1) Ao investigar um homicídio, em que a carta recebida pela vítima que fora escrita com tinta envenenada, a polícia realizou

cromatografia em papel para analisar a tinta das canetas de vários suspeitos. A ilustração a seguir mostra os resultados dessa
análise:

Quem cometeu o crime? Justifique sua resposta.

 Neusa cometeu o crime, pois a amostra de sua caneta se assemelha a das evidências.

2) No que se baseia as técnicas cromatográficas para a separação das substâncias?

 Se baseia em métodos físico-quimicos, distribuído em fase móvel (FM – liquido/gas) e fase estacionária (FE – liquido/solido).
A migração diferencial do analito entre elas ocorre pela afinidade de alguns componentes do analito pela FE e outros pela FM.

3) O que é fator de retenção? E em qual tipo de cromatografia o fator de retenção é utilizado? Qual a aplicação pratica do fator
de retenção?
 Rf é a razão entre a distância percorrida pela substancia em questão e a distância percorrida pela fase móvel.
 Mais utilizada em cromatografia CCD
 Aplicação prática é a técnica de adsorção –liquido-solido, onde a separação se da or afinidade dos componentes de uma
mistura pela fase estacionaria.

4) A cromatografia é uma técnica que pode ser usada para separar os componentes de uma mistura. Na figura a seguir, estão
representados quatro momentos da cromatografia de coluna de uma mistura de dois componentes, A e B.

Com relação aos componentes A e B da mistura, é CORRETO afirmar que:

A) são absorvidos na fase estacionária.
B) são insolúveis na fase móvel.
C) se separam devido às suas diferentes densidades.
D) têm afinidades diferentes com a fase estacionária.

5) O que é cromatografia em fase normal e fase reversa?

 Fase normal: fase estacionaria polar (sílica gel, alumina e celite)
 Fase reversa: fase estacionaria apolar

6) Quais são as principais diferenças entre a cromatografia líquida em coluna clássica e a cromatografia líquida de alta
performance?
 Cromo liquida em coluna clássica: fluxo da fase móvel sob acao da gravidade, coluna entre 2 e 10cm, sem instrumentação,
longos períodos para analise, difícil identificação e quantificaco.
 Cromo liquida de alta performance: pressão da fase móvel obtida com auxilio de uma bomba de alta pressão, coluna com 3 – 5
mm, com instrumentação, analise em minutos

7) Qual a função dos eluentes?

 Conduzir componentes da mistura pela coluna e remover o dessorver os componentes do adsorvente (FE)

8) Qual a utilidade prática de se calcular o número de pratos teóricos de uma coluna cromatográfica?
 Porque quanto maior o numero de pratos, maior o rendimento da coluna que vai proporcionar picos mais finos.

9) Quando é recomendado o uso de pré-coluna em cromatografia líquida de alta performance?

 Para proteger a fase estacionaria da coluna de separação, pois a FM estando saturada ao entrar na coluna de separação,
não ataca a FE aumentando seu tempo de uso.
10) (Enade, 2008) Visando a determinar o teor de açúcares (glicose, frutose e sacarose), um analista injetou uma amostra de
água de coco industrializada num equipamento de cromatografia líquida de alta eficiência. A análise foi realizada em coluna
Nucleosil 100-5 NH2 (fase normal), com eluente cuja composição é 25% acetonitrila e 75% água, e utilizando detector de índice
de refração. O resultado obtido é mostrado no cromatograma abaixo.

Em relação a esse experimento, pode-se afirmar que: I - a determinação do teor de açúcares poderia ser realizada por
cromatografia gasosa, pois os componentes da amostra são estáveis a altas temperaturas;
II - utilizando as mesmas condições de análise, substituindo apenas a acetonitrila por nitrometano, seriam obtidos tempos de
retenção diferentes em função da diferença de índice de refração entre os dois solventes;
III - dos açúcares contidos na amostra, a glicose é o composto menos polar e a sacarose, o mais polar; IV - das substâncias
apresentadas na tabela, somente o hexano não poderia substituir a acetonitrila no eluente.

Estão corretas APENAS as afirmações

(A) I e II
(B) I e III
(C) II e III
(D) II e IV
(E) III e IV

12) O que é uma eluição isocrática e uma eluição com gradiente?

 Isocratica: a composição da fase móvel permanece constante, separando um numero limitado de picos, separando de 10-
12 substancias (hexano).
 Gradiente: a composição da fase móvel varia durante a analise, sendo usado para separar amostras complexas.

13) Quais os cuidados com a coluna cromatográfica de um CLAE?

 Na pré-coluna deve- se remover o material particulado, no qual os solventes devem ser filtrados em filtros de 0,2um para
remover partículas solidas para que não risquem o pistao ou entupam o sistema.

14) Quais compostos podem ser analisados por CLAE e por CG?
 CLAE: compostos orgânicos, inorgânicos e biológicos.
 CG: compostos voláteis até 350°C; compostos que possam produzir derivados voláteis, compostos termicamente
estáveis nas condições de trabalho

15) Na cromatografia gasosa, o tempo de retenção é determinado por alguns parâmetros. Para duas substâncias, com peso
molecular próximo, o tempo de retenção é maior para aquela que:
a) Interagir mais com a FE
b) entrar primeiro no sistema
c) menos interagir com a FM
d) for mais polar

16) Em um cromatógrafo em fase gasosa, pode-se utilizar um injetor do tipo Split ou Splitless, explique o funcionamento
deste e as características pertinentes destes injetores.
 Split (divisor de fluxo): divide a amostra pela razão Split/vazão da coluna, geralmente de 100:1, sendo um processo de
eliminação de parte da amostra gasosa para evitar saturação da coluna (vaporização, colunas capilares, amostras com
pequena MM e baixo ponto de ebulição, e amostras com concentrações mais altas)
 Splitless (sem divisão de fluxo): colunas capilares, amostras com MM e ponto de ebulição maiores e com concentrações de
nível traco, injeção a quente

17) Quais compostos podem ser detectados pelo DIC, DCE, DCT e EM? Quais são as duas principais vantagens do uso do
detector EM?
 DIC: compostos orgânicos;
 DCE: compostos que capturam elétrons;
 DCT: amostras aquosas e orgânicas (polares ou apolares), de baixo ou elevado potencial de ionização.
 EM: compostos mássicos – coletar e arquivar espectros de massa em intervalos regulares de tempo e construir o
cromatograma.
promove bombardeio por elétrons formando ions positivos e negativos

18) A FM é a responsável pelo sucesso de separação dos diferentes compostos em um CG? Quais as características
desejáveis de uma FM em CG?
 É responsável pelo sucesso apenas se não interagir com o analito
19) Concurso público para Perito Legista da Polícia Civil. A cromatografia gasosa é uma técnica de separação que desde os
anos 70 vem sendo cada vez mais utilizada na área da toxicologia forense. Entretanto, como toda técnica, ela tem limitações
quanto ao seu emprego na fase de triagem. A princípio, para ser passível de análise por cromatografia gasosa, uma substância
precisa:
a) se degradar nas temperaturas do injetor;
b) se volatilizar nas temperaturas operacionais;
c) não conter nitrogênio na estrutura química;
d) não interagir com a fase estacionária;
e) ser volátil e estável à temperatura ambiente.

20) Explique o princípio de funcionamento dos detectores: DIC, DCT e DCE.

21) Como se pode fazer a análise qualitativa e quantitativa em CG e CLAE?

22) A cromatografia líquida de alta eficiência é uma das técnicas empregadas nas análises toxicológicas. Indique a
alternativa que não se apresenta como vantagem na aquisição do equipamento:
(A) boa sensibilidade
(B) versatilidade
(C) alta resolução
(D) resultados qualitativos
(E) baixo custo de aquisição do equipamento

23) A análise qualitativa de uma substância por cromatografia em camada delgada, realiza-se através do seu Rf (razão entre
a distância percorrida pela substância e a distância percorrida pela fase móvel). Esse parâmetro está relacionado com outro
parâmetro nas cromatografias líquidas e gasosa que é:
(A) altura do pico
(B) tempo de retenção
(C) razão entre área da substância e área do padrão interno
(D) velocidade linear do gás de arraste
(E) relação sinal/ruído

25) Para analisar um tipo de gasolina, em que se sabe que há vários compostos apolares para quantificar. É preferível
utilizar uma F.E. normal ou reversa? Por que?

26) Assinale o parâmetro cromatográfico que ao ser alterado não afeta o tempo de retenção de uma determinada
substância.
( ) temperatura do forno da coluna
( ) polaridade da F.E.
( ) vazão do gás de arraste
( ) porcentagem de F.E. no suporte sólido
( ) temperatura do detector

27) Uma amostra contendo quatro componentes originou o cromatograma a seguir:

Ao se diminuir a temperatura de análise, obteve-se o seguinte resultado:

Explique quais as possíveis causas que originaram a obtenção de cromatogramas diferentes e quais as formas de confirmar
isso.

28) No que se refere a CLAE é verdadeiro:

( ) O solvente (F.M.) é injetado sob alta pressão
( ) O analito menos polar elui primeiro que o mais polar em uma coluna de fase reversa.
( ) No detector de regiões ultravioletas a absorbância é proporcional a concentração dos analitos.
( ) Dois problemas tendem a encurtar a vida de uma coluna analítica. Primeiro, solutos que se ligam irreversivelmente à F.E.
podem degradar o desempenho da coluna e diminuir a F.E. disponível. Segundo, materiais particulados injetados com a
amostra podem entupir a coluna analítica. Para minimizar esses problemas, pode-se usar uma pré-coluna ( guard column),
posicionada antes da coluna analítica. Normalmente, essas pré-colunas contêm o mesmo material particulado empacotado e a
mesma F.E. da coluna analítica, mas são significativamente menores e de menor custo que a coluna analítica.
( ) Na eluição isocrática, a composição da F.M. permanece constante ao longo de toda a análise.

29) Explique o mecanismo de separação das cinco técnicas utilizadas em CLAE:

a) Cromatografia líquido-sólido ou por adsorção: é a partição dos solutos entre uma FE e uma FM liquida ou gás, através de
um processo físico.
b) Cromatografia líquido-líquido ou por partição: separa pela diferença de solubilidade dos componentes na FE e FM.
c) Cromatografia líquida com fase ligada: a separação ocorre pela ligação molecular especifica e reversível entre soluto e ligante
imobilizado na FE.
d) Cromatografia por exclusão: separa os componentes pelo tamanho efetivo das moléculas.
e) Cromatografia por troca iônica: a separação ocorre quando os diferenciais componentes iônicos da FE se deslocam para a
FM.

30) Faça uma comparação entre CG e CLAE, apontando as diferenças entre as duas técnicas.
 CG: FM é um gás e não pode interagir com a FE e nem com a amostra, separação de amostra com até 200 componentes, o
tempo de analise é de minutos até poucas horas, os tipos de amostra são liquidas, solidas e gasosas.
 CLAE: FM é um liquido e deve ter polaridade diferente da FE e interagir com a amostra, separação da amostra com até 50
componentes, tempo de analise é de minutos até muitas horas, os tipos de amostra são liquidas e solidas, iônicas ou
covalentes.
11) Faça um resumo sobre como funciona cada um dos sistemas cromatográficos abaixo.

A amostra é inserida no injetor e transportada pelo gás de arraste, que passa dentro da coluna e separa os componentes presentes na
amostra, sendo separados dentro da coluna capilar. Pra quantificar a amostra com concentração desconhecida, um padrão conhecido
tem que ser injetado no cromatografo, sendo que o tempo de retenção do padrão e sua área devem ser comparados com o tempo de
retenção da amostra padrão para o calculo da concentração correta.

Um volume de amostra liquida é colocado na coluna e um reagente é dispensado nela, fazendo com que os componentes da mistura se
desloquem por ela. As substâncias que tiverem maior afinidade pelo reagente vão se mover mais lentamente, e as com menor afinidade
mais rapidamente. Ao sair da coluna os componentes passam por um detector que emiti um sinal elétrico que é registrado e constrói o
cromatograma.
 24) Os dados abaixo se referem a uma coluna utilizada na CLAE:
 Comprimento da coluna 24,7cm;
 Vazão: 0,313 mL/mim;
Um cromatograma de mistura de espécie A, B,C e D forneceu os seguintes dados:

Analito Tempo de retenção (min) Largura da base do pico (min)

Não retido 3,1
A 5,4 0,41
B 13,3 1,07
C 14,1 1,16
D 21,6 1,72

Calcule:
a) O número de pratos teóricos.
b) A altura do prato para a coluna.
c) O fator de retenção.
d) A resolução.
31) Em uma análise de lactose em permeado de soro de leite bovino em pó, 44 g da amostra foi solubilizada em água, e
posteriormente esta solução passou por um tratamento para precipitação de proteínas e levou-se o volume para 250 mL. A
amostra foi filtrada e analisou-se, em triplicata, por HPLC. A triplicata apresentou área de 5,55; 5,67 e 5,50. Realizou-se uma
curva de calibração pelo método do padrão externo (Tabela 1). Qual a média, desvio padrão e a estimativa do desvio padrão
relativo (coeficiente de variação, CV), da concentração de lactose na amostra, em g.100 g-1 de amostra?

Tabela 1: Curva de calibração para análise de lactose.

[lactose] (mg/mL) Área de lactose

0 0,00
10 4,98
20 11,04
40 22,85
60 34,40
80 42,31

32) Realizou-se uma análise de quantificação de ácidos graxos por CG em uma amostra de pão de queijo enriquecido com
óleo de chia. Inicialmente os lipídios presentes na amostra foram extraídos com uma mistura de clorofórmio/metanol/água.
Após a rotaevaporação para eliminação do solvente, uma massa de aproximadamente 100 mg da fração lipídica foi derivatizada
e os esteres metílicos de ácidos graxos foram extraídos com heptano. Em seguida, realizou-se a análise por CG, e foram
encontrados os resultados apresentados na Tabela 1, em triplicata. Utilizando o método da normalização, determine a média da
porcentagem de ômega 3 (18:3n-3) na fração lipídica e na amostra, sabendo que a amostra apresentou teor de lipídios totais de
10,02%, o desvio padrão e a estimativa do desvio padrão relativo.

Tabela 1: Ácidos graxos (AG) principais encontrados na amostra e suas respectivas áreas, em triplicata.
AG Área 1 Área 2 Área 3
10:0 46705 52930 61279
12:0 55799 61896 71413
14:0 189725 209800 241695
15:0 14028 15601 18055
16:0 575960 645903 754882
17:0 10154 11552 13329
18:0 225451 257938 303706
18:1n-9 421794 476406 563062
18:2n-6 279298 313582 368090
18:3n-3 754958 851954 992471

Respostas dos exercícios com cálculo

24) NA = 2775,5 NB = 2472,04 NC = 2363,97 ND = 2523,31
pratos teóricos pratos teóricos pratos teóricos pratos teóricos

b) HA =8,9 x 10-3 cm HB = 9,9 x 10-3 cm HC = 1,04 x 10-2 cm ND = 9,8 x 10-3 cm

c) αBA = 2,46 αCB = 1,06 αDC = 1,53

d) RAB = 10,67 RBC = 0,72 RCD = 5,21

31) 5,62±0,083 g 100 g-1 de amostra; Sr = 1,48%

32) 29,3±0,058% de 18:3n-3 na fração lipídica; Sr = 0,20%

2,94±0,0058% de 18:3n-3 na amostra; Sr = 0,20%