“Prácticas de análisis de laboratorio microbiológicos;

determinación de coliformes totales y fecales”

Trabajo que será presentado como aporte del integrador, en el

presente ciclo académico.

Nombres: Andrés Ávila; Jean Balarezo; Juan Sarmiento; Franklin Sari;

Francisco Noguera

Facilitador: Ingeniera Fabiola Uday.

Facultad: Ingeniería, industria y construcción.

Ciclo: 7mo “A”

Periodo: Marzo, 2019 – Agosto, 2019

1. Objetivo específico.

 Ante una muestra de agua de consumo y mediante la técnica de tubos múltiples

con diferente concentración de la muestra se cuantificará los coliformes totales y

fecales.

 Colectar muestras de agua provenientes de diferentes casas de la parroquia

Sinincay del Cantón Cuenca.

 Determinar el NMP de: microorganismos coliformes, Escherichia coli presuntiva

y la prueba confirmativa

 Realizar un informe que indique la calidad microbiológica del agua abastecida a

la parroquia Sinincay.
 2. Marco teórico

Las bacterias del grupo coliformes se utilizan desde el inicio del siglo XX como

indicadoras de contaminación fecal. Fueron definidas siempre como bastoncillos gram

negativos, no formadoras de esporas, que pueden crecer en presencia de sales biliares o

de otros agentes tensoactivos y que fermentan la lactosa a 37°C, con producción de ácido

(ácidos orgánicos y aldehidos) y gas en 24 horas.

En las heces, están en la concentración de 108 − 1010 microorganismos por gramo.

(Cazares & Alcantara, 2014)

Tradicionalmente los coliformes son clasificados en un grupo denominado coliformes

totales y dentro de este existe un subgrupo conocido como Coliformes Fecales. (Cazares

& Alcantara, 2014)

Los coliformes totales son clasificados como bacilos gram negativos aerobios y

anaerobios facultativos no esporulados que fermentan la lactosa con producción de ácido

y gas después de incubación durante 24-48 horas a 35°C. Incluye los géneros Citrobacter

spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp., en este último se encuentra la E. coli, exclusiva

de heces animales homeotérmicos.

Los coliformes fecales constituyen un subgrupo de los coliformes totales, y se diferencian

de los anteriores por ser tolerantes a temperaturas más altas, creciendo a 44.5°C, (APHA,

1995). Se denominan termotolerantes por su habilidad de soportar temperaturas más

elevadas. (Cazares & Alcantara, 2014).

La toma de muestras se realizó en la parroquia Sinincay del Cantón Cuenca, con sus

respectivas coordenadas, hora de la toma de la muestra y fecha.

Figura 1 Parroquia Sinincay.

Representada en la siguiente tabla.

Coordenadas
N° muestra Hora X Y FECHA
1 9:55 720134 9683737 12/6/2019
2 10:06 710042 9684012 12/6/2019
3 10:22 720445 9684012 12/6/2019
4 10:33 720420 9684469 12/6/2019
5 10:54 720454 9684756 12/6/2019
6 11:06 720595 9684721 12/6/2019
7 11:12 720660 9684721 12/6/2019
8 11:01 720540 9684820 12/6/2019
9 11:18 720777 9684711 12/6/2019
10 11:39 720840 9684577 12/6/2019
11 11:44 720825 9684588 12/6/2019
12 12:04 720785 9684550 12/6/2019
13 11:21 719505,5 9683728,63 12/6/2019
14 11:37 719677,52 9683738,3 12/6/2019
15 11:10 719233,211 9683614,65 12/6/2019
16 11:30 719582,8 9683797,9 12/6/2019
17 11:43 719950,67 9683686,56 12/6/2019
18 11:00 719028 9683722,5 12/6/2019
19 9:48 719465,961 9688684,45 12/6/2019
20 10:01 719747,132 9683540 12/6/2019
21 10:26 719571,945 968345449 12/6/2019
22 10:33 719712,881 9683719,07 12/6/2019
 23 10:40 7193832 9553529,32 12/6/2019
24 10:52 719081,5 9683683,7 12/6/2019
25 9:30 720064,938 9683683,2 12/6/2019
26 10:00 720206,593 9683500,28 12/6/2019
27 10:30 720134,235 9683349,07 12/6/2019
28 11:00 720230,056 9683132,87 12/6/2019
29 11:30 720518,406 9682899,00 12/6/2019
30 12:00 720542,671 9682783,38 12/6/2019
Tabla 1 Muestreo

3. Equipo.

• Incubadora a 35 °C ± 0.5 °C.

• Termobano a 44.5 °C ± 0.2 °C.

• Mechero de Bunsen.

4. Reactivos

• Agua de peptona

• Verde brillante

• Agar EMB

• Medio EC

• Agua de dilución

• Solución de hipoclorito de sodio 2000ppm / etanol 70% (germicida)

5. Materiales

• Pipetas serológicas de 10 mL

• Pipetas serológicas de 5 mL

• Pipetas serológicas de 1 mL

• Tubos de cultivo

• Tubos de dilución

• Campanas de Durham

• Guantes de latex

• Cubrebocas
 6. Procedimiento. (por la técnica del número más probable (NMP)

Todo se realiza con material estéril y bajo condiciones de seguridad bajo la campana de

flujo laminar y entre mecheros de gas tipo bunsen.

Se lava la mesa de trabajo y se aplica una solución de hipoclorito de sodio al 1% para

reducir la carga microbiana, trabajar en la campana de flujo laminar o en el cuarto de

siembra bacteriológico con mecheros tipo bunsen.

Antes de iniciar el análisis, mezclar perfectamente la muestra de agua agitándola de

manera vigorosa para lograr una distribución uniforme de los microorganismos, se

procede como sigue:

A. Preparación de la solución de agua de dilución y de los diferentes medios

de cultivo: El responsable del área se encargará de preparar las soluciones

conforme al procedimiento.

B. Para la realización de esta práctica se analizarán las muestras tomadas en

la práctica de muestreo en sinincay.

C. Análisis de la muestra.

D. Solicitar instrucciones de la ingeniera a cargo del laboratorio.

E. Al realizar el análisis, las muestras deben estar a temperatura ambiente, no

obstante, se optó por prender los mecheros para no contaminar las

muestras con las bacterias del aliento de los practicantes.

F. Se desinfecto el área de trabajo y los instrumentos con alcohol.

G. Etiquetar perfectamente cada uno de los tubos de manera que no haya

posibilidad de confusiones posteriores mediante cinta y rapidografo.

H. Inocular los tubos con caldo con una concentración y 10 mL de muestra

cada uno.
I. Inocular tubos con 1 mL de la muestra de cada uno.

J. Inocular tubos con caldo concentración sencilla con 0.1 ml. De la muestra

de cada uno.

K. Hacer la siembra en los tubos conteniendo el medio de cultivo Caldo poner

las campanas y eliminar las burbujas en las campanas para un buen

desarrollo de la práctica.

L. Incubar durante 48 horas a 35 ± 0.5°C y anotar en la bitácora de la

incubadora.

M. Cuantificar los tubos positivos identificándolas por su color amarillo y/o

producción de gas en la campana para identificar muestra contaminadas

con coliformes

N. Anotar en los resultados

O. De los tubos positivos de Caldo Lactosa Verde Brillante Bilis (BLVB)

confirmativa, sembrar por estría cruzada una placa de agar Eosina Azul de

Metileno (EMB).

P. Sembrar una vez este desinfectados los instrumentos y dejar 48h

Q. Cuantificar los positivos y anotar en los formatos de la prueba

confirmativa, los mismos que serán identificados mediante un dorado

brillante.
 7. Resultados. Según su concentración

NUMERO DE 1:10 1:100 1:1000

MUESTRA

1 x x x

2 x x x

3 x x x

4 x x x

5 x x x

6 x x x

7 x x x

8 ✔ x x

9 x x x

10 x x x

11 ✔ ✔ ✔

12 x ✔ ✔

13 x x x

14 ✔ ✔ ✔

15 x x ✔

16 x x x

17 x x x
 18 ✔ ✔ ✔

19 x x x

20 x x x

21 x x x

22 ✔ x x

23 x x x

24 x x x

25 x x x

26 x ✔ x

27 ✔ ✔ ✔

28 x x x

29 ✔ x ✔

30 ✔ ✔ ✔

Tabla 2 Resultados.

Según los resultado obtenidos en el laboratorio después de seguir correctamente el

debido proceso para la obtención de coliformes y e.coli, las muestras de agua tomadas
en la parroquia Sinincay dieron positivo:

NUMERO DE 1:10 1:100 1:1000

MUESTRA

8 ✔ x x

11 ✔ ✔ ✔

12 x ✔ ✔

14 ✔ ✔ ✔

18 ✔ ✔ ✔

22 ✔ x x
 26 x ✔ x

27 ✔ ✔ ✔

29 ✔ x ✔

30 ✔ ✔ ✔

Un total de 10 muestras dieron positivo a coliformes y e.coli según nuestro análisis de

laboratorio dando un 33.33% positivo de las muestras recolectadas en la parroquia
Sinincay del Cantón Cuenca.

8. Conclusiones

Con base a las pruebas realizadas en el laboratorio se informa que el agua que abastece

en la parroquia Sinincay del Cantón Cuenca no reúne las condiciones microbiológicas

para considerarse potable, ya que todas presentan un NMP de coliformes y Eschrerichia

coli lo que indica que el agua está contaminada con materia fecal.

Para evitar las infecciones gastrointestinales causadas por la contaminación que llega a

través del suministro de agua potable de la Junta en diferentes sectores de la parroquia y

otros directamente desde ETAPA EP es necesario:

• Informar a la Junta Parroquial y a la población sobre la calidad microbiológica de agua

que suministra la red municipal, para que tomen las medidas que corresponden.

• Revisar tuberías de la red de agua potable para verificar que estas no se contaminen con

aguas residuales provenientes del sistema del drenaje o que tengan fisuras, roturas o se

encuentren en mala calidad las tuberías de la red.

• Que cada vecino hierva el agua para su uso y consumo.

9. Bibliografía
10. Anexos.