I) HOJA DE DATOS

1) Preparación de la solución Stock Patrón de Nitrato (100ppm-(NO3-N)

Peso de KNO3=0.1819g Volumen Fiola utilizada = 0.25L (Se enrazo hasta un Vol. de 0.25L con A. Dest)
Título de la solución Stock = 100.86 ppm
2) Preparación de Solución Intermedia de Nitrato (5ppm –(NO3-N))

Volumen Usado de la solución Stock= 5 mL Volumen Fiola utilizada = 0.1L (Se enrazo hasta un Vol. de
0.1L con A. Dest)
Título de la Solución intermedia=5.04 ppm
3) Preparación de las Soluciones estándar para la curva de calibración

Vol Sol. V HCl

Identific Intermedia 1N Volumen Final [N] ppm
ación (mL) (mL) (mL) (NO3-N) A
std 0
(bk) 0 1 50 - -0.061
std 1 3 1 50 0.30 0.037
std 2 4 1 50 0.40 0.074
std 3 5 1 50 0.50 0.065
std 4 10 1 50 1.08 0.119
std 5 20 1 50 2.02 0.263

4) Preparación de Las muestras de Agua mineral

Volumen de
Marca Muestra de V HCl
de Agua Agua 1N Volumen Final
Mineral Identificación (mL) (mL) (mL) A
m 1-1 2 1 50 0.553
Agua
“Cielo” m 1-2 3 1 50 0.019
M 1-3 4 1 50 0.047

Agua M 2-1 2 1 50 0.263

“San M 2-2 3 1 50 0.090
Mateo”
M 2-3 4 1 50 0.084

Agua M 3-1 2 1 50 -0.053

“San M 3-2 3 1 50 0.010
Luis”
M 3-3 4 1 50 -0.045
M 4-1 2 1 50 0.151
Agua
“Vida” M 4-2 3 1 50 0.288
M 4-3 4 1 50 0.360
 II) RESUMEN

En esta experiencia se determinó la cantidad de nitratos presentes en diferentes muestras de

agua mineral para el consumo humano por el método de espectrofotometría molecular de
absorción Ultravioleta. Primero se determinó la 𝜆𝑚𝑎𝑥 de absorbancia de nitrato la cual fue de
214 nm, Luego con la ayuda de una curva de calibración se determinó la cantidad de nitrato en
cada muestra de agua mineral los cuales se muestra en la siguiente tabla

Con estos resultados se concluyó que las muestras N°1( agua cielo) y muestras N°2 (agua san
mateo ) tienen una concentración promedio de nitrato dentro de los limites permitidos según
lo que especifica la OMS que es 50 ppm y la Muestra N°4 (agua vida) excede estos limites.

III) FUNDAMENTOS DEL MÉTODO DE ANÁLISIS

A) Objetivos

 Determinar el 𝜆𝑚𝑎𝑥 de Absorbancia de NO3-

 Determinar el contenido de nitratos en diferentes muestras de agua mineral para

el consumo humano por el método de espectrofotometría de absorción molecular
UV.

B) Fundamentos del método de análisis

Este método se utiliza para la determinación de nitratos en bajas concentraciones de unos pocos
ppm o trazas que pueden encontrarse en alimentos o en el agua. Cuando se encuentra niveles
altos de nitratos en alguna sustancia puede producirle a una persona problemas de salud, El
efecto más conocido producido por una alta concentración de nitritos en sangre es la
transformación de la hemoglobina a metahemoglobina. La hemoglobina se encuentra presente
en los glóbulos rojos de la sangre y es la encargada de transportar el oxígeno a todo el
organismo. La metahemoglobina es un tipo de hemoglobina no funcional que por lo tanto no
es capaz de transportar oxígeno. Según la OMS la concentración máxima de nitratos como N es
aproximadamente 10 ppm y si esta como NO3- en si la concentración máxima es de 50 ppm.

IV) DESCRIPCIPCION DE LA TECNICA EMPLEADA

Para poder medir la cantidad de energía absorbida se emplea un espectrofotómetro, el cual es

un instrumento que nos permite medir la relación entre los valores de una misma magnitud
fotométrica relativos a 2 haz de radiaciones en función de la longitud de onda. Este instrumento
tiene la capacidad de proyectar su propio haz de luz monocromática a través de la muestra y
medir la cantidad de luz que es absorbida, lo cual permite dar información sobre la naturaleza
de la sustancia en la muestra o indicar directamente que cantidad de la sustancia que nos
interesa está presente en la muestra. El equipo utilizado en este método es un
espectrofotómetro de doble haz
El funcionamiento de este espectrofotómetro de doble haz consiste en que la fuente luz pasa
alternadamente por la cubeta de la muestra y dela referencia, cuando el cortador no desvía el
haz, la luz pasa a través de la muestra y el detector mide Po. El haz se corta varias veces por
segundo y el circuito compara automáticamente P y Po, dando así la tramitación o la
absorbancia.

Cuando se registra un espectro de absorbancia, se registra el primer espectro de la línea base

con las disoluciones de referencia en las 2 cubetas, después se resta el espectro base de la
absorbancia de la muestra para obtener finalmente la verdadera absorbancia de la muestra a
las diferentes longitudes de onda.

Para la región ultravioleta se usa como fuente de radiación una lámpara de deuterio, esta fuente
de luz está compuesta por una lámpara de cristal ultravioleta, o de cuarzo, que contiene
deuterio a baja presión en su interior. Emplea un filamento de Wolframio y un ánodo situados
en los extremos opuestos de una estructura de níquel y forman una generación de arco eléctrico.

Este arco voltaico generado excita las moléculas de deuterio que conforman el gas contenido en
la capsula de la lámpara a un nivel superior de energía, cuando retornan al estado inicial, el
deuterio emite luz UV durante dicha transición; Este proceso se repite continuamente por lo que
se emite una radiación UV continua.

DESCRIPCIÓN BREVE DEL INSTRUMENTO

El nombre del equipo utilizado es: Espectrofotómetro UV-Visible UV-1700, de marca Shimadzu®.

 Especificaciones: (exactitud espectral, resolución, exactitud fotométrica, etc....) y

funciones en conformidad con las farmacopeas de EE.UU., Europea y Japonesa.
 Validación del hardware (9 ítems) como estándar.
 Soporte IQ/OQ*
 Diseño compacto - modelo liviano de sólo 17 kg que puede ser transportado por una
persona.
 Operación sencilla con teclas específicas para funciones.
 Facilidad en la operación a través de la amplia pantalla de cristal líquido.
 Funciones completas para análisis cualitativo y cuantitativo instaladas como estándar;
se pueden agregar programas especiales usando tarjetas IC.
 Compatible con PC usando software bajo Windows.
 Modo de medición fotométrica de múltiples longitudes de onda (estándar).

*IQ/OQ contiene los siguientes detalles que son verificados y registrados durante la instalación
del equipo. Son documentos fundamentales para cumplir con las pautas de la FDA.

1. IQ (Calificación de la Instalación) Confirma que el instrumento fue instalado correctamente

en la configuración original y en el ambiente apropiado.
2. OQ (Calificación de Operación) Confirma que el instrumento alcanzó el desempeño original
deseado.
ACCESORIOS DEL INSTRUMENTO
Utilice el software UVProbe para controlar el UV-1700 mediante una computadora personal. El
paquete incluye funciones para mediciones fotométricas, espectrales y cinéticas, además de
elaboración de informes.
 V) REACCIONES QUÍMICAS DE IMPORTANCIA

VI) DETALLES EXPERIMENTALES

1) MATERIALES Y EQUIPOS

 Espectrofotómetro visible SHIMADZU 1700

 Celdas de Cuarzo
 Fiolas de 50, 100 y 250 mL
 Vasos de precipitados de 250 mL
 Pipetas volumétricas de 1, 2, 3, 4, 5, 10 y 20 mL
 1 Luna de reloj
 Propipeta
 Balanza digital Analítica
 1 Cuchara
 Bagueta
 Pizeta

2) REACTIVOS

 Solución Stock de Patrón Primario de KNO3: Colocar en un crisol de porcelana

aproximadamente 0.3 g de KNO3 y secar en estufa a 105°C durante 24 h. Retirar
y enfriar en el desecador.
 Solución de HCl 1N

3) PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

A) Preparación de la solución Stock Patrón de KNO3 (100ppm-(NO3--N) )

1) Se pesa 0.1819g de KNO3 reactivo que se encuentra en el desecador, luego se

diluye con agua destilada en un vaso de precipitado de 250 mL y se lleva a una
fiola de 250 mL la cual se llena hasta enrase con agua destilada.

B) Preparación de Solución Intermedia de Nitrato (5 ppm NO3-- N)

1) Se mide un volumen de 5 mL de la solución Stock Patrón de KNO3 y se lleva a

una fiola de 100mL la cual se llena hasta enrase.

C) Preparación de soluciones estándar para curva de calibración

1) Extraer de la solución intermedia de Nitrato volúmenes de 3, 4 , 5, 10 y 20 mL ,

luego se llevan estos volúmenes a Fiolas de 50mL(1 fiola por cada volumen)
2) Luego de colocar los volúmenes correspondientes a las 5 Fiolas se debe agregar
un poco de agua destilada sin llegar a enrasar para agregar 1 mL de HCl 1N a
cada una, finalmente se debe enrasar con agua destilada.
 3) Para la preparación del blanco se hace un procedimiento similar, se debe
agregar agua destilada a una fiola de 50 mL sin llegar a enrase aproximadamente
unos 45mL, luego se agrega 1mL de HCl 1N finalmente se debe completar el
enrase con agua destilada.
D) Preparación de la Muestra de Agua Mineral

Se realiza el mismo procedimiento para todas las muestras de agua mineral que se
utilizaron (Agua “Cielo”, Agua “San Mateo”, Agua “San Luis”, Agua “Vida”)

1) Se miden 2, 3 y 4 mL de las muestra de agua y se llevan estos volúmenes a Fiolas

de 50 mL (1 fiola por cada volumen).
2) Se añade 1 mL de HCl 1N a cada fiola y se completa hasta enrase agregando agua
destilada.
E) Determinación de 𝜆𝑚𝑎𝑥 de absorbancia de NO3-

1) Primero se hace la limpieza respectiva a las celdas de cuarzo del

espectrofotómetro con agua destilada, luego se agrega la solución estándar del
blanco a las 2 celdas y se introducen en el espectrofotómetro SHIMADZU (Parte
opaca de la celda frente al operador), el cual debe medir un valor de absorbancia
0 si no es así se debe hacer el ajuste respectivo haciendo clic en AUTOZERO.
2) Se retira una celda que contiene la solución de blanco y se debe introducir en el
compartimiento de muestra la solución estándar N°1 y se debe realizar el scan
respectivo en el software el cual nos dará el valor de 𝜆𝑚𝑎𝑥 de absorbancia de NO3-

F) Medida de absorbancia para la construcción de la curva de calibración

1) Se debe introducir uno a uno todas las soluciones estándar en el

compartimiento de muestra del espectrofotómetro SHIMADZU y con ayuda del
software se anota los valores de absorbancia para cada solución estándar
para la posterior construcción de la curva de patrones.

G) Medida de absorbancia en las muestras de agua de mineral

1) De igual manera se debe introducir uno a uno todas las soluciones muestra
de agua mineral en el compartimiento de muestra del espectrofotómetro
SHIMADZU y con ayuda del software se anota los valores de absorbancia para
cada muestra.

VII) CALCULOS DETALLADOS

VIII) GRAFICOS DE LOS EXPERIMENTOS

IX) DISCUSION DE RESULTADOS

 Para la determinación del 𝜆𝑚𝑎𝑥 de absorbancia del NO3-, se usó el estándar N°1
y se obtuvo un valor de 𝜆𝑚𝑎𝑥 = 214𝑛𝑚; Al comparar este valor con el valor
teórico referencial mostrado en la bibliografía (220nm) se observa que son
cercanos.
 Para la realización de la curva de calibración de los 5 pares de datos que se tenía
de concentración y absorbancia de los estándares solo se consideró 3 puntos ya
que los otros 2 puntos distorsionan la tendencia lineal ideal que debe tener, con
los 3 puntos escogidos se obtiene un coeficiente de relación de 0.9999; Todo
esto se observa en el Gráfico N°1.
 En la determinación del contenido de Nitrato en las muestras de agua mineral
se obtuvo los siguientes valores de concentración como se muestra en la
siguiente Tabla

Marca de Volumen de
Agua Muestra de Agua
Mineral Identificación (mL) [NO3-] ppm
M 1-1 2 455,82
Muestra 1
Agua “Cielo” M 1-2 3 11,81
M 1-3 4 20,48
Muestra 2 M 2-1 2 224,72
Agua “San M 2-2 3 51,67
Mateo” M 2-3 4 36,53
Muestra 3 M 3-1 2 -
Agua “San M 3-2 3 5.90
Luis” M 3-3 4 -
M 4-1 2 128,41
Muestra 4
Agua “Vida” M 4-2 3 163,87
M 4-3 4 159,41

A su vez en la Muestra 3 solo se obtuvo un valor de concentración para la

muestra 3-2; ya que para la muestra 3-1 y 3-3 se tenía valores negativos de
absorbancia por lo cual nos iban arrojar valores negativos de concentración, lo
que es completamente imposible, los motivos posibles de este hecho es que
esta muestra haya sido preparada de forma inadecuada, pues la solución blanco
Podemos atribuir la falta de precisión en los resultados del análisis de las
muestras a la mala manipulación de las celdas de cuarzo, pues se determinó en
el trazado de la curva de calibración por adición de patrón que la solución estaba
preparada correctamente.
Al hacer el análisis estadístico de nuestros resultados de concentración de nitrato en las
muestras de agua mineral se muestra los siguientes resultados

[NO3-]promedio
Identificación S CV
ppm
Muestra 1
16,14 6.13 37.97
Agua “Cielo”
Muestra 2
44,10 10.71 24.28
Agua “San Mateo”
Muestra 3
- - -
Agua “San Luis”
Muestra 4 Agua
150,56 19,31 12.82
“Vida”

Se observa que no se hizo el análisis estadístico para la muestra 3 ya que solo se contaba con un
solo valor lo cual hace imposible un análisis, a su vez no se consideró el resultados de esta
muestra ya que no se puede discutir la veracidad de este valor con un solo resultado.

X) CONCLUSIONES

 Se utilizó una celda de cuarzo debido que este material absorbe energía por
debajo de 210 nm.

 Se halló que la longitud de onda de máxima absorbancia fue 214 nm acorde a lo

indicado en la referencia teórica

 Se concluye que tres de los cuatro tipos de agua mineral (“Cielo”, “San Mateo”
y “San Luis”) se encuentran dentro del límite máximo permisible de NO3- en
agua apta para el consumo humano.

XI) RECOMENDACIONES

 Se recomienda agitar vigorosamente los patrones y las muestras antes de cada lectura
de absorbancia con el fin de que el equipo lea correctamente el valor de absorbancia.

 No se debe tocar con los dedos las paredes de las celdas por donde debe pasar la luz,
pues las huellas dactilares dispersan y absorben la luz, a su vez se debe limpiar o secar
las celdas con un pañuelo desechable (papel tissue).

 Se recomienda limpiar bien las celdas entre cada medición de absorbancia en las
muestras, con el fin de no alterar la composición de las mismas
 XII) BIBLIOGRAFIA

AMERICAN PUPLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination of Water
and Wastewater. 18th Edition. Washington, APHA, 1992. pp 4-87-4-88.

http://www.astm.org/SNEWS/SPANISH/SPND08/datapoints_spnd08.html
http://www.minsa.gob.pe/webftp.asp?ruta=normaslegales/2010/DS031-2010-SA.pdf en el peru

http://www.who.int/water_sanitation_health/dwq/gdwq3rev/es/ oms

XIII) ANEXOS