Cinética Enzimática

UNIVERSIDAD POLITÉCNICA
SALESIANA
ENZIMOLOGÍA
UNIDAD UNO
MECANISMOS DE CATÁLISIS ENZIMÁTICA
Ing. Gilda Gordillo Vinueza MSc.

BIOQUÍMICA
1
.
2.
3.
4.
2
1. CINÉTICA ENZIMÁTICA
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas. Estos estudios proporcionan información directa
acerca del mecanismo de la reacción catalítica y de la especificidad del
enzima.
3
1.2] BIO-CATALIZADORES- ENERGÍA DE ACTIVACIÓN
Un catalizador es una sustancia que aumenta la velocidad de la reacción, sin verse
alterada en el proceso global.
La mayor cantidad de catalizadores biológicos SON ENZIMAS. Aunque no todos ellos.
La sustancia sobre la que actúa la enzima se denomina SUSTRATO.
Los biocatalizadores funcionan proporcionando un

mecanismo (alternativo) que involucra un estado de
transición diferente y una menor energía de activación.
Por lo tanto, más colisiones bio-moleculares tienen la

energía necesaria para alcanzar el estado de transición.
4
1.2] BIO-CATALIZADORES
• Los bio-catalizadores permiten reacciones que de otro modo estarían bloqueadas o
ralentizadas por una barrera cinética.
• El bio-catalizador puede aumentar la velocidad de reacción o de la selectividad.
- Los bio-catalizadores no cambian el rendimiento de una reacción.

- No tienen efecto en el equilibrio químico de una reacción, debido a que la velocidad, tanto de
la reacción directa como de la inversa, se ven afectadas.
- El hecho de que un catalizador no cambie el equilibrio es una consecuencia de la segunda
ley de la termodinámica.
• Si un catalizador cambia el equilibrio, entonces debe consumirse a medida que avanza la

reacción, y por lo tanto también es un reactivo.
5
1.2] BIO-CATALIZADORES
Los biocatalizadores se pueden considerar como intermedio

entre los catalizadores homogéneos y los heterogéneos.
• Aunque estrictamente hablando las enzimas solubles son catalizadores homogéneos

y las enzimas enlazadas a membrana son heterogéneas.
Varios factores afectan la actividad de las enzimas
• Incluyendo la temperatura, el pH, la concentración de la enzima, el sustrato y los

productos
Un reactivo particularmente importante en las reacciones

enzimáticas es el agua
• Siendo producto de muchas de las reacciones en que se forman enlaces y un reactivo

en muchos procesos en que se rompen enlaces.
6
1. ENZIMAS
1.3] FASES DE LA REACCIÓN CATALIZADA
El número de pasos en que transcurre una reacción se
conoce como el mecanismo de la reacción.
La sustancia sobre la que actúa el enzima se llama 1Un sitio de unión formado
sustrato. por los aminoácidos que
están en contacto directo
con el sustrato.
El sustrato se une a una región concreta del
REACCIÓN enzima, llamada centro activo.
CATALIZADA 2.] Un sitio catalítico,
formado por los
aminoácidos directamente
Una vez formados los productos el enzima puede implicados en el
comenzar un nuevo ciclo de reacción. mecanismo de la reacción.
7
1.3-1] COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO
MODELOS DE ACCIÓN
ENZIMÁTICA
8
1.3-1] COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO
LAS REACCIONES ENZIMA-SUSTRATO

PRESENTAN ESPECIFICIDAD
Absoluta De grupo De clase

COMPLEJO
ENZIMA-SUSTRATO
Alcanza el estado
activado y de Actúan sobre un grupo de
Un enzima, un actúan sobre
transición sustrato.
moléculas que poseen un
determinado tipo de enlace.
moléculas
(ej.: O-Glucosidasa) (Ej.: fosfatasas)
9
1. CINÉTICA ENZIMAS
2. VELOCIDAD DE LA REACCIÓN
La enzima proporciona la posibilidad de realizar la reacción con una energía de activación

menor que la que tendría la reacción no catalizada estabilizando la estructura del estado
de transición.
10
STUDY OF THERMOSTABLE RESINS FOR THE PRODUCTION OF BUTYL LEVULINATE
11
FROM FRUCTOSE AND BUTYL ALCOHOL
2.1-1.] Ecuación de la velocidad de reacción.
• Cambio de la concentración de un reactante(sustrato) o producto por unidad de tiempo.
𝑆→𝑃 𝑣𝑜 Velocidad inicial

𝑆 Concentración del sustrato
−∆ 𝑆 ∆𝑃
𝑣𝑜 = = 𝑃 Concentración del producto
∆𝑡 ∆𝑡
𝑡 Tiempo
• Frecuencia con la que las molecular reaccionan para formar un producto.

𝑆→𝑃
𝑣𝑜 Velocidad inicial
𝑣𝑜 = 𝑘 𝑆 𝑋 𝑘 Constante de velocidad en función de las condiciones de reacción.
𝑥 Orden de la reacción (Mediante experimentación)
• Considerando las dos ecuaciones tenemos:
−∆ 𝑆 𝑋
=𝑘 𝐴
∆𝑡
12
4.4.] Curva de velocidad de reacción 4.5.] G. Energía vs Avance de reacción.
13
2. VELOCIDAD DE REACCIÓN
−∆ 𝑆 𝑋
2.2 ] Orden de reacción. ∆𝑡
=𝑘 𝐴
Reacción Ecuación Orden de reacción

S⟶ P 𝑣𝑜 = 𝑘 𝑆 0
Cero
S⟶ P 𝑣𝑜 = 𝑘 𝑆 1
Primero
S+S’⟶ P 𝑣𝑜 = 𝑘 𝑆 1 𝑆′ 1 Segundo
S+ H2O⟶ P 𝑣𝑜 = 𝑘 𝑆 1 H2 O 1 Pseudo primer orden
2.3.] Ejemplo
14
2.3.] Ejemplo
15
2.3.] Ejemplo
16
2.2 ] Orden de reacción por molecularidad.
Se puede predecir la ley de velocidad para una reacción elemental (no global)
Es el producto de las constantes de velocidad por la concentración de reactivo en esa etapa.
En una reacción elemental el orden y molecularidad coinciden.
17
4.5.] EJEMPLO DE APLICACIÓN- ENZIMÁTICA

A] Considerando la siguiente reacción determinar la velocidad de reacción:
Solución:
𝑣𝑜 = 𝑘 𝐺𝑙𝑖𝑐𝑖𝑙𝑔𝑙𝑖𝑐𝑖𝑛𝑎 1 𝐻2𝑂 1
Se considera de primer orden para cada sustrato y de segundo orden para la reacción total.
18
1. CINÉTICA ENZMÁTICA
3. MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA
MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS MENTEN
Representación de Lineweaver-Burk
MODELOS-
PREPRESENTACI Representación de Eadie-Hofstee
ONES
Representación de HANES-WOOLF
Representación integrada de Michaelis Menten
19

3.1] MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS MENTEN
A] PLANTEAMIENTO DEL PROCESO
Cuando se une el sustrato S en el sitio activo de una enzima E, se forma un complejo intermediario
(ES).
Durante el estado de transición el sustrato se convierte en producto EP.
Tras un lapso breve, el producto se disocia de la enzima P+E
20
B] Consideraciones del modelo
(1) La k_1 es despreciable en comparación con la k1

(2) La velocidad de formación de ES, es igual a la velocidad de su degradación durante la mayor
parte del curso de la reacción. (Esta última premisa se denomina suposición del estado
estacionario de equilibrio dinámico)
C] Con las consideraciones se tiene
Definiendo la ecuación en función de [S] y [E].

𝑘
• Se considera la velocidad de formación de 𝐸𝑆 = 𝑘 1 𝐸 [𝑆]
_1
𝑘_1+ 𝑘2
• Se considera la velocidad de disociación de 𝐸𝑆 = 𝐸𝑆
𝑘1
Suponiendo estado estacionario
𝑘1 𝑘_1+ 𝑘2
𝐸 𝑆 = 𝐸𝑆
𝑘_1 𝑘1
𝑘1 𝐸 [𝑆]
𝐸𝑆 =
𝑘_1+ 𝑘2 21
D] Introducción de la constante de Michaelis y Menten 𝑘𝑚

𝑘_1+ 𝑘2
𝑘𝑚 =
𝑘1
𝒌𝒎 : Es la afinidad del la enzima con el sustrato
Es la concentración de sustrato donde se obtiene la mitad de velocidad máxima
A menor 𝑘𝑚 mayor es la afinidad de la enzima con el sustrato

A mayor 𝑘𝑚 menor es la afinidad de la enzima con el sustrato
E] Obtención de la ecuación de velocidad

𝑣𝑚𝑎𝑥 [𝑆]
𝑣=
𝑆 + 𝑘𝑚
𝑣𝑚𝑎𝑥 : Velocidad máxima que puede alcanzar la reacción.
22
F] Representación Grafica de la Ecuación de MM
𝑣𝑚𝑎𝑥 : Se logra cuando todos los centros activos están ocupados.
𝑣𝑚𝑎𝑥 𝑣𝑚𝑎𝑥 [𝑆]

=
2 𝑘𝑚 + [𝑆]
Simplificando.
La enzima tiene la mitad de la velocidad
𝑘𝑚 = [𝑆]
máxima a la concentración del sustrato
23
G] Consideraciones CASOS EXTREMOS
G.1 ] Concentraciones de sustrato muy pequeñas

𝑆 ≪< 𝑘𝑚
𝑣𝑚𝑎𝑥
𝑣= [𝑆]
𝑘𝑚
G.2 ] Concentraciones de sustrato muy elevadas
𝑆 ≫> 𝑘𝑚
𝑣 = 𝑣𝑚𝑎𝑥= 𝑘2 𝐸0
𝐸0 = concentración inicial de la enzima
G.3 ] Concentraciones de sustrato es igual a km

𝑘𝑚 = [𝑆]
𝑣𝑚𝑎𝑥
𝑣=
2
24
3.2.] REPRESENTACIÓN DE LINEWEAVER-BURK.
La representación de Lineweaver-Burk es una representación doble reciproca donde se puede

determinar los valores de 𝑘𝑚 y 𝑣𝑚𝑎𝑥
La ecuación de M-M la cual es una hipérbola, puede reordenarse para obtener una ecuación
reciproca.
Es una recta en la cual:

𝑘
1. La pendiente es 𝑣 𝑚
𝑚𝑎𝑥
1
2. La abscisa en el origen (1/𝑣𝑜 = 0) es 𝑘
𝑚
1
3. La ordenada en el origen (1/ [𝑆𝑜 ] = 0) es 𝑉
𝑚𝑎𝑥
25
3.3.] REPRESENTACIÓN DE EADIE-HOFSTEE
Es una ecuación lineal en la cual se determina de manera gráfica los valores de de 𝑘𝑚 y 𝑣𝑚𝑎𝑥
𝑣
𝑣 = 𝑣𝑚𝑎𝑥 − 𝑘𝑚 [𝑆]
𝒗
𝑣𝑚𝑎𝑥
𝑃𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 = −𝑘𝑚
𝑣𝑚𝑎𝑥
𝑘𝑚
𝒗
[𝑺]
26
3.4] REPRESENTACIÓN DE HANES-WOOLF
[𝑆] 𝑘𝑚 1
= + [𝑆]
𝑣 𝑣𝑚𝑎𝑥 𝑣𝑚𝑎𝑥
[𝑺]
𝒗
𝑘𝑚
𝑣𝑚𝑎𝑥 1
𝑃𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 =
𝑣𝑚𝑎𝑥
[𝑺]
-𝑘𝑚
27
3.5.] REPRESENTACIÓN DE M-M INTEGRADA
2.3 [𝑆]0 𝑣𝑚𝑎𝑥 1 [𝑆]0 𝑆
log = −𝑘
𝑡 [𝑆] 𝑘𝑚 𝑚 𝑡
𝟐. 𝟑 [𝑺]𝟎
𝒍𝒐𝒈
𝒕 [𝑺]
𝑣𝑚𝑎𝑥
𝑘𝑚
𝑃𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 = −1/𝑘𝑚
𝑣𝑚𝑎𝑥
[𝑺]𝟎 𝑺
𝒕
28
4. DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
Estudia la velocidad de las reacciones bioquímicas que son catalizadas por enzimas.
Estudio cuantitativo de la catálisis enzimática
2.1.] DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN.
La concentración de moléculas de sustrato [S]
La temperatura
DEPENDENCIA
La presencia de inhibidores
pH del medio, que afecta a la conformación (estructura espacial) de

la molécula enzimática
29

TEMPERATURA
- En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas:

por cada 10ºC de incremento, la velocidad de reacción se duplica. Esta
relación es igual para las enzimas catalíticas.
Temperatura óptima.
La temperatura a la cual la actividad catalítica es
máxima
Por encima de esta temperatura, el aumento de

velocidad de la reacción debido a la temperatura es
contrarrestado por la pérdida de actividad
catalítica debida a la desnaturalización térmica, y
la actividad enzimática decrece rápidamente hasta
anularse.
30

TEMPERATURA
Ecuación de Arrhenius :
A y Ea: son conocidos como los parámetros de Arrhenius de la reacción.
A= el factor de frecuencia o factor pre-exponencial (mismas unidades que k)

Ea= energía de activación(kJ mol-1), y es la energía cinética mínima de la colisión
necesaria para que la reacción ocurra.
T= temperatura en Kelvin
R= constante de los gases ideales(8.314 J/mol K)
k= constante de velocidad
31

TEMPERATURA
Forma logarítmica de la ecuación de Arrhenius :
ln k versus 1/T
Pendiente = –Ea/R
Ordenada= ln A 32

CONDICIONES DE PH
- Según el pH del medio, estos grupos pueden tener carga eléctrica positiva, negativa o neutra.
- Como la conformación de las proteínas depende, en parte, de sus cargas eléctricas, habrá un pH
en el cual la conformación será la más adecuada para la actividad catalítica
La mayoría de los enzimas son muy sensibles a

los cambios de pH. Desviaciones de pocas
décimas por encima o por debajo del pH óptimo
pueden afectar drásticamente su actividad.
Amortiguadores fisiológicos: Son sistemas más

o menos complejos para mantener estable el pH
intracelular.
33

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN
A.] CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO
A condiciones constantes de P y T, el cambio de

concentración en los sustratos altera directamente la
velocidad de la reacción, dando a conocer directamente
el orden de reacción.
34

B.] CONCENTRACIÓN DE ENZIMA
Cuando todos los demás factores cumplen con los requerimientos de optimización, la velocidad de la reacción
enzimática depende de la concentración de la enzima.
CASO 1] El sustrato se encuentre en gran exceso, la velocidad de reacción es directamente proporcional a la

concentración de enzima.
CASO 1] El sustrato se encuentra en concentraciones muy bajas.

Suponga que una molécula de enzima tiene la capacidad para convertir 100 moléculas de sustrato por segundo (a
25°C, al valor óptimo de pH). Si solo dispone de 1 molécula de sustrato por segundo, la velocidad de la reacción será
de 1 molécula de sustrato por segundo.
CASO 3] Si en el ejemplo del caso 2 aumentamos la concentración original del sustrato a 50 veces, la velocidad
aumenta a 50 moléculas de sustrato transformadas en un segundo.
Pero cuando hemos aumentado la concentración del sustrato a tal punto que ahora la enzima dispone de 100
moléculas por segundo, alcanza su velocidad máxima absoluta.
Si ahora se duplica la concentración, de manera que haya 200 moléculas de sustrato por segundo, no aumenta la
velocidad, ya que la molécula de enzima no puede transformar más de 100 por segundo. Se dice que la Enzima está
saturada con el sustrato.
35
3. APLICACIÓN- MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA
3.6.] EJERCICIO DE APLICACIÓN - DEBER
Ejemplo. La enzima carbónico anhidrasa cataliza la hidratación del dióxido de

carbono:
El bicarbonato resultante es transportado por el flujo sanguíneo y se vuelve a

convertir en dióxido de carbono en los pulmones. Se obtuvieron las siguientes
velocidades de reacción en función de la concentración de dióxido de carbono
usando una concentración de enzima de 2.3 mM y una temperatura de 0.5º C.
Determine Km y k2.
36

Cinética Enzimática

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MECANISMOS DE CATÁLISIS ENZIMÁTICA

Ing. Gilda Gordillo Vinueza MSc.

La mayor cantidad de catalizadores biológicos SON ENZIMAS. Aunque no todos ellos.

La sustancia sobre la que actúa la enzima se denomina SUSTRATO.

Los biocatalizadores funcionan proporcionando un

Por lo tanto, más colisiones bio-moleculares tienen la

• El bio-catalizador puede aumentar la velocidad de reacción o de la selectividad.

- Los bio-catalizadores no cambian el rendimiento de una reacción.

• Si un catalizador cambia el equilibrio, entonces debe consumirse a medida que avanza la

Los biocatalizadores se pueden considerar como intermedio

• Aunque estrictamente hablando las enzimas solubles son catalizadores homogéneos

Varios factores afectan la actividad de las enzimas

• Incluyendo la temperatura, el pH, la concentración de la enzima, el sustrato y los

Un reactivo particularmente importante en las reacciones

• Siendo producto de muchas de las reacciones en que se forman enlaces y un reactivo

LAS REACCIONES ENZIMA-SUSTRATO

Absoluta De grupo De clase

(ej.: O-Glucosidasa) (Ej.: fosfatasas)

La enzima proporciona la posibilidad de realizar la reacción con una energía de activación

• Cambio de la concentración de un reactante(sustrato) o producto por unidad de tiempo.

𝑆→𝑃 𝑣𝑜 Velocidad inicial

• Frecuencia con la que las molecular reaccionan para formar un producto.

Reacción Ecuación Orden de reacción

En una reacción elemental el orden y molecularidad coinciden.

4.5.] EJEMPLO DE APLICACIÓN- ENZIMÁTICA

3. MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA

MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS MENTEN

Representación integrada de Michaelis Menten

3. MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA

A] PLANTEAMIENTO DEL PROCESO

(1) La k_1 es despreciable en comparación con la k1

Definiendo la ecuación en función de [S] y [E].

3. MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA

D] Introducción de la constante de Michaelis y Menten 𝑘𝑚

A menor 𝑘𝑚 mayor es la afinidad de la enzima con el sustrato

E] Obtención de la ecuación de velocidad

𝑣𝑚𝑎𝑥 : Velocidad máxima que puede alcanzar la reacción.

3. MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA

F] Representación Grafica de la Ecuación de MM

𝑣𝑚𝑎𝑥 : Se logra cuando todos los centros activos están ocupados.

𝑣𝑚𝑎𝑥 𝑣𝑚𝑎𝑥 [𝑆]

3. MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA

G] Consideraciones CASOS EXTREMOS

G.1 ] Concentraciones de sustrato muy pequeñas

G.3 ] Concentraciones de sustrato es igual a km

3. MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA

3.2.] REPRESENTACIÓN DE LINEWEAVER-BURK.

La representación de Lineweaver-Burk es una representación doble reciproca donde se puede

Es una recta en la cual:

3. MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA

3.3.] REPRESENTACIÓN DE EADIE-HOFSTEE

3. MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA

3.4] REPRESENTACIÓN DE HANES-WOOLF

3. MÉTODOS PARA DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA

3.5.] REPRESENTACIÓN DE M-M INTEGRADA

4. DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

2.1.] DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN.

La concentración de moléculas de sustrato [S]

pH del medio, que afecta a la conformación (estructura espacial) de

4. DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

- En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas:

Por encima de esta temperatura, el aumento de