los colorímetros se basan en el
principio de que la absorbancia de una sustancia es proporcional a su concentración, y es por eso que las
sustancias más concentradas muestran una lectura más elevada de absorbancia. Se usa un filtro en el
colorímetro para elegir el color de luz que más absorberá el soluto, para maximizar la precisión de la lectura.
Note que el color de luz absorbida es lo opuesto del color del espécimen, por lo tanto un filtro azul sería
apropiado para una sustancia naranja.

Los sensores miden la cantidad de luz que atravesó la solución, comparando la cantidad entrante y la lectura
de la cantidad absorbida. Se realiza una serie de soluciones de concentraciones conocidas de la sustancia
química en estudio y se mide la absorbancia para cada concentración, así se obtiene una gráfica de
absorbencia respecto a concentración. Por extrapolación de la absorbencia en la gráfica se puede encontrar el
valor de la concentración desconocida de la muestra.

Otras aplicaciones de los colorímetros son para cualificar y corregir reacciones de color en los monitores, o
para calibrar los colores de la impresión fotográfica. Los colorímetros también se utilizan en personas con
déficit visual (ceguera o daltonismo), donde los nombres de los colores son anunciados en medidas de
parámetros de color (por ejemplo, saturación y luminiscencia)

El color de APHA (asociación americana de la salud pública) se utiliza típicamente para caracterizar los
polímeros con respecto a la amarillez de los polímeros. El color de APHA o el número de APHA refiere a un
estándar del platino-cobalto. Los colorímetros se pueden calibrar según las soluciones estándar del cobalto del
platino y las soluciones poliméricas se pueden comparar a los estándares para determinar el número de APHA.
Cuanto más alto es el número de APHA, más el amarillo la solución polimérica.

IV.- FOTOCOLORÍMETRO

El fotocolorímetro es una variedad de colorímetro (medidor de color). Es un instrumento usado en las

Química para determinar la concentración de sustancias disueltas en líquidos o sólidos mientras sean
transparentes a la luz visible, ultravioleta o infrarroja, midiendo y comparando sus colores. La ciencia o arte
de su uso se denomina fotocolorimetría y está regida por leyes físicas muy estudiadas. Para ello se introduce
en el aparato un testigo o patrón con una concentración de sustancia conocida y la muestra a determinar. Se
mide la cantidad de color de cada uno y según su relación, se determina la concentración de la
muestra(concentración es la cantidad de sustancia disuelta en un volumen determinado de solvente).

El aparato consta de un sistema lumínico para iluminar las muestras y se mide con un sistema electrónico la
cantidad de luz que pasa. Esa luz debe ser lo más monocromática posible, por lo que se usan diversos medios
para hacerlo: filtros ópticos, redes de difracción y últimamente leds específicos. Los líquidos se colocan en
cubetas especiales y los sólidos, como el vidrio, deben estar cortados a la medida del receptáculo que se llama
portacubas, que es por donde pasa la luz, teniendo como premisa que el espesor en milímetros de la muestra y

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el testigo deben ser rigurosamente iguales. Es el equivalente al espectofotómetro pero este varía las longitudes
de onda (los diversos colores) en forma continua y el fotocolorímetro lo hace variando por pasos concretos.
Una premisa muy importante para ambos instrumentos es que el color de la luz que pasa por las muestras debe
ser del color complementario al color de la muestra cuando se hacen análisis de concentración. En rigor, casi
todo análisis de sangre, tierra, metalúrgicos o líquidos se hace con un aparato como los descriptos que pueden
ser manuales o automáticos.

Fig. 6: Clásico Fotocolorímetro de los años 1960.

V.- ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

La espectroscopia de fluorescencia , también llamada espectrofotometría o fluometría; es un tipo de

espectroscopia electromagnética, la cual analiza la fluorescencia de una muestra. Esto involucra el uso de un
haz de luz comúnmente de luz ultravioleta, que excita a los electrones en las moléculas de ciertos
componentes y causa entonces la emisión de luz; típicamente, pero no necesariamente, luz visible. Su técnica
complementaria es el espectro de absorción . El equipamiento que mide la fluorescencia es llamado
fluorómetro o fluorímetro.

La espectroscopia de fluorescencia es usada en los campos de investigación como el bioquímico, médico y

químico, entre otros, para el análisis de compuestos orgánicos. Su uso también ha sido reportado en la
diferenciación de tumores malignos y benignos en la piel. Las técnicas de espectroscopia atómica de
fluorescencia son practicadas en otros tipos de análisis, y medición de un compuesto presente en el aire, en el
agua o en otro medio, como CVAFS que es usado para la detección de metales pesados, como el mercurio.
También puede ser usado para re direccionar fotones.

BIBLIOGRAFIA

Merritt, Howard. CECSA. ed (en Español). Metodos Instrumentales de Análisis. España: CECSA.
Ewing, Galem (en inglés). Instrumental Methods of Chemical Analysis. USA: McGraw-Hill
Skoog, Douglas A. – West, James F. “QUÍMICA ANALÍTICA”, Editorial Mc Graw Hill.
Morrison – Boyd. “QUÍMICA ORGÁNICA”
http://wwwprof.uniandes.edu.co/~infquimi/ANALISIS/espectrofotometria/espectrofoto.htm

VIDEOS RELACIONADOS:

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