Marco teórico

Espectrofotometría de masas
La espectrofotometría de resonancia magnética nuclear (RMN) es de mayor importancia
en la determinación de la estructura molecular de compuestos orgánicos y
macromoléculas tanto bioquímicas como sintéticas. Ésta técnica consiste en medir la
absorción de radiación de radiofrecuencia que experimenta una muestra situada en un
campo magnético fuerte. La radiación que se utiliza esta en el intervalo de 100 MHz (la
frecuencia de FM en EE.UU.) a casi 1 GHz. Los campos magnéticos estables mas altos;
los instrumentos mas sofisticados utilizan algunos de los campos magnéticos estables
mas altos que se pueden generar (Robinson y col.,2001).
Como en otras espectroscopias, la fracción de potencia absorbida es proporcional a la
concentración de las especies absorbentes mientras que la energía de la transición se
determina a partir de las propiedades moleculares y atómicas. No obstante, en la
espectroscopia de RMN, la energía también depende de la magnitud del campo
magnético (Robinson y col.,2001).
Un instrumento de espectrometría de RMN mide el espectro de una especie atómica
cada vez. Los núcleos atómicos más comúnmente medidos son 1H, 13C, 19F y 32P. El
núcleo más comúnmente medido es, con diferencia, RMN-1H,denominada
frecuentemente RMN de protón. La RMN de protón no solo es la más medida sino que
también es, inherentemente, la mas sensible, por dos razones. En primer lugar, el protón
presenta el mayor núcleo magnético y, en segundo lugar, casi el 100% de la abundancia
isotópica natural del hidrogeno es 1H. El siguiente núcleo de RMN mas medido es el 13C.
No obstante, RMN-13C (leído como RMN de carbono trece) es intrínsecamente menos
sensible y, además, la abundancia natural de 13C -el isotopo que es activo por RMN- es
solo 1,1%. Por estas razones, un buen espectro requiere muestras enriquecidas de 13C,
muestras mas concentradas o bien tiempos de recogida de datos más largos (días). Sin
embargo, en la práctica RMN-13C es realmente útil (Robinson y col.,2001).
En RMN-1H, se utilizan generalmente disolventes que no contienen hidrogeno (por
ejemplo, CCl4) o disolventes deuterados (por ejemplo, D2O). Si no, la absorción de RMN
de protón del disolvente podría suponerse a la de la muestra. La señal del disolvente se
podría suprimir, pero entonces se perdería información (Robinson y col.,2001).

Bibliografía: Robinson K., Robinson J. (2001). Analisis Instrumental. 11:484-506

Procedimiento
Se añadió aproximadamente 5 mml del compuesto orgánico biotransformado en medio
mililitro de CDCl3 (cloroformo deuterado) en un tubo de vidrio largo que se sitúa dentro
del campo magnético del aparato. El tubo con la muestra se hizo girar alrededor de su
eje vertical de manera que el campo magnético se mantuvo constante mientras un breve
pulso de radiación excitó a todos los núcleos simultáneamente. Como el corto pulso de
radiofrecuencia cubre un amplio rango de frecuencias, los protones individualmente
absorbieron la radiación de frecuencia necesaria para entrar en resonancia, es decir,
cambiar de estado de espín. A medida que dichos núcleos vuelven a su posición inicial
emiten una radiación de frecuencia igual a la diferencia de energía entre estados de
espín. La intensidad de esta frecuencia disminuye con el tiempo a medida que todos los
núcleos vuelven a su estado inicial.
La intensidad respecto al tiempo fue leída en una computadora, que convirtió los datos
registrados en intensidad respecto a frecuencia, seguidamente en un lapso de 2
segundos se registró el espectro RMN.