Determinación de Proteínas por el Método de

Biuret en Clara de Huevo

Cristian F. Rojas1a & Cristian Buendía Nopan1b

1 Universidad de la Amazonia, Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Química, Cl. 17

Diagonal 17 con, Cra. 3F, Florencia, Caquetá-Colombia-180002.

a cristian.rojas@udla.edu.co b c.buendia@udla.edu.co

Resumen
La presente practica de laboratorio se llevo acabo con la finalidad de determinar el
contenido de proteína soluble en clara de huevo a partir del método de Biuret. Para
ello, se realizó una curva de calibración con un patrón de albumina (5 mg/mL) y se
prepararon cuatro soluciones de clara de huevo en NaCl a diferentes
concentraciones, se midió la absorbancia a 540 nm. La concentracion de proteina
obtenida fue de 10,1081  2,922 % p/p, debido a la disolucion de la muestra en
cloruro de sodio el metodo utilizado, es selectivo a proteinas solubles en soluciones
salinas como lo es la albumina, por ende los resultados obtenidos, se presentan en
referencia a dicha sustancia.
Palabras clave: Proteína, Biuret, clara de huevo

Abstract
The present laboratory practice was carried out with the purpose of determining the
content of soluble protein in egg white from the Biuret method. For this, a calibration
curve was made with an albumin standard (5 mg / mL) and four solutions of egg
white in NaCl were prepared at different concentrations, the absorbance at 540 nm
was measured. The concentration of protein obtained was 10,1081  2,922% w / w,
due to the dissolution of the sample in sodium chloride. The method used is selective
to soluble proteins in saline solutions such as albumin, therefore the results
obtained, are presented in reference to said substance.
Key Word: Protein, Biuret, egg white

1
Introducción
El método de Biuret comúnmente es utilizado para la determinación del contenido
de proteínas solubles, la reacción que conlleva este ensayo es característica para los
enlaces peptídicos y produce una coloración purpura proveniente del compuesto de
coordinación formado por el ion cúprico y los grupos amino de una proteína como
se muestra en la figura 1, esta reacción conlleva una importancia cuantitativa y se
debe a que la coloración que resulta de dicha reacción se acopla a la ley de Lambert
Beer y absorbe a una longitud de onda de 540nm [1] [2]. Cabe mencionar, que este
método tiene desventajas, puesto que su sensibilidad es baja, dado que se necesita
de 20-40 mg de la proteína para una detección idónea, además de ello, las proteínas
con alto contenido de prolina obtienen respuestas bajas por este método, ya que los
residuos de prolina no reaccionan con el reactivo de Biuret, además de ello, muchos
pigmentos absorben a la misma longitud de onda [1].

Figura 1 Reacción de Biuret [1].

De esta manera, el ensayo de Biuret generalmente se utiliza en medicina para

determinar el contenido de proteínas en muestras de sangre, así mismo, se emplea
en laboratorios para cuantificar el contenido de proteína soluble de diversos
alimentos, uno de ellos, es la clara de huevo, la cual tiene un alto contenido de
proteínas; dentro de ellas se encuentra la ovoalbúmina que constituye el 65% de las
proteínas presentes [3]. Arango et al (2007) realizó un estudio de la caracterización
fisicoquímica del huevo de caimán, en donde utilizó el método de Biuret para la
cuantificación de proteínas [4]. Así pues, la práctica de laboratorio se llevo a cabo
con la finalidad de determinar el porcentaje de proteína soluble presente en la clara
de huevo, a partir del método de Biuret.

1. Resultados y discusión

2
Figura 1. Curva de calibración de albumina

Curva patron
0.25

0.2
Absorbancia

y = 0.2082x + 0.0209
0.15
R² = 0.9755

0.1

0.05

0
0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500 0.600 0.700 0.800 0.900
Concentración (mg/mL)

Tabla 1. Datos curva de calibración de albumina

Curva de calibración
Muestra Absorbancia Absorbancia real Concentración
1 0,182 0,0516 0,167
2 0,218 0,0876 0,333
3 0,262 0,1316 0,500
4 0,301 0,1706 0,667
5 0,314 0,1836 0,833
Nota: La absorbancia real, fue obtenida de la diferencia de absorbancia de las muestras con la
absorbancia del blanco la cual era 0,1304.
La curva de calibración realizada en el presente trabajo se presenta en la gráfica 1.
La correlación de Pearson al cuadrado obtenida entre los datos de concentración y
absorbancia fue de R2: 0,9755, esto permite afirmar que los valores se relacionan de
manera [5] Adicionalmente, se puede apreciar una proporcionalidad directa entre
los valores graficados, lo que cumple con lo esperado según ley de Beer-Lambert, la
cual, afirmar que la concentración de una muestra posee una relación directamente
proporcional con la absorbancia de la misma [6]. La determinación de las
concentraciones en las muestras analizadas se realizó mediante el método de
extrapolación de tendencias utilizando la ecuación de la recta obtenida en la curva
de calibración.

3
Para la determinación de proteína en huevo, se prepararon soluciones; una con una
concentración de 5 porciento peso/volumen (%p/v) y otra con una concentración
de 10 % p/v, de las cuales se obtuvieron dos muestras por cada concentración, las
cuales reaccionaron en proporción diferente con el reactivo de Biuret. La muestras
con concentración de 10 % p/v fueron diluidas, esto, debido a que dichas muestras
generaban una absorbancia en el equipo, mayor al límite superior de la curva de
calibración, lo cual, resultaba ser un impedimento para poder realizar la
extrapolación de tendencias de manera correcta. Los datos de concentración de
albumina diluida en porcentaje peso a volumen (% p/p) se presentan en la tabla 2.
Tabla 2. Concetracion de albumina en la muestras diluidas
Muestra albumina diluida %p/v
5 % P/V de 6 0,3924
muestra 7 0,7338
10 % p/v de 8 0,4648
muestra 9 0,3207

En el caso de la muestra 8 la solución se diluyo una alícuota de 3 mililitros (mL) en

10 mL de agua destilada, mientras que para la muestra 9 se tomó en primera
instancia 3 mL y se llevaron a un volumen de 10 mL y de dicha solución diluida se
tomó 5 mL que se aforaron a 10 mL. Para el análisis espectrofotométrico, se tomaron
de las muestras preparadas alícuotas de 0,83 mL (para las muestras 6 y 8) y 1,66 mL
(para las muestras 7 y 9) y se llevaron a un volumen de 10 mL de los cuales 6,66 mL
eran del reactivo de Biuret.
Tabla 3. Concentracion de albumina en la clara de huevo estudiado
Muestra Albumina en el huevo % Albumina en el huevo %
p/p experimental p/p teórico
1 9,4556 12,7
2 8,8411
3 9,3005
4 12,835
Media 10,108
Mediana 9,3781
Desviación estándar 1,8366
porcentaje de error 20,408
Probabilidad 0,0500
numero de datos 4,0000
Grados de libertad 3,0000
t 3,1824

4
 Raíz 2,000
Límite inferior 7,185
Límite superior 13,030
Incertidumbre 2,922
Valor obtenido 10,1081  2,922

Mediante factores de dilución, las concentraciones de albumina diluida, se llevaron

a concentración en porcentaje peso / peso (%p/p) de la masa de muestra utilizada
(ver muestra de cálculos). Lo resultados obtenidos se exponen en la tabla 3.
Realizando un análisis estadístico de los datos obtenidos, se obtuvo que la media de
las concentración de albumina en las muestras estudiadas fue de 10,1081 con una
desviación estándar de 1,83 % p/p y un porcentaje de error del 20 % con respecto al
valor reportado en la literatura [7]. Evidentemente se puede apreciar que la
desviación estándar de los resultados obtenidos, resulta ser elevada en referencia a
la magnitud del resultado, con lo cual, es correcto afirmar que la concentración
obtenida carece de precisión, falencia que se atribuye principalmente, a que los
análisis realizados, se constituían de preparaciones muéstrales diferentes. Por otro
lado, el porcentaje de error, resulta ser menor del 30 % lo cual según los parámetros
estadísticos reportados en miller and miller es un valor que posee cierto grado de
exactitud.
Los valores obtenidos y los valores teóricos mostrados, se presentan como
concentraciones de albumina en clara de huevo, pues si bien es cierto que la practica
realizada tuvo como objetivo la determinación general de proteínas solubles, la
metodología que se utilizo requeria diluir la clara del huevo en cloruro de sodio, lo
cual, vuelve a esta una metodologia selectiva a proteinas solubles a soluciones
salinas, como lo es la albumina-[8].
Conclusiones
La concentración de albumina obtenida en la clara de huevo fue de 10,1081  2,922
% p/p, debido a la elevada desviación estándar en contraste con la magnitud de la
concentración reportada, los resultados obtenidos carecen de precisión, sin
embargo, gracias a que el porcentaje de error no supero el 30 % es posible afirmar
que dichos resultados posee un grado de exactitud estadísticamente aceptable. Por
otro lado, debido a la selectividad del método utilizado con proteínas solubles en
soluciones salinas, todas las concentraciones obtenidas corresponden a
concentraciones de albumina.

Bibliografía

5
1. S. B. Dergal, «Quimica De Los Alimentos-Cuantificacion de Proteinas,» Cuarta
Edición ed., Mexico, Pearson, 2006, pp. 162-164.}
2. L. M. G. S. Robert Horton, Principios de Bioquimica, Mexico: Pearson, 2008.
3. H. K. G. Maria Benitez Romero, «Determinación del contenido de Proteinas
totales en la clara de Huevo por metodos gravimetricos y espectrofometricos,»
Universidad Nacional Autonoma de Nicaragua, 2013.
4. M. D. G. H. Z. Julian Morales Arango, «Caracterización físico-química del
huevo del caimán llanero, Crocodylus intermedius, Graves 1819,» Acta
Zoologica Mexicana, pp. 17-27, 2007.
5. Miller J.N., Miller J.C. (1993). Estadística para química analítica. (2da ed.).
6. Douglas Skoog, H. y. (2014). Principios de analsis instrumental (5ta ed.).
7. Instituto de Estudios del Huevo, El gran libro del huevo, 2009.
8. TRUDY MCKEE AND JAMES. R. MCKEE, Bioquímica base molecular de la
vida, 3er ed., 2003 .