Biodegradación de polietileno por Enterobacter sp.

D1 de la tripa de la polilla de cera Galleria mellonella

Resumen: Los polímeros plásticos son ampliamente utilizados en la agricultura, la industria

y nuestra vida diaria debido a Sus propiedades convenientes y económicas. Sin embargo,
la contaminación causada por polímeros plásticos, especialmente polietileno (PE), afecta
tanto a la salud animal como a la humana cuando se agregan al medio ambiente, Ya que
no se degradan fácilmente en condiciones naturales. En este estudio, Enterobacter sp. D1
era Aislado de las entrañas de la polilla de cera (Galleria mellonella). Colonias microbianas
formadas alrededor de una película de PE Después de 14 días de cultivo con D1. Se
detectaron asperezas, depresiones y grietas en la superficie de la película de PE mediante
microscopía electrónica de barrido (SEM) y microscopía de fuerza atómica (AFM). Fourier
La espectroscopia infrarroja de transformación (FTIR) mostró la presencia de grupos
funcionales carbonilo y éter. Grupos en la película de PE que fue tratada con D1.
Cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem. (LC-MS) también reveló que
los contenidos de ciertos alcoholes, ésteres y ácidos se incrementaron como resultado del
tratamiento D1, lo que indica que se produjo una reacción de oxidación en la superficie de
la película de PE tratada con las bacterias D1. Estas observaciones confirmaron que la
bacteria D1 tiene la capacidad de degradar el PE.

1. Introducción
Los polímeros plásticos tienen ventajas de ductilidad, durabilidad y bajo costo, y se usan
comúnmente en Películas agrícolas y envasado de alimentos. Sin embargo, la contaminación plástica
representa una grave amenaza para los animales. y la salud humana. Los mircroplásticos son de
particular preocupación, ya que los microplásticos se depositan en aguas acuáticas. ambientes, y los
microplásticos ingeridos por aves marinas o peces se acumulan en sus estómagos, lo que Puede
causar la muerte [1,2]. Además, la potencial acumulación de microplásticos en la cadena
alimentaria. eventualmente podría tener efectos adversos en la salud humana [3–5]. La
incineración, el vertido y el reciclaje de residuos plásticos son costosos y pueden causar daños
secundarios. contaminación [1,6]. El desarrollo de plásticos biodegradables en los últimos años
podría frenar la Acumulación de plásticos en el medio ambiente, pero no elimina completamente la
contaminación ambiental.en la fuente [7,8]. La biodegradación, un método ecológico de
degradación, es el proceso mediante el cual los materiales orgánicos se descomponen o se
descomponen en compuestos más pequeños, incluyendo CO2 y H2O, por acción microbiana
El proceso de biodegradación se puede dividir en cuatro etapas: (a) las células crecen
firmemente En la superficie del material plástico y producen grupos hidrófilos; (b) los
hidrocarburos de cadena larga son oxidados o hidrolizados en cadenas cortas por enzimas
producidas por la población microbiana, y una nueva se forma un enlace agregado; (c) los
polímeros de cadena corta se descomponen en ácidos grasos; (d) graso los ácidos se
oxidan y se descomponen en H2O, CO2 y humus [9,10].
Existen crecientes intereses de investigación en la biodegradación de polímeros plásticos.
Polietileno (PE), el polímero plástico más utilizado, es un polímero sintético de alto peso
molecular que contiene una estructura de hidrocarburo saturado lineal, que puede expresarse
como - [CH2-CH2] n- [11]. La demanda para PE representó alrededor del 30% del total de
polímeros plásticos en 2017, y la producción mundial anual de PE es de aproximadamente
140 millones de toneladas [12,13]. Desde principios de la década de 1970, los investigadores
han investigado la biodegradación de PE y se encontraron ciertas cepas que degradan el PE,
como Bacillus, Pseudomonas, Staphylococcus, Streptococcus, Streptomyces,
Brevibacterium, Nocardia, Moraxella, Penicillium y Aspergillus
del suelo, marinos y lodos en condiciones naturales [1,13–15]. Sin embargo, la fuerte
hidrofobicidad, La alta energía de enlace químico y el alto peso molecular del PE dificultan
su degradación eficiente por la mayoría cepas, especialmente en un corto período de tiempo
[16]. Se ha demostrado que la degradación del PE por los hongos Penicillium simplicissimum
y Nocardia asteroides podrían tardar varios meses o incluso más [17].
Recientemente, Yang Jun et al. informó que la PE podría ser degradada significativamente
por microorganismos de la Polillas indias, y dos cepas, Enterobacter asburiae YT1 y Bacillus
sp. YP1, fueron aislados. Después de una incubación de 60 días, aproximadamente el 6% y
el 11% de una película de PE se degradó por YT1 e YP1, respectivamente [11]. Estos
resultados indican que los insectos podrían ser una fuente prometedora para obtener PE
degradante. microorganismos. Del mismo modo, Paolo Bombelli et al. encontró que había
92 mg pérdida de masa de un PE bolsa de compras después de la exposición a ~ 100 gusanos
de cera, y se produjo etilenglicol durante 12 horas [18]. No obstante, aún se necesitan más
estudios para identificar microorganismos específicos que desempeñan un papel clave en la
La degradación de la EP. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue examinar los
microorganismos que degradan el PE de las entrañas de la polilla de cera (Galleria
mellonella), y la eficiencia y mecanismos de degradación se determinaron adicionalmente
utilizando microscopía electrónica de barrido (SEM) acoplada a un dispersor de energía
espectroscopia (EDS), microscopía de fuerza atómica (AFM), espectroscopia infrarroja de
transformada de Fourier (FTIR), y cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem
(LC-MS).
2. Materiales y métodos
2.1. Larvas de polilla de cera y polilla de cera
La película de PE se compró a SINOPEC Beijing Yanshan Company en Beijing, China. El PE La película
se cortó en un cuadrado de 40 mm x 40 mm, se desinfectó con etanol al 75% y se secó al aire, y
luego se usó como la única fuente de carbono para el crecimiento de microorganismos en un matraz
de agitación o en un plato. Las larvas de la polilla de la cera se recolectaron en granjas de abejas
naturales en Beijing y se criaron en Shanxi Universidad de Agricultura (con cera de abejas como
alimento principal). La cera de abejas, como fuente de alimento para la cera. La polilla es un "plástico
natural" con una estructura química similar a la del PE. Por lo tanto, la polilla de cera puede ser Se
utiliza para cribar los microorganismos que "alimentan" el plástico PE.
2.2. Medio
El medio basal líquido en el que PE era la única fuente de carbono (LPEM) contenía (por 1000 ml):
0.7 g de KH2PO4, 0.7 g de K2HPO4, 0.7 g de MgSO4 · 7H2O, 1.0 g de NH4NO3, 0.005 g de NaCl, 0.002
g de FeSO4 · 7H2O, 0,002 g de ZnSO4 · 7H2O y 0,001 g de MnSO4 · H2O, según la norma ASTM
(ASTM G22-76) [19]. Se preparó un medio sólido de agar de fuente libre de carbono (APEM)
añadiendo 15 g. Agar hasta 1000 ml de medio basal líquido. El medio de caldo nutritivo líquido (LNB)
fue preparado por Disolver 3 g de extracto de carne, 10 g de triptona bacteriológica y 5 g de NaCl
en 1000 ml de desionizado. Agua y luego el pH se ajustó a aproximadamente 7.0. Se preparó el caldo
nutriente sólido (SNB). añadiendo 15 g de agar a 1000 ml de LNB. La solución salina fisiológica se
preparó disolviendo 8,5 g de NaCl en 1000 ml de agua desionizada, y luego el pH se ajustó a
aproximadamente 7.0. Todos los medios fueron Esterilizada en autoclave a 121 ◦C durante 20 min
2.3. Muestra microbiana
Las larvas de polilla de cera se sumergieron en etanol al 75% durante aproximadamente 1
minuto para la desinfección, y luego Las tripas de las larvas se diseccionaron y se colocaron
en un tubo de centrífuga de 50 ml y se lavaron con esterilizado. Solución salina fisiológica
tres veces. Luego, se agregaron 40 ml de solución salina fisiológica estéril. Mediante vórtice
para obtener un homogeneizado intestinal. El homogeneizado intestinal se utilizó para
cribar Microorganismos que degradan el PE.
2.4. Cribado de cepas de degradación de PE
El homogeneizado intestinal se inoculó en el LPEM (que contenía 1% de PE) y se cultivó a
37 ◦C (220 r / min). Después de 31 días, la solución bacteriana se recubrió en el medio SNB
y Cultivado durante 12 h. Las colonias cultivadas en la placa se consideraron colonias de
selección primaria para Bacterias que degradan el PE.
2.5. Prueba de Biodegradación e Identificación de Cepas Degradantes de PE
Las colonias de selección primaria se inocularon en el LNB durante 12 h. Las células fueron
recogidas por Centrifugación a 12.000 r / min y enjuagada con solución salina fisiológica
estéril, que se repitió tres veces. Tiempos para eliminar el medio residual. Luego, las células
se resuspendieron con solución salina fisiológica estéril. La suspensión obtenida se inoculó
en el LPEM y se aplicó una lámina de PE al 5% (40 mm x 40 mm). adicional.
Simultáneamente, se recubrieron 500 uL de suspensión sobre el APEM y se cubrieron con
la lámina de PE (40 mm × 40 mm). También se ensayó un control en blanco, sin inoculación
de líquido bacteriano. Había Tres réplicas para cada muestra. Todos los matraces de
agitación y el medio sólido se mantuvieron a 37 ◦ C (220 r / min) Durante 31 días. La
densidad óptica a 600 nm (OD600) del matraz de agitación se controló regularmente
durante El período de cultivo. El ADN genómico se extrajo de la solución bacteriana
mediante tratamiento con proteinasa K y fenol-cloroformo. La secuencia de 16S rDNA se
amplificó utilizando cebadores universales 27F (50 - AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-30 ) y
1492R (50 - GGTTACCTTGTTACGACTT-30 ). El obtenido Las secuencias se enviaron al
GenBank del Centro Nacional de Información Biotecnológica (NCBI). base de datos y
alineado utilizando la herramienta de búsqueda Herramienta de búsqueda básica de
alineación local (BLAST, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/).

2.6. Observación de SEM y AFM.

La película de PE se recuperó del matraz de agitación después del cultivo, y luego se colocó en el
Tubo de centrífuga que contiene agua estéril y se agita en un mezclador vortex de acuerdo con los
métodos de Yang Jun et al. [11]. La película de PE seca se cortó en trozos de 5 mm y se recubrió con
oro. La superficie Los contenidos de topografía, biopelículas y átomos del PE tratado con microbios
o no tratados se observaron bajo
SEM (Carl Zeiss NTS GmbH, Jena, Alemania) junto con EDS (Oxford Instruments, Abingdon,
Oxfordshire, Reino Unido). La película de PE recuperada se lavó con dodecil sulfato de sodio acuoso
al 2% p / v (SDS) para eliminar completamente el biofilm adherido a la superficie de PE y se seca
durante la noche [20]. La superficie La topografía fue observada por AFM (Dimension Icon, Veeco,
Billerica, MA, EE. UU.) a una velocidad de escaneo de 1.0 Hz.
2.7. Análisis de la espectroscopia
La caracterización de los grupos funcionales de la superficie de la película de PE se determinó por
FTIR (Nicolet iN10MX, Nicolet, Madison, WI, EE. UU.). El campo de visión del microscopio FTIR fue
de 400 µm × 400 µm,y la exploración se realizó en un tamaño de paso de 10 µm bajo una presión
de contacto de 3 MPa. La absorbancia osciló entre 4000 cm − 1. a 650 cm − 1 con una resolución de
escaneo de 4 cm – 1 para el FTIR.
Se realizó un escaneo de fondo cada vez antes de escanear la muestra, y la muestra final El espectro
se restó del valor de escaneo de fondo.
2.8. Detección de productos solubles en agua.
La solución de cultivo de 31 días del matraz de agitación se centrifugó a 12.000 r / min durante 10
minutos a obtener el sobrenadante El sobrenadante de 30 ml se liofilizó y se volvió a disolver en 1
ml de 50% de etanol y se centrifugó nuevamente a 12,000 r / min durante 10 minutos después de
realizar una ecografía durante 10 minutos. Luego, se utilizaron 2 µL de sobrenadante para LC-MS
(AB Sciex TripleTOF® 5600+, AB SCIEX, Redwood, CA, USA) análisis. Los productos de degradación
fueron detectados por LC-MS equipado con un WatersTM. HSS T3 (150 × 3 mm, 1,8 µm, Waters,
Milford, MA, EE. UU.) A 100–1500 m / z. La temperatura de la columna fue de 35 ° C y el caudal fue
de 0.300 mL / min durante la operación.

2.9. Análisis estadístico

Todos los experimentos se realizaron por triplicado, y las desviaciones estándar se presentaron
como el error Barras en las figuras 1a y 2a. Las variables medias y la desviación estándar fueron
analizadas por estadística. Programa de Ciencias Sociales (SPSS 20.0, Chicago, IL, EE. UU.).

Figura 1. El crecimiento de bacterias D1 en el medio en el que una película de polietileno (PE) fue el
único fuente de carbono. (a) Los cambios de densidad óptica a 600 nm (OD600) durante el cultivo
de 31 días.(b) Turbidez de la solución de bacterias D1. (c) Placa del grupo de control que contiene
película de PE sin D1.(d) Colonias D1 que crecen alrededor de la película de PE en el medio sólido de
agar de fuente libre de carbono (APEM
Figura 2. Fotografías SEM de película de PE no tratada y tratada con D1 y análisis de
contenido de átomos en La película de PE. (a) Cambios en el porcentaje de átomos de
carbono y oxígeno en la superficie de la película de PE después de una Incubación de 31
días. (b) El grupo de control sin bacterias D1 (5000 ×). (c) El D1 en la superficie de PE
después de 31 días de cultivo bajo una lente de bajo aumento (5000 ×). (d) El D1 en la
superficie de PE después de 31 días de cultivo bajo una lente de gran aumento (20000 ×).

3. Resultados y discusión
3.1. Cribado de cepas de degradación de PE
Después de un cultivo de 31 días, se seleccionaron cuatro cepas que podrían crecer en el
LPEM que contenía El 5% de PE (Figura S1 y Tabla S1), y una cepa, D1, se seleccionó
específicamente porque tenía una mejor Tendencia de crecimiento cuando el PE era la
única fuente de carbono. El crecimiento de la cepa D1 fue analizado en base a los cambios
de OD600, como se muestra en la Figura 1a. Cuando la cepa D1 se cultivó durante 7 días
en el LPEM. (con un 5% de PE), la OD600 de la solución de bacterias alcanzó el valor más
alto (0.24) y se mantuvo constante a partir de entonces, mientras que la OD600 del control
(sin bacterias D1) no cambió sobre la Curso de 31 días. En consecuencia, al final del cultivo,
el fluido bacteriano inoculado con D1 era más turbio que el matraz de agitación de control
(Figura 1b). Adicionalmente, la colonización de D1 fue Observado alrededor de la película
de PE en el APEM el día 14 del cultivo (Figura 1c, d). Cuando el ensayo de degradación se
cultivó durante 14 días, se observó la colonización de D1 alrededor de La película de PE
en la APEM. Este resultado fue similar al observado por Yang et al. [21]. Las observaciones
de líquido bacteriano turbio y colonias bacterianas formadas confirmaron la utilización de
fuentes de carbono por cepa D1. Además, se observaron cambios constantes de OD600
cuando se cultivó la prueba de degradación Durante 31 días. Se podría inferir que D1 se
adaptó a las condiciones de nutrientes del medio durante el Período de cultivo. La
adaptación microbiana al PE es un factor clave para la biodegradación. El estudio presente
mostró que las cantidades de bacterias D1 adheridas a la película de PE aumentaron
gradualmente con la extensión de cultivo. Por lo tanto, D1 podría ser potencialmente eficaz
para degradar la EP. Alineación de secuencias de BLAST mostró que la cepa D1 podría ser
Enterobacter sp. (GenBank número de acceso MK934326). La degradación de la PE puede
verse afectada por las interacciones entre los microorganismos. El PE comercial podría ser
degradado por Bacillus licheniformis y Lysinibacillus bacterium. simultáneamente [22]. La
mezcla de Citrobacter sp. y Kosakonia sp. fue capaz de degradar PE y poliestireno (PS)
[23]. Por lo tanto, también estamos considerando agregar otras cepas de degradación para
prueba de degradación.

3.2. Determinación del efecto de degradación.

Las características de degradación de la PE generalmente se determinan mediante un
analizador termogravimétrico (TGA), Difracción de rayos X (XRD), cromatógrafo de gases /
espectrómetro de masas (GC / MS), SEM, AFM y FTIR [24]. En términos generales, la
determinación de la pérdida de peso es un método relativamente simple que se utiliza para
detectar Sin embargo, la degradación de la PE puede no ser lo suficientemente sensible en
condiciones de largos períodos de tiempo. de incubación y lentitud de biodegradación [25].
Por lo tanto, no se realizó ninguna prueba de pérdida de peso en este estudio.

3.2.1. Micromorfología de superficie y porcentaje atómico

Después de una incubación de 31 días, la morfología de la superficie y los cambios estructurales de
la película de PE fueron observado por SEM y AFM. La Figura 2 muestra que la morfología de la
superficie de la película de PE fue cambiada por D1, pero la superficie del control permaneció lisa y
no se observaron microorganismos (Figura 2b).
La Figura 2c muestra que D1 se adhirió a la superficie de la película de PE durante el período de
crecimiento. La microbiana La morfología se observó más claramente con un gran aumento (Figura
2d). Una biopelícula incompleta de Colonia D1 formada en la superficie de PE después de 31 días de
cultivo (Figura 2d). Analisis de elemental los cambios en la superficie de PE por SEM junto con EDS
(SEM-EDS) mostraron que el porcentaje de oxígeno los átomos en el grupo D1 fueron mayores que
los del grupo de control después de una incubación de 31 días; la el porcentaje de la masa del átomo
de carbono se redujo en 1.98%, y el porcentaje de la masa del átomo de oxígeno se incrementó en
1.98% en comparación con el control (Figura 2a, Tablas S2 y S3). Estos resultados indicó que la
reacción de oxidación se produjo en la superficie de PE. Comparado con el grupo control (Figura 3a),
aparecieron depresiones obvias en la superficie de la película de PE en el grupo D1 (Figura 3b), y la
superficie de la película de PE fue erosionada por D1. Además, aparecieron grietas en los microbios
tratados. Película de PE (Figura 2b), que podría estar relacionada con los cambios en la estructura
física de la película de PE Durante el periodo de biodegradación.
Figura 3. Topografía física de la película de PE sin tratar (a) y tratada con bacterias D1 (b)
por fuerza atómica microscopia (AFM).
Los resultados de SEM y AFM respaldaron los hallazgos, incluido el efecto de D1 en la película de PE
Desde la perspectiva de la morfología microbiana y la rugosidad, las depresiones y las grietas
aparecieron. en la superficie de PE. En particular, la biopelícula se observó en la superficie de la
película de PE. Ha sido mostrado que la unión microbiana y la formación de biopelículas facilitaron
el contacto de PE con enzimas microbianas secretado por D1, lo que hace que el largo enlace
carbono-carbono sea más susceptible a la oxidación [20,23,26]. Tribedi y Sil informaron sobre la
formación de biofilm por Pseudomonas sp. Cepa AKS2 durante la degradación. de polietileno [27].
La biopelícula estable AKS2 mejoró el nivel de hidrofobicidad de una película de PE, lo que aceleró
la tasa de degradación del PE [28]. De hecho, es útil ver la progresión del crecimiento bacteriano y
monitorear la estructura de PE a Diferentes tiempos [29,30]. Con base en los hallazgos actuales,
observaremos la morfología superficial de la EP. películas en diferentes épocas de cultura para
analizar más a fondo cómo se forma y cambia la biopelícula; también lo haremos analizar y verificar
la degradación del PE por otras cepas del intestino de la polilla de cera en trabajos futuros.

3.2.2. Cambios en la estructura química de la superficie de la película de PE

Se utilizó FTIR para analizar las composiciones químicas de la superficie de PE para
ayudar a evaluar la aparición de biodegradación. El espectro infrarrojo de la superficie de
PE inoculada con D1 durante 31 días mostró un pico de absorción a 1652 cm − 1 y 1075
cm − 1 Correspondiente a grupos carbonilo (-C = O) y éter. grupos (-C-O-C-),
respectivamente (Figura 4). Además, los picos de absorción a 730 cm − 1 , 1435.78 cm −
1 , y se observaron 1450 cm − 1 independientemente de si la superficie de PE se trató con
la cepa D1 o no. La presencia del grupo carbonilo y éter indicó la escisión o formación de
nuevos enlaces que podrían Promover la oxidación del PE. Se informó previamente que la
aparición de grupos carbonilo en la El espectro es una indicación de la biodegradación de
PE [24]. Es posible que la estructura química del PE se debilitó debido a la vibración
esquelética durante el cultivo, en base a los resultados que tanto el el grupo tratado y el
grupo de control tuvieron una absorbancia intensiva de alrededor de 730 cm − 1 . La
apariencia de bandas de aproximadamente 1450 cm − 1 se debieron a las vibraciones de
flexión C-H en la columna vertebral de la cadena larga de PE.
Figura 4.
Distribución de las bandas carbonilo (-C = O, 1652 cm − 1) y grupos éter (-C-O-C-, 1075
cm − 1) observado con un microscopio FTIR en la película de PE tratada con D1 durante
31 días.

Un átomo de hidrógeno en un largo enlace carbono-carbono podría ser reemplazado por

un átomo de oxígeno, y grupos funcionales tales como un grupo carbonilo, un grupo éster
o un grupo éter formado. Estas Los grupos funcionales contienen oxígeno cuando el PE se
oxida. Los informes también han demostrado que algunos Grupos clásicos como los grupos
C-H, los grupos -C = O, los grupos -C-O-O y los grupos -CH2 en general corresponden a
picos de absorción a 3000–2840 cm − 1 , 1730–1650 cm − 1 , 1150–1075 cm − 1 , y 900–
735 cm − 1 , respectivamente [17,31,32]. Incrementos en las cetonas y dobles enlaces
aportan evidencia de polietileno. La biodegradación, según Balasubramanian et al. [33]. En
el presente estudio, la detección de El carbonilo y el éter en la película de PE incubada con
D1 demostraron que se produjo la reacción de oxidación. Se ha demostrado que la
oxidación de PE mejoró la hidrofilicidad y, en última instancia, facilitó la EP. biodegradación
[34-36]. Algunos tratamientos previos, como la fotooxidación, el tratamiento térmico y el
ácido tratamiento, se ha demostrado que acelera la oxidación y degradación del PE [37]

3.2.3. Análisis de productos solubles en agua.

Los productos solubles en agua de la solución resultantes de los 31 días de cultivo de la
película de PE. Fueron analizados por LC-MS. Los compuestos eluidos contenían casi
todos los elementos C, H y O. Significativo Se encontraron diferencias en la abundancia, lo
que sugiere que los compuestos fueron diferentes entre los dos grupos (figura 5a). Los
compuestos que incluyen alcoholes, ésteres y ácidos aumentaron significativamente. en el
grupo tratado con D1 comparado con el grupo control (Tabla S4). El contenido de
etildodecanoato. y el 6-metil-5-hepten-2-ol en el grupo D1 fue 4 veces mayor que el grupo
control (Figura 5b). Se detectaron varios compuestos, como el ftalato de monobencilo y el
ácido N-acetilglutámico. considerados como compuestos recién formados en el grupo D1,
mientras que no se detectaron en el control grupo (figura 5b). Los alcoholes, alcanos,
hidrocarburos, ésteres y ácidos son detectados por LC-MS, que refleja la Metabolismo de
las bacterias durante la biodegradación del PE [38]. El ftalato de monobencilo es el principal
metabolito. de ftalato de butilbencilo (BBP). Especulamos que la producción de ftalato de
monobencilo fue causada. por algunas oxidorreductasas secretadas por la cepa
Enterobacter sp. y el mecanismo de oxidación específico fue más estudiado. El estudio
actual mostró que el enlace carbono-carbono de cadena larga de PE era oxidado durante
el período de cultivo, dados los resultados que muestran que los alcoholes, ésteres y ácidos
se incrementaron significativamente. Aunque el grupo control y el grupo tratado con D1
compartían algunos compuestos, Sus contenidos fueron significativamente diferentes. Las
diferencias se atribuyeron a la utilización de nitrógeno. y fuentes de carbono por
microorganismos en el medio y se produjo la fotooxidación de la película de PE durante el
cultivo [21,25,38]. Además, algunos otros compuestos como el ácido N-acetilglutámico
podrían ser los productos metabólicos secundarios secretados por la cepa D1 cuando se
utiliza PE para crecer. Estas las diferencias en los compuestos podrían ayudar a demostrar
que la cepa D1 degradaba el PE [21]

Figura 5. Detección de productos solubles en agua por LC-MS al final de los 31 días de cultivo. (a)
Comparación de la abundancia de compuestos eluidos en la misma M / Z entre el grupo de control
y El grupo tratado con D1. (b) Se observó una mayor abundancia de ácidos, ésteres y alcoholes en
el Grupo tratado con D1 comparado con el grupo control.

Actualmente, hemos detectado inicialmente la producción de alcoholes, alcanos, hidrocarburos,

ésteres, y ácidos. El mecanismo de biodegradación de la EP es complejo e implica la participación
de varios Oxidoreductasas. Se ha informado que la biodegradación de PE por enzimas microbianas
es mucho más Eficiente en relación con los microorganismos [39]. Los estudios han demostrado que
las enzimas extracelulares eran capaces de atacar y modificar películas de PE y que el sistema de
mediador de lacasa podría disminuir el Mw de polietileno de 242,000 a 28,300 por 3 días [40,41].
Sin embargo, las enzimas degradantes que han sido Los estudios generalmente tienen poca
estabilidad y el mecanismo de biodegradación del PE sigue siendo limitado en el literatura. Por lo
tanto, sería de gran interés identificar las enzimas de microorganismos que pueden degradar
eficientemente la PE, e investigar posibles mecanismos subyacentes a la degradación enzimática.

4. Conclusiones y perspectivas de futuro.

En este estudio, la cepa Enterobacter sp. D1 se seleccionó a partir del homogeneizado de
tripa de la cera polilla utilizando PE como la única fuente de carbono. Un análisis posterior
confirmó que el PE podría ser degradado por la cepa D1. Como fuente de carbono, los
microorganismos no utilizan fácilmente los materiales de PE en comparación con La
glucosa y el extracto de carne, debido a sus particularidades estructurales (hidrofobicidad,
alto peso molecular, etc.). La investigación actual muestra que el efecto de degradación
deseable de la PE no se logró a nivel de Nivel de laboratorio independientemente de
microbios o enzimas degradantes. Este es un reto para nosotros para continuar Estudiar el
efecto de degradación de Enterobacter sp. en la educación física. En nuestros estudios
futuros, planeamos utilizar los siguientes métodos para mejorar potencialmente la
tasa de degradación: (1) adición de otras cepas de degradación de PE al medio de cultivo
para posibles efectos sinérgicos; (2) adición de surfactantes (como Tween-80, aceite
mineral o aceite de parafina) a la medio de cultivo para mejorar potencialmente la
hidrofilicidad de la superficie de PE y acelerar la formación de biopelícula; (3) tratamiento
previo (radiación ultravioleta, tratamiento con ácido, etc.) de la película de PE; y (4) mutación y
domesticación de las cepas degradantes.