UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

Escuela de Microbiología
Microbiología Industrial y Ambiental
Microbiología y Bioanálisis

Asignatura
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
Informe N° 4

Docentes
XIOMARA MOSQUERA CASTRO
(No recuerdo el nombre del otro profesor)

Preparado por:
MAYRA ALEJANDRA VÁSQUEZ CARDONA
CAMILO ANDRÉS MARÍN MUÑOZ
ALEX CASTAÑEDA CASTAÑO
JUAN PABLO MONTOYA OROZCO
DANILO VALLE CIFUENTES

Medellín, Colombia
2018-2
 PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LOS AMINOÁCIDOS
Introducción
Los aminoácidos desempeñan un papel fundamental en la formación de los seres vivos, ya
que constituyen el principal insumo con que se forman las proteínas. Entre las principales
reacciones de identificación de los aminoácidos se encuentran las siguientes: con Ninhidrina,
de Biuret, de Adamkiewicks, Xantoproteica y de Tiogrupos, las mismas reacciones utilizadas
en el desarrollo de esta práctica de laboratorio.
El carácter único de cada α aminoácido se debe a la estructura del grupo R. en los polipéptidos
los grupos R de los aminoácidos a menudo se denominan cadenas laterales y pueden variar
desde un átomo de hidrógeno, hasta estructuras complejas como el grupo guanidina, el
propósito de esta práctica es identificar algunos aminoácidos que presentan grupos
característicos en las cadenas laterales utilizando ensayos cualitativos y específicos para cada
función.
Marco teórico
Las proteínas son sintetizadas a partir de 20 aminoácidos diferentes, cada uno de ellos en su
estructura básica consta de un átomo de carbono (carbono α) unido a un grupo carboxilo
(COO-), un grupo amino (NH3+), un átomo de hidrógeno (H), y una cadena lateral
característica (R) como se puede apreciar en la Fig. 1. Las propiedades químicas específicas
de las diferentes cadenas laterales de los aminoácidos determinan los papeles de cada uno de
ellos en la función proteica y estructura.

Fig. 1. Tomada de: http://gmein.uib.es/moleculas/aaestructurajmol/aaestjmol.html

Los aminoácidos pueden agruparse en cuatro grandes categorías dependiendo de las
propiedades de sus cadenas laterales, diez aminoácidos tienen cadenas laterales no polares
que no interaccionan con el agua, estas cadenas son hidrófobas y tienden a localizarse en las
membranas o al interior de las proteínas donde no tiene contacto con el agua, algunos
aminoácidos que presentan estas cadenas laterales muy hidrófobas tienen también anillos
aromáticos como es caso de la fenilalanina y el triptófano. Cinco aminoácidos tienen cadenas
laterales sin carga pero polares, debido a que las cadenas laterales de estos aminoácidos
pueden formar puentes de hidrógeno con el agua, estos son hidrófilos y tienen a localizarse
en la parte externa de las proteínas. Tres aminoácidos tienen cadenas laterales con grupos
básicos cargados positivamente dentro de la célula, por tanto son muy hidrófilos y se
encuentran en contacto con el agua en la superficie de las proteínas. Por último, dos
aminoácidos tienen cadenas laterales ácidas que terminan en grupo carboxilo, estos
aminoácidos están cargados negativamente dentro de la célula. Como los aminoácidos
básicos, estos son muy hidrófilos y habitualmente se localizan en la superficie de las
proteínas. Los cuatro grupos y los aminoácidos que pertenecen a cada uno se presentan en la
Fig. 2.

Fig. 2. Tomado del libro: La célula, Cooper & Hausman, séptima edición, página 57.
Los aminoácidos, aparte de ser las unidades de construcción de las proteínas, tienen otra
función biológica importante como moléculas empleadas por las células para comunicarse.
Los aminoácidos glicina y glutamato, junto con otros diferentes que no se encuentran en las
proteínas, actúan como neurotransmisores.
Resultados y análisis de resultados
Muestra Problema  E
Reacción con Ninhidrina
La ninhidrina es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos1 (C.
I. Keeling, 1999), reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y
8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado
púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina
es independiente de la coloración original del aminoácido.2 (E. Kaiser, 1970)
Podemos determinar entonces que esta prueba es específica para la detección de los α-
aminoácidos libres en una solución, por tanto, todas son positivas a excepción del agua. La
Cisteína cambia de color por la oxidación del grupo Tiol (SH) y el triptófano por su
concentración, en ocasiones se observan visos morados.
El color característico de la reacción es un violeta intenso.
Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. En aquellos casos donde
no da positiva la prueba de Biuret, da positiva la de ninhidrina, e indica que no hay proteínas
pero sí hay aminoácidos libres de un ph 4 y 8.3 (Anonimo, 2014)

Fig. 3. Mecanismo de reacción de ninhidrina.

Tomada de: https://es.wikipedia.org/wiki/Ninhidrina#cite_note-4

1
C. I. Keeling, D. E. Nelson, K. N. Slessor, Archaeometry 41 151 (1999) for stable isotope analysis in order to
help reconstruct the palaeodiet of cave bears.C. I. Keeling, D. E. Nelson, Oecologia 127 495 (2001)
2
E. Kaiser, R. L. Colescott, C. D. Bossinger, P. I. Cook, Analytical Biochemistry 34 595 (1970)
3
https://web.archive.org/web/20040213201423/http://www.bergen.org/EST/Year5/fingerprint.htm
Reacción de Biuret
El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros
compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.
Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de
sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo, cambia a violeta en presencia de proteínas, y
vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de potasio no
participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.
Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite determinar
la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioleta-visible a
una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+).
Como se mencionó anteriormente, esta prueba es específica para detectar Proteínas y
Oligopéptidos. En la prueba la única positiva es la Albumina, ya que es la única proteína
presente.
El color de característico de la reacción es un violeta intenso para proteínas y rosado para
oligopéptidos.

Fig. 4. Mecanismo de reacción de Biuret.

Tomado de: http://blog.pucp.edu.pe/blog/quimicaalimentos/2017/10/31/reacciones-de-
reconocimiento-de-proteinas/

Reacción de Adamkiewicks
La reacción Adamkiewick, o también conocida como reacción de Hopkins-Cole es específica
para el triptófano, el único aminoácido que contiene un grupo de indol. El anillo de indol
reacciona con el ácido glioxílico en presencia de un ácido fuerte (ácido sulfúrico) para formar
un producto cíclico color violeta. El reactivo Hopkins-Cole solo reacciona con proteínas que
contienen triptófano. La solución de proteína se hidroliza mediante el ácido sulfúrico
concentrado en la interfaz de la solución. Una vez que el triptófano está libre, reacciona con
el ácido glioxílico para formar el producto de color violeta (en forma de anillo) (2,9)4. (MIKI,
2017)
Esta prueba es específica entonces para la identificación del grupo Indol. En este caso la
única reacción positiva se da con el Triptófano.

Fig. 5. Mecanismo de reacción de Adamkiewicks.

Tomado de: Reacciones de reconocimiento de Proteínas.
Reacción Xantoproteica
Reactivo a base de ácido nítrico que sirve para la identificación de proteínas con grupos
aromáticos que son derivados del benceno como la fenilalanina, tirosina y triptófano,
mediante la formación de compuestos nitrados amarillos. La intensidad del color amarillo se
intensifica cuando la reacción ocurre en una solución básica. Los aminoácidos tirosina y
triptófano contienen anillos de benceno activados y se someten fácilmente a la nitración,

4
Disponible En:
https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&ved=2ahUKEwiCsPiThLLdAhW
OrVkKHXHBBZgQjRx6BAgBEAU&url=http%3A%2F%2Fblog.pucp.edu.pe%2Fblog%2Fquimicaalimentos%2F20
17%2F10%2F31%2Freacciones-de-reconocimiento-de-
proteinas%2F&psig=AOvVaw36vQqpL8VEEPOKxPCNNojp&ust=1536723639300757
mientras que la fenilalanina no se somete fácilmente a la nitración, debido a que el anillo no
está activado (2,4,6)5. (MIKI, 2017)
Esta reacción es como se dijo específica para el reconocimiento de grupos aromáticos en los
aminoácidos. Los resultados positivos se observan en la Tirosina, Triptófano y Albumina.
A demás, también fue positiva para nuestra muestra problema (E).

Fig. 6. Mecanismo de reacción Xantoproteica.

Tomado de: Reacciones de reconocimiento de Proteínas.
Reacción de Tiogrupos

Esta prueba, conocida también como la prueba de azufre reducido, sirve para identificar los
aminoácidos que contienen azufre en su estructura, como es el caso de la cisteína (RSH),
este aminoácido al reaccionar con NaOH y acetato de plomo producen un precipitado café a
negro, el cual es sulfuro de plomo.6 (Danilo, s.f.)
Reaccionó con la cisteína y la albumina de huevo.

5
Disponible En:
https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&ved=2ahUKEwiCsPiThLLdAhW
OrVkKHXHBBZgQjRx6BAgBEAU&url=http%3A%2F%2Fblog.pucp.edu.pe%2Fblog%2Fquimicaalimentos%2F20
17%2F10%2F31%2Freacciones-de-reconocimiento-de-
proteinas%2F&psig=AOvVaw36vQqpL8VEEPOKxPCNNojp&ust=1536723639300757

6
Disponible En: https://www.coursehero.com/file/prdqnq/La-prueba-de-azufre-reducido-sirve-para-
identificar-los-amino%C3%A1cidos-que/
Fig. 7. Mecanismo de reacción de Tiogrupos.
Tomado de: https://www.coursehero.com/file/prdqnq/La-prueba-de-azufre-reducido-sirve-
para-identificar-los-amino%C3%A1cidos-que/

Conclusiones.
 El carácter único de cada α aminoácido se debe a la estructura del grupo R por tanto
cada reactivo es específico para un grupo determinado de aminoácidos.

 Pudimos profundizar un poco más en las reacciones químicas que ocurren entre los
grupos R de los α aminoácidos con cada reactivo.

 Es importante saber identificar por qué la Cisteína puede cambiar de color y por qué
la concentración de una sustancia influye en el resultado de los análisis.

 Mediante conocimientos adquiridos en las clases teóricas (Titulación teórica), en la

práctica de laboratorio pudimos comprobar que los diferentes α aminoácidos poseen
actividad a un determinado pH. Los diferentes reactivos proporcionan las condiciones
adecuadas para que se den las reacciones.

 El reactivo de Hopkins-Cole solo reacciona con proteínas que contengan Triptófano.

 Nuestra muestra problema fue positiva para la reacción xantoproteíca, lo que indica
la presencia de grupos aromáticos en los aminoácidos que componen la muestra.

Bibliografía y Webgrafía

 Anonimo. (13 de febrero de 2014). Internet Archive. Obtenido de Fingerprinting

Analysis:
https://web.archive.org/web/20040213201423/http://www.bergen.org/EST/Year5/fi
ngerprint.htm

 C. I. Keeling, D. E. (1999). for stable isotope analysis in order to help reconstruct

the palaeodiet of cave bears.C. I.
 Danilo, J. (s.f.). Course Hero. Obtenido de
https://www.coursehero.com/file/prdqnq/La-prueba-de-azufre-reducido-sirve-para-
identificar-los-amino%C3%A1cidos-que/
 E. Kaiser, R. L. (1970). Analytical Biochemistry.
 MIKI, G. U. (31 de Octubre de 2017). Química de los Alimentos. Obtenido de
http://blog.pucp.edu.pe/blog/quimicaalimentos/2017/10/31/reacciones-de-
reconocimiento-de-proteinas/
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