LABORATORIO DE BIOQUIMICA

RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS I y II

JULIETH VANESSA GARAY MARTINEZ

MIGUEL ANGEL DORIA

JOSE GREGORIO CASTRO

DOCENTE

CLARA MILENA BARRAGÁN

UNIVERSIDAD DE SUCRE

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

PROGRAMA DE ZOOTECNIA

11/JUNIO/2019
 INTRODUCCION

Los carbohidratos se presentan en forma de azúcares, almidones y fibras, y son

uno de los tres principales macronutrientes que aportan energía al cuerpo
humano (los otros son los lípidos y las proteínas). Actualmente está comprobado
que al menos el 55% de las calorías diarias que ingerimos deberían provenir de
los carbohidratos.
Los carbohidratos, hidratos de carbono ó glúcidos constituyen compuestos
químicos formados principalmente por carbono, hidrógeno y oxígeno, elementos
que se conjugan para formar diversos tipos, en una proporción generalmente de
1:2:1, respectivamente. Estas biomoléculas ejercen funciones fundamentales en
los seres vivos, como: soporte (celulosa), reserva de alimento (almidón), reserva
energética (glucógeno), energía inmediata (glucosa).
Pueden clasificarse atendiendo a varios criterios: de acuerdo al número de
monómeros que constituyen al carbohidrato, al número de carbonos de sus
monómeros, según el grupo funcional que posee ese monómero, y estos a su
vez pueden ser identificados cualitativamente por diferentes ensayos y
determinar su poder reductor por el grupo carbonilo que tienen en su molécula,
entre esos están: Pruebes de Fehling, Tollens, Benedict, Seliwanoff, Molisch, que
fueron las pruebas que se utilizaron en la practica realizada.
Precisamente para demostrar lo anteriormente dicho se asistió al laboratorio e
identificar y estudiar la estructura, propiedades, funciones y clasificación de los
diferentes carbohidratos.
 MATERIALES Y REACTIVOS

Para la realización de esta práctica fue necesario utilizar:

 10 tubos de ensayos, en los cuales colocamos soluciones al 2% de

Glucosa, Fructosa, Lactosa, Sacarosa, Extracto de jugo y Agua para que
reaccionaran con:
 Reactivos de Molisch
 Solución de Benedict
 Reactivos de Fehling
 Solución de Seliwanoff
 Reactivo de Tollens
Se utilizó 1 beaker de 500 ml, el cual sirvió para llevar a cabo el baño de
María y así observar la reacción de las soluciones con ciertos reactivos.
Al igual se hizo uso de una gradilla y una pinza para tubos de ensayo, con los
materiales anteriormente mencionados se pudo realizar una buena práctica
de laboratorio y enseñar de esta manera el presente informe.
 RESUMEN

El laboratorio consistió en el reconocimiento de carbohidratos con ayuda de unas

sustancias como molisch, benedict, fehling, Seliwanoff y tollens.
. En la práctica fueron tomados varios tubos de ensayos donde se les agregaba
un mililitro de cada carbohidrato (glucosa, lactosa, sacarosa, fructosa y un jugo
natural). En cada una de las experiencias exceptuando la prueba de molisch fue
necesario la utilización de baño maría para agilizar las reacciones.
En el caso de molisch fue necesario agregarle acido sulfúrico un mililitro para
que este pudiera reaccionar.
Para cada una de estas sustancias al ser agregadas a cada carbohidrato
pudimos observar reacciones diferentes, es decir, reacciones exotérmicas,
cambios en las coloraciones con tonos desde amarillos, naranjas, rojos, hasta
colores plateados.
 RESULTADOS Y ANALISIS

Molisch: se tomo las muestras de cada carbohidrato en los diferentes tubos de

ensayos, luego agregamos un mililitro de acido sulfúrico, teniendo en cuenta que
no agitar esta preparación. Observando lo sucedido se noto en el fondo del tuvo
de ensayo una coloración morada y en la superficie una tonalidad piel,
posteriormente fue notorio la formación de un anillo violeta, lo cual indica que la
prueba es positiva, además la reacción que se genero en los diferentes tubos de
ensayos fue una reacción exotérmica ya que hubo una liberación de calor.

carbohidrato Reacción de molisch

Glucosa Anillo violeta
Fructosa Anillo violeta
Sacarosa Anillo violeta
Jugo Anillo violeta
Agua Anillo violeta

Benedict: se le agrego a cada tubo de ensayo glucosa, fructosa, lactosa,

sacarosa y extracto de juego, se le agregaron cinco gotas de del reactivo de
benedict y lo sometemos a calentamiento por baño maría durante tres minutos,
observándose que cada compuesto se torna amarillo el extracto de jugo y la
fructosa se torna naranjado y el único carbohidrato que mantiene su coloración
es la sacarosa debido a que esta tiene enlaces glucosidicos fuertes, por lo tanto
es difícil romper estos enlaces para pueda reaccionar fácilmente.

La reacción será no reductora si la muestra no cambia de color (-), como es el

caso del jugo y la sacarosa. Y la reacción será reductora si la muestra se vuelve
de color naranja o rojo, como la glucosa, fructosa y lactosa.

carbohidrato Coloración positivo Negativo

Glucosa Naranjado X
Fructosa Naranjado X
Lactosa Naranjado X
Sacarosa Azul X
Jugo Amarillo X

Fehling: marcamos los 5 tubos de ensayo, y agregamos en cada uno de ellos

cuatro gotas de fehling notamos que el jugo se torno de un color verde, los
demás (sacarosa, fructosa, glucosa, lactosa) torna de un color azul, se
sometieron a baño maría durante tres minutos, se noto que el jugo torno color
amarillo puro, la fructosa, lactosa y glucosa de un color naranjado y la sacarosa
de un color verde oscuro.

La reaccion sera positiva si la muestra se vuelve de color rojo ladrillo, es decir la

glucosa, fructosa y la lactosa y la reaccion sera negativa si la reaccion cambia a
un color verdoso, es decir, la sacarosa.

carbohidrato coloracion Positivo Negativo

Glucosa Rojo ladrillo X
Fructosa Rojo ladrillo X
Lactosa Rojo ladrillo X
Sacarosa vardooso X

Seliwanoff: la formación de un color amarillo ocapaco da como resultado una

reacción positiva, es decir, el jugo. La reacción será negativa si las muestran
cambian a un color transparente, como la glucosa y fructosa.

Carbohidrato Coloración Positivo Negativo

Glucosa Transparente X
Fructosa Transparente X
Jugo Amarillo X

Tollens: se tomo tres tubos de ensayo con muestras de sacarosa, glucosa y

fructosa, se le agregaron gotas del reactivo de tollens.

El reactivo de tollens mas los carbohidratos fueron sometidos a un baño maría,

reaccionando solamente la sacarosa y glucosa, mientras que la fructosa no
reacciona.

carbohidrato Coloración positivo Negativo

Fructosa Transparente X
Sacarosa Naranja X
Glucosa Naranja X

Hidrólisis de la sacarosa: en tres tubos de ensayos se adiciono

Tubo 1: 1 ml de sacarosa al 1% p/v + 10 gotas de agua
Tubo 2: 1 ml de sacarosa al 1% p/v + 10 gotas HCl al 25% v/v
Tubo 3: 1 ml de sacarosa al 1% p/v + 10 gotas de NaOH AL 10% P/V
Tubo 4: 1 ml de sacarosa mas 10 gotas de HCL, se dejo reposar y se le agrego
0.5 ml de NaOH

Se calienta hasta ebullición con un tiempo de cinco a ocho minutos,

posteriormente, se realizo para cada tubo la prueba de fehling con una
alícuota del volumen.

Prueba de fehling

Soluciones coloracion positivo Negativo

Sacarosa + agua rojo naranja X
Sacarosa + HCl No presenta X
ningun cambio
Sacarosa + Azul claro X
NaOH
Sacarosa + HCl Azul claro X
+ NaOH
 A los resultados que dieron positivo de la prueba de la prueba de fehling se
realiza la prueba de seliwanoff:

soluciones coloracion positivo Negativo

Sacarosa + agua Amarillo naranja X
Sacarora + Amarillo naranja X
NaOH
Sacarosa + HCl Azul claro X
+ NaOH

ENSAYO DE LUGOL PARA POLISACARIDOS:

Se coloco en un tubo de ennsayo 1 ml de solución de almidon al 1% y se le
agrego 0,2 ml de lugol.

solucion coloracion positivo Negativo

Almidon + lugol Azul oscuro X

El almidón es un polisacárido, que al realizarle la prueba de lugol arroja un

resultado positivo por la presencia de yodo en esta sustancia que reacciona solo
a temperatura ambiente.

HIDRÓLISIS DEL ALMIDON:en un tubo de ensayo se coloco 2ml de solución de

almidon de 1% p/v con 1 ml de HCl concentrado se calienta hasta ebullición
durante 10 minutos, se enfria el tubo hasta alcanzar una temperatura ambiente
luego se le añade NaOH concentrado.
A 1 ml de la solución anterior se le hace el ensayo de lugol y a 1 ml de almidon
tratado se le hace el ensayo de fehling

compuesto reactivo coloracion Cambio

Almidon + HCl + Fehling Azul claro No
NaOH
Almidon + HCl + lugol Amarillo claro si
NaOH
AISLAMIENTO DEL QUITINA: Se diluye cierta cantidad de quitina en agua
destilada, se pudo notar un precipitado blanco, luego se le raliza el ensayo de
lugol y no se noto ningún cambio, debido a que no se diluyo adecuadamente la
quitica.

1. Explique cual es el fundamento de cada uno de los ensayos

utilizados para la identificación de carbohidratos.

 PRUEBA DE MOLISCH:
La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto
por la reacción de Molisch, que a cierto punto es la reacción universal
para cualquier carbohidrato. Se basa en la acción hidrolizante y
deshidratante del ácido sulfúrico sobre los hidratos de carbono. En
dicha reacción el ácido sulfúrico cataliza la hidrólisis de los enlaces
glucosídicos de la muestra y la deshidratación a furfural (en las
pentosas) o hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales se
condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch (reacción de
Molisch) dando un producto coloreado.

 REACCIÓN DE FELHING

El reactivo está formado por dos soluciones llamadas A y B. La primera es una

solución de sulfato cúprico; la segunda, de hidróxido de sodio y una sal orgánica
llamada tartrato de sodio y potasio (sal de Seignette).

Cuando se mezclan cantidades iguales de ambas soluciones, aparece un color

azul intenso por la formación de un complejo formado entre el ion cúprico y el
tartrato. Agregando un aldehído y calentando suavemente, el color azul
desaparece y aparece un precipitado rojo de óxido cuproso (Cu2O).

La reacción, en forma simplificada, puede representarse así:

SE OXIDA

+1 +3

R – C = O + 2Cu2- + 5 OH ------------ R – C = O + Cu2O + 3 H2O

H O-

+2 +1

SE REDUCE

Las cetonas no dan esta reacción.

 REACCIÓN DE SELIWANOFF

Los carbohidratos se clasifican como cetosas o aldosas. Vale decir, que las
cetosas en el carbono 2 tienen una función cetona, que en presencia de un ácido
fuerte producen rápidamente derivados furfúricos que reaccionan con un difenol
llamado resorcina que está contenido en el reactivo de Seliwanoff. La sacarosa
(un disacárido formado por glucosa y fructosa) y la inulina (un polisacárido de la
fructosa) dan positiva la reacción, ya que el HCl del reactivo provoca en caliente
la hidrólisis del compuesto liberando fructosa (responsable de la reacción
positiva).
  REACCIÓN DE TOLLENS:

El reactivo se prepara por adición de hidróxido de amonio a una solución de

nitrato de plata, hasta que el precipitado formado se re disuelva. La plata y el
hidróxido de amonio forman un complejo (Ag (NH3)2OH, plata diamino), que
reacciona con el aldehído. La reacción esquematizada puede representarse:

SE OXIDA

+1 +3

R – C = O + 2 Ag 1+ + 3OH- -------- R – C = O + 2Ag + 2H2O

H +1 O 0

SE REDUCE

El agente oxidante es el ion Ag+1. Esta reacción provocada sobre la superficie

de un cristal, permite la formación de una capa de plata metálica que convierte la
lámina de cristal en un espejo.

HIDRÓLISIS DE SACAROSA

La sacarosa es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres por lo

que carece de poder reductor y la reacción con el licor de Fehling es negativa.
Sin embargo, en presencia de ClH y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es
decir, incorpora una molécula de agua y se descompone en los monosacáridos
que la forman, glucosa y fructosa, que sí son reductores. La prueba de que se ha
verificado la hidrólisis se realiza con el licor de Fehling y, si el resultado es
positivo, aparecerá un precipitado rojo. Si el resultado es negativo, la hidrólisis no
se ha realizado correctamente y si en el resultado final aparece una coloración
verde en el tubo de ensayo se debe a una hidrólisis parcial de la sacarosa.
Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y
yoduro, permite reconocer polisacáridos, particularmente el almidón por la
formación de una coloración azul violeta intensa y el glicógeno y las dextrinas por
formación de coloración roja.

HIDRÓLISIS DEL ALMIDON:

La hidrólisis implica la ruptura de un enlace mediante la adición en medio del
mismo de los elementos del agua. Los polisacáridos de la dieta se metabolizan
mediante hidrólisis a monosacáridos.
La mayoría de los pasos de la degradación de almidón a glucosa pueden ser
catalizados por tres enzimas distintas, si bien hay otras más que se necesitan
para completar el proceso. Las tres primeras enzimas son una ð−amilasa,
ð−amilasa y almidón fosforilasa. Al parecer solo la ð−amilasa puede atacar
gránulos de almidón intactos, por lo que cuando participan la ð−amilasa y la
almidón fosforilasa, es probable que actúen sobre los primeros productos
liberados por la ð−amilasa. La ð−amilasa ataca de manera aleatoria enlaces 1,4
en las moléculas de amilosa y amilopectina, al principio creando huecos al azar
en los granos de almidón y liberando productos que aun son grandes. En
cadenas de amilosa no ramificadas, el ataque repetido por la ð−amilasa produce
maltosa, un disacárido que contiene dos unidades de glucosa. Sin embargo, la
ð−amilasa no puede atacar los enlaces 1,6 localizados en los puntos de
ramificación de la amilopectina, por lo que la digestión de amilopectina cesa
cuando aun quedan dextrinas ramificadas con cadenas de longitud corta.
Muchas ð−amilasas son activadas por Ca+, lo cual es una de las razones por las
que el calcio es un elemento esencial.
QUITINA:

La quitina es un polisacárido que se encuentra ampliamente distribuido en la

naturaleza, constituyendo el segundo polímero más abundante después de la
celulosa. Está constituida por moléculas de —N-acetil-D-glucosamina, con
enlaces (3 (>4) y forma parte del caparazón de crustáceos, moluscos, insectos y
otros seres vivos, defendiéndolos del contacto con el medio externo.

Este compuesto natural ha despertado un gran interés en los investigadores

debido a que anualmente se obtienen en el mundo grandes volúmenes (120000
toneladas) de quitina de los residuos de mariscos (que tienen de un 14-35% de
quitina asociado con proteínas) y además por el problema medioambiental dado
por su lenta degradación. El resultado de estas investigaciones ha sido
satisfactorio por el aprovechamiento de la quitina y la quitosana en la aplicación
de las industrias farmacéutica, alimenticia, cosmética, entre otras.
 CONCLUSIONES

Del informe presentado se puede concluir que:

 Además de reconocer si un compuesto pertenece a la familia de los
carbohidratos, es necesario diferenciar si se trata de un monosacáridos
tipo aldosa o cetosa, si es fácilmente oxidable o no, es decir si es un
azúcar reductor o no lo es.
 Los azúcares que dan resultados positivos con las soluciones de
Tollens, Benedict ó Fehling se conocen como azúcares reductores, y
todos los carbohidratos que contienen un grupo hemiacetal o hemicetal
dan pruebas positivas.
 CIBERGRAFIA

 http://www.slideshare.net/enpbiologia/identificacin-de-carbohidratos-
presentation
 http://www.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/orga
nica/guia_7_carbohidratos.pdf
 http://carbohidratos.soy.es/