ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA SANITARIA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
HORA: 13:30 - 15:30
TEMA: TRANSPORTE ELECTRONICO: ESTUDIO DE LA ACCION
ENZIMATICA DE LA SUCCINATO DESHIDROGENASA Y DE LACTATO
DESHIDROGENASA

SEMESTRE:

AREQUIPA – PERÚ
 TRANSPORTE ELECTRONICO: ESTUDIO DE LA ACCION ENZIMATICA
DE LA SUCCINATO DESHIDROGENASA Y DE LACTATO
DESHIDROGENASA

OBJETIVO
1. Poner de manifiesto experimentalmente una de las etapas del metabolismo
intermediario y la acción de las enzimas de oxido-reducción, haciendo uso de un
aceptor de electrones como el azul de metileno.

2. Verificar la acción inhibitoria del malonato sobre la succinato deshidrogenasa y del

cianuro a nivel de la cadena respiratoria mitocondrial.

INTRODUCCIÓN

Las transformaciones biológicas de sustratos comprenden procesos de oxido-

reducción y transferencia de electrones a través de una serie de sistemas enzimáticos.

En las oxido-reducciones se produce transferencia de electrones a partir de un dador

hasta un aceptor. Algunas veces el transporte de electrones es realizado mediante la
transferencia de átomos de hidrógeno o bien átomos de hidrógeno y un electrón. Las
enzimas que realizan este tipo de reaccione son las deshidrogenasas pudiendo ser piridin
(NAD, NADH) o flavina (FAD) dependientes; además existen los citocromos que son
de naturaleza ferroporfirínica y se encuentran ordenados de acuerdo a su potencial de
oxido reducción constituyendo la llamada "Cadena de Transporte Mitocondrial".

Algunos compuestos orgánicos coloreados, al aceptar hidrógenos se convierten en

leucoderivados. Tal es el caso del azul de metileno cuyo potencial de oxido-reducción es
+0.01 y el 2,6-diclorofenolindofenol cuyo potencial de oxido-reducción es +0.22.

La succinato deshidrogenasa (SHD) es una flavoproteína unida a hierro no hémico. El

metal tiene como finalidad actuar como enlace para conservación de energía y desacoplar
los dos equivalentes reductores del ion hidrogeno aceptado por la flavina y, finalmente
estabilizar la forma semiquinoide de la flavina.

Diversas sustancias pueden actuar inhibiendo los sistemas biológicos de oxido-

reducción. Por ejemplo, el malonato actúa específicamente inhibiendo a la succinato
deshidrogenasa por un mecanismo competitivo; por lo tanto la prueba experimental con
azul de metileno será negativa, es decir no se decolora por no haber movilización de
electrones. El cianuro, actúa impidiendo la reoxidación de los citocromos, pues se
combina específicamente con el Fe++ de la citocromo oxidasa; por ello los citocromos
permanecen reducidos e incapaces de seguir actuando y se bloquea la respiración.
MATERIALES

 Sucrosa 0.25 M
 Succinato de sodio 0.1 M
 Malonato de sodio 0.5 M
 Buffer fosfato pH 7.4 0.1 M
 Azul de metileno 0.05%
 Aceite mineral
 Tubos de ensayo
 Pipetas
 Morteros
 Centrífuga
 Gradilla

PARTE EXPERIMENTAL

METODO DE TRABAJO
-Preparación del homogenizado. Colocar un mortero sobre hielo picado, luego pesar
10.0 g. de hígado, corazón o músculo de rata o de conejo; picarlo y colocarlo sobre
el mortero. Añadir 90.0 ml de sucrosa 0.25 M la cual debe estar fría, homogenizar y
luego centrifugar a 8000 rpm durante 10 min. Decantar el sobrenadante en un beaker
y guardarlo e frío hasta su uso.

Figura 1: se utilizó hígado de un cuy para la experimentación

 Prepare el siguiente sistema de tubos:

Tubo N° 1 2 3 4
Succinato de sodio 0.1 - 0.5 0.5 0.5
Buffer fosfato pH 7.4 2.0 2.0 2.0 2.0
Malonato de sodio - - 0.5 -
Cianuro de potasio 0.1 M - - - 0.5
Agua destilada 1.5 1.0 0.5 0.5
Azul de metileno 0.05% 0.5 0.5 0.5 0.5
Extracto enzimático 0.5 0.5 0.5 0.5
Aceite mineral 1.0 1.0 1.0 1.0

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

 Se colocaron succinato de sodio a los tubos 2,3 y 4 ( el succinato es el sustrato)

 Se tomaron cuatro tubos de ensayo a los cuales se les añade Buffer fosfato pH 7.5
 luego se añadirá malonato de sodio solo al tubo de ensayo N° 3 (0.5)
 colocamos un poco de aceite con la finalidad de que el medio se asemeje a la matriz
mitocondrial, ya que representa a un sistema donde no hay oxigeno

El contenido de cada uno de los

tubos se mezcla rápidamente antes de
agregar el aceite mineral, el cual tiene la
función de crear un medio libre de
oxígeno. Llevar a baño maría a 37°C
observar el decoloramiento de cada tubo
cada 5 min. Discuta los resultados.
CONCLUSIONES

 En el hígado se almacena glucógeno como material de reserva.

 Al no a ver sustrato, no habrá reacción, y al no haber reacción no se producirán
las moléculas reductoras entonces no se dará la cadena transportadora de
electrones.
 Se demostró una de las etapas del metabolismo y la acción de las enzimas de
oxido-reducción, haciendo uso de un aceptor de electrones como el azul de
metileno.
 Se verifico la acción inhibidora del malonato sobre la succinato deshidrogenasa
y del cianuro a nivel de la cadena respiratoria mitocondrial.

BIBLIOGRAFIA

 Bioquímica (Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer)

 Biología molecular del gen (James D. Watson, Tania A. Baker, Stephen P. Bell,
Alexander Gann, Michael Levine, Richard Losick)