Procedimiento
- Preparar una solución tampón o
buffer con los siguientes reactivos
y mantenerla en el refrigerador:
50 ml de agua destilada
1,5 g de NaCl
5, 0 g de bicarbonato sódico
5 ml de detergente líquido
- Cortar en cuadritos y triturar en
un mortero con un poco de agua
destilada fría la muestra a usar
(cebolla, tomate de árbol, ajo,
etc.)
- Colocar en dos tubos de ensayo 3
ml del triturado y adicionar 6 ml
del tampón frío
- Agitar fuertemente durante dos
minutos
- Centrifugar a velocidad baja por 5
minutos
- Retirar 3 ml del sobrenadante a
un tubo de ensayo nuevo
- Adicionar 6 ml de etanol absoluto
frío por las paredes del tubo
lentamente (inclinar el tubo). El
alcohol quedará flotando sobre el
tampón.
- Introduzca una varilla de vidrio
debajo de la separación entre el
alcohol y el tampón y mueva
lentamente la varilla de atrás
hacia adelante por dos minutos.
Observe como el ADN se enrolla en la
varilla
Resultado
- Para realizar una extracción pura
ocurrirá que el detergente contiene
lauril sulfato de sodio, el cual
limpia los trastes
removiendo grasas y proteínas.
Éste actúa de la misma manera en
el protocolo de extracción de
ADN, separando las grasas
(lípidos) y las proteínas que
constituyen las membranas que
rodean la célula y el núcleo. Una
vez que estas membranas se han
roto, el ADN es liberado de la
célula
- Lisis de las membranas celulares
con detergente, en una solución
salina para liberar los ácidos
nucleicos y las proteínas.
- Digestión de las proteínas por
acción enzimática de proteasas
(Opcional). Precipitación con
etanol frío. El ADN es soluble en
alcohol, pero se torna insoluble en
presencia de sal (NaCl) porque el
sodio neutraliza la carga negativa
de los grupos fosfatos. El etanol
formará una capa en la superficie
por ser menos denso que la
solución acuosa.
- Observación de agregados
moleculares, de consistencia
mucoidea, en la interfase entre la
solución acuosa y el alcohol.
- El producto filamentoso obtenido
de la extracción no es ADN puro
ya que, entremezclado con él, hay
fragmentos de ARN. Una
extracción "profesional" se realiza
añadiendo enzimas que
 fragmentan las moléculas de ARN
e impiden que se unan al ADN.

EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS