Inmovilizacion de Glucoamilasa Por Atrapamiento y Determinacion de Actividad Enzimatica en Un Reactor Discontinuo Agitado y Un Reactor de Lecho Fijo

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA Código
FACULTAD DE INGENIERÍA
Departamento de Ingeniería de Alimentos Página
Maestría en Ciencias Agroalimentarias
INMOVILIZACION DE GLUCOAMILASA POR ATRAPAMIENTO Y

DETERMINACION DE ACTIVIDAD ENZIMATICA EN UN REACTOR
DISCONTINUO AGITADO Y UN REACTOR DE LECHO FIJO
HUMBERTO PEREZ TAMARA
RESUMEN
La inmovilización de enzimas permite una mejora significativa
de su estabilidad, lo que hace posible su empleo en la
producción industrial de alimentos. Este estudio inmovilizamos
la glucoamilasa por el método de encapsulación o atrapamiento
y midió la actividad enzimática de la glucoamilasa en un
reactor de lecho fijo y reactor tipo Bacht agitado, Para lo
cual se desarrollaron reacciones de sacarificación con
concentraciones de maltodextrinas del 3%. Se tomaron muestras
en cada uno de los reactores en diferentes tiempos (0, 10, 20,
30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 y 120 min) y se llevaron
a un baño de ebullición por 5 min para inactivar la enzima y
detener la reacción, se determinaron azucares reductores por
el método DNS a cada muestra, a partir de esto se obtuvieron
los parámetros cinéticos y la actividad enzimática. Se
identificó la existencia del efecto del tiempo de operación
sobre la actividad enzimática, dado que la actividad enzimática
fue disminuyendo, en función del aumento del tiempo de
operación.
INTRODUCCION
La investigación sobre inmovilización de enzimas ha generado

gran interés en la comunidad científica, debido a sus grandes
ventajas técnicas y económicas respecto a la utilización
tradicional. Entre las principales ventajas que presentan los
proceso que utilizan enzimas inmovilizadas se encuentra su
facilidad para el manejo de una mayor densidad enzimática
comparado con los procesos tradicionales, un mejor control en
sistemas continuos y la posible recuperación de la enzima para
su posterior reutilización. En esta dirección, el avance en la
consolidación del uso de enzimas a escala industrial se debe
en gran medida al desarrollo de métodos eficientes de
inmovilización.
Aspectos Generales Sobre la Inmovilización de Enzimas
La inmovilización de enzimas es un proceso en el que se confina

o localiza a la enzima en una región definida del espacio,
para dar lugar a formas insolubles que retienen su actividad
catalítica y que pueden ser reutilizadas repetidamente
(Klibanov, A.M. 1983). Posteriormente esta definición se ha
ampliado a aquel proceso por el cual se restringen, completa
o parcialmente, los grados de libertad de movimiento de
enzimas, orgánulos, células, etc. por su unión a un soporte
(Taylor, R.F. 1991).
Como ventajas del empleo de enzimas inmovilizadas podemos
destacar (Hartmeier, W. 1985):
 El aumento de la estabilidad de la enzima;
 La posible reutilización del derivado, por lo que

disminuyen los costes del proceso.
 La posibilidad de diseñar un reactor enzimático de fácil

manejo y control, adaptado a la aplicación de la enzima
inmovilizada.
Los principales inconvenientes del proceso de inmovilización

son (Martinek, K.; Mozhaev, V.V. 1987):
 La alteración de la conformación de la enzima respecto de

su estado nativo.
 La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte donde

pueden existir distintas fracciones de proteínas
inmovilizadas con un diferente número de uniones al
soporte.
 Siempre suele haber una pérdida de actividad de la enzima

durante la movilización.
 El biocatalizador es más caro que la enzima nativa.

Encapsulación de sustancias
La encapsulación es un proceso mediante el cual sustancias

bioactivas se introducen en una matriz para impedir que se
pierdan, para protegerlas de la reacción con otros compuestos,
o para frenar reacciones de oxidación a causa de la luz o del
oxígeno (Guisán et al., 1998).
En términos generales, la encapsulación constituye un medio de

envasar, separar y almacenar materiales para su posterior
liberación bajo condiciones controladas. Esta tecnología
aporta, en el ámbito alimentario, productos con mejores
características sensoriales y nutricionales.
Materiales de encapsulación
Existe una amplia variedad de materiales para cobertura que
pueden ser usados para encapsular ingredientes alimentarios,
en la cual se incluyen aceites hidrogenados, ceras,
maltodextrinas, almidones y gomas. Algunos de los más efectivos
son los aceites hidrogenados, como el aceite de palma, de
algodón y de soya, que son excelentes formadores de películas
capaces de cubrir las partículas individuales, proporcionando
una encapsulación uniforme (Shaidi y Han, 1993).
Los alginatos son hidrocoloides extraídos de algas, los cuales

reaccionan con iones calcio para la formación de geles
estables; estos son utilizados para atrapamiento de sabores a
temperatura ambiente (Reineccius, 1991). Para obtener las
camas, el alginato es emulsificado con el sabor y después
adicionado por goteo a una solución de cloruro de calcio.
Los materiales que tienen como base proteínas, como las

proteínas de soya, caseinatos y derivados de grenetina, forman
emulsiones estables con saborizantes volátiles; su solubilidad
en agua fría, el potencial para reaccionar con grupos
carbonilos y su alto costo, limitan su uso potencial (Wong y
Farrés, s.f.).
La selección del método de encapsulación dependerá del tamaño

medio de la partícula requerida y las propiedades
fisicoquímicas del agente encapsulante y la sustancia a
encapsular; las aplicaciones para el material micro

encapsulado, el mecanismo de liberación deseado y el costo.
Efectos De La Inmovilización
A menudo, la inmovilización altera significativamente el

comportamiento de las enzimas. En primer lugar se producen
cambios en su estabilidad. En segundo lugar, la enzima
inmovilizada es un sistema heterogéneo en el cual todos los
componentes que intervienen en el proceso catalítico (pH,
sustratos, productos, inhibidores, cofactores, activadores,
etc.) se encuentran en interfase: en el medio de reacción y en
la fase constituida por el soporte con la enzima. Como
consecuencia, la actividad enzimática se ve afectada por
efectos de tipo difusional, estérico y del microentorno
Efectos en la estabilidad
Generalmente se observa un incremento en la estabilidad de las

enzimas después de su inmovilización, que se debe
principalmente a las siguientes razones (Klibanov, A.M.
(1983)):
 Una estabilización conformacional de la enzima debido a

la existencia de uniones multipuntuales enzima-soporte.
 Se evita la agregación intermolecular al mantener las

moléculas de enzima retenidas en una determinada región
del espacio.
 Existe una alteración del microentorno del enzima debida

a la interacción de la enzima con el soporte.
Efectos en la actividad enzimática
Tras una inmovilización, la actividad de la enzima puede

disminuir e incluso perderse por diversas razones. Si pierde
totalmente la actividad enzimática puede ser debido a que:
 La unión al soporte se produce de tal forma que el paso

del sustrato al centro activo está impedido,
 Los grupos reactivos del soporte reaccionan con algún

aminoácido que forme parte del centro activo o que sea
esencial para la actividad catalítica de la enzima,
 La inmovilización puede originar un cambio conformacional

que da lugar a una forma inactiva,
 Las condiciones experimentales del proceso causan la

desnaturalización o desactivación de la enzima.
MATERIALES Y METODOS
Reactivos
Enzima Glucoamilasa EC 3.2.1.3

Las maltodextrinas, un digerido enzimático de almidón de maíz
con un 25% de azúcares reductores.
Acido 3,5-dinitrosalicílico DNS
Alginato de sodio
Cloruro de calcio 0.2M
Soporte universal
Beaker
Reactor tipo Bacht agitado
Reactor de lecho fijo
Preparación de soluciones
Se prepararon 500 ml de solución de Alginato de sodio al 2%,

usando agua caliente (aproximadamente a 40°C). Posteriormente
se preparó una solución de cloruro de calcio 0.2M,
Inmovilización de la enzima
Se mezclaron la solución de Alginato de sodio y el extracto

enzimático de glucoamilasa, se vaciaron en un beaker de 500
ml, la cual fue bombeada por acción de una bomba peristáltica
a través de una manguera de conducción, debajo de la cual se
colocó un vaso de precipitado en el que se vertió
previamente la solución de cloruro de calcio. Esta última

solución se mantuvo en agitación constante (menor a 300 rpm).
Se revisó que la punta de la manguera de conducción quedará
aproximadamente a 20 cm de la solución de cloruro de calcio y
entonces se activó la bomba de manera que goteara para que al
caer las gotas se formaran las esferas de Alginato que
contenían la enzima (figura 1). Una vez que goteó todo el
contenido de beaker, se filtraron las esferas, usando un embudo
y papel filtro, se colocaron en un frasco de vidrio con
tapa, se les adicionó agua destilada hasta cubrirlas para
hacer lavado de las esferas y se guardaron en refrigeración
para su posterior uso (figura 2).
(figura 1) Montaje de goteo (figura 2) esferas enzima

solución Alginato enzima inmovilizada
Sacarificación enzimática de maltodextrinas
Con el fin de evaluar el efecto de la concentración de enzima

y de sustrato sobre la formación de azúcares reductores y la
velocidad de reacción, las reacciones de sacarificación se
llevaron a cabo a 28°C en un reactor tipo Bacht con agitación
(figura 3) y en un reactor de lecho fijo (figura 4). Se preparó
una solución de maltodextrinas al 3%. Se tomaron muestras en
cada uno de los reactores en diferentes tiempos (0, 10, 20,

30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 y 120 min) y se llevaron
a un baño de ebullición por 5 min para inactivar la enzima y
detener la reacción.
(figura 3) reactor tipo BACHT con (figura 4) reactor de lecho fijo

agitación RLF
Determinación de azúcares reductores
La determinación de azúcares reductores se realizó por el

método de ácido 3,5-dinitrosalicílico DNS (Miller GL, 1959).
Una vez detenida la reacción, se hizo dilución de 0,1:12 cada
muestra se centrifugó y a 1 mL del líquido claro se le adicionó
1 mL de solución de DNS. La mezcla se calentó durante 5 minutos
hasta ebullición, se enfrió en un baño de hielo y se midió la
absorbancia de la muestra a 575 nm en un espectrofotómetro.
REULTADOS Y DISCUCION
Inmovilización de la enzima
En la Figura 2 se muestran las esferas de Alginato obtenidas,

en cuyo interior se encuentra la glucoamilasa inmovilizada. El
proceso de inmovilización fue rápido y sencillo, una vez que
las gotas de Alginato de sodio caen en la solución de cloruro
de calcio hay un intercambio de iones: sodio por calcio, lo
cual permite que se forme Alginato de calcio que gelifica, y
en cuya red quedan atrapadas las enzimas.
Figura 5. Formación de esferas de

Alginato de sodio con la enzima
Con la realización de la práctica fue posible comprobar el

mecanismo de gelificación del Alginato en presencia de iones
multivalentes, en este caso fue el ion fue el calcio.
Construcción de la Curva patrón

Cuadro 1. Absorbancias de las muestras de concentración (µg/mL)
conocida a una longitud de onda de 575 nm medidas en un
espectrofotómetro.
ml S/n
Tubo mL agua Concentración Absorbancia
Estándar (µg/mL)
1 0 1 0 0
2 0,2 0,8 200 0,038
3 0,4 0,6 400 0,093
4 0,6 0,4 600 0,162
5 0,8 0,2 800 0,241
6 1 0 1000 0,291
Gráfico 1. Recta de calibración generada con concentraciones

en µg/mL y absorbancias a 575 nm de 6 patrones de glucosa
Curva patron asorbamcia

0,35
0,3 y = 0,0003x - 0,0149

R² = 0,9899
0,25
Adsorbancia nm
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 200 400 600 800 1000 1200
-0,05
Concentracion ppm
Es a partir de esta gráfica que se obtiene por el método de

regresión matemática una ecuación lineal y = 0,0003x - 0,0149,
con un coeficiente de correlación (R²) de 0,9899; por
medio de la cual se pudo calcular la concentración de
la muestra incógnita.
Cálculo de la concentración de la muestra incógnita de la

dilución 0,1:12 a partir de la ecuación lineal se tiene lo
siguiente:
Absorbancia = 0,0003C2 - 0,0149, despejamos C2 y tenemos
entonces
𝐴𝑏𝑠 + 0,0149
𝐶2 =
0,0003
Para cada valor de absorbancia tenemos un C2 que corresponde a
P dilución en los cuadros 2-3, a partir de C2 calculamos la
concentración presente en la alícuota inicial de 0,1 Ml,
utilizando la siguiente ecuación:
C1 V1 = C2 V2
𝐶2 𝑉2
𝐶1 =
𝑉1
Donde V1= 0,1 mL, V2=12 mL
Cuadro 2. Absorbancia de la muestra en una dilución de 0,1:12
para una concentración de 3% del sustrato y 5 mL de Enzima
inmovilizada, en el reactor discontinuo agitado
P
Sustrato Tiempo Absorbancia DILUCION PRODUCTO
% (min) nm Mm/mL
µg/mL
3% 0 0,050 49,67 9,93
3% 10 0,051 53,00 10,60
3% 20 0,058 76,33 15,27
3% 30 0,060 83,00 16,60
3% 40 0,064 96,33 19,27
3% 50 0,066 103,00 20,60
3% 60 0,068 109,67 21,93
3% 70 0,068 109,67 21,93
3% 80 0,070 116,33 23,27
3% 90 0,072 123,00 24,60
3% 100 0,076 136,33 27,27
3% 110 0,079 146,33 29,27
3% 120 0,087 173,00 34,60
Gráfico 2. Recta de velocidad e reacción para una concentración

de 3% del sustrato y 5 mL de Enzima inmovilizada en el reactor
discontinuo agitado
Velocidad de reaccion Mn/min mL

0,250
y = 0,0006x + 0,1462
R² = 0,9565
0,200
Glucosa Mn/mL
0,150
0,100
0,050
0,000
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo min
Cuadro 3. Absorbancia de la muestra en una dilución de 0,1:12

para una concentración de 3% del sustrato y 5 mL de Enzima, en
el reactor de lecho fijo
Sustrato Tiempo Absorbancia P DILUCION PRODUCTO U Mm/min

% (min) nm µg/mL Mm mL
3% 0 0,050 216,33 0,144
3% 10 0,063 259,67 0,173 0,0866
3% 20 0,060 249,67 0,166 0,0416
3% 30 0,067 273,00 0,182 0,0303
3% 40 0,065 266,33 0,178 0,0222
3% 50 0,069 279,67 0,186 0,0186
3% 60 0,068 276,33 0,184 0,0154
3% 100 0,070 283,00 0,189 0,0094
Gráfico 3. Recta de velocidad e reacción para una concentración

de 3% del sustrato y 5 mL de Enzima inmovilizada en el reactor
en el reactor de lecho fijo
velocidad de reaccion Mm/min mL

0,250
0,200
Glucosa Mm/mL
0,150 y = 0,0004x + 0,1616

R² = 0,6005
0,100
0,050
0,000
0 20 40 60 80 100 120
Tiempo min
Gráfico 4. Recta comparativa de velocidad e reacción para una

concentración de 3% del sustrato y 5 mL de Enzima inmovilizada
en el reactor discontinuo agitado y un reactor de lecho fijo
VELOCIDAD DE REACCION Mm/mL min

0,250
y = 0,0004x + 0,1616
R² = 0,6005
Glucosa Mm/mL
0,200
y = 0,0006x + 0,1462
0,150 R² = 0,9565
0,100
0,050
0,000
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo min
BACHT RLF Lineal (RLF) Lineal (RLF)

Gráfico 5. Recta comparativa de velocidad e reacción para una

VELOCIDAD DE REACCION Mm/mL min

0,250
0,200
Glucosa Mm/mL
0,150
0,100
0,050
0,000
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Tiempo min
BACHT RLF
Haciendo una revisión de la velocidad de obtención del producto

evidenciamos que los valores en ambos reactores no presentan
gran diferencia, solo en el tiempo de operación de 10 min la
obtención de producto existe una diferencia significativa,
siendo mayor en el RLF.
Efecto del tiempo de incubación sobre la actividad enzimática.
A medida que fue aumentando el tiempo de incubación, la

actividad enzimática fue disminuyendo (Grafico 5). Esto se
explica en función de la concentración de sustrato, que si
bien era fija, al dejar actuar la enzima por más tiempo
disminuye la actividad de la misma pues ya quedan en el medio
menos moléculas de Maltodextrinas que catalizar. En algún
punto, esta actividad se haría nula, pues ya se han acabado
las moléculas de sustrato por completo. Además, inicialmente,
las concentraciones de enzima son evidentemente mayores que
las de sustrato, con lo cual se espera que se consumiera este
rápidamente.
Gráfico 6. Recta comparativa de actividad enzimática para una

ACTIVIDAD ENZIMATICA EN EL TIEMPO

0,1000
0,0900
actividad Enzimatica
0,0800
0,0700
0,0600
0,0500
0,0400
0,0300
0,0200
0,0100
0,0000
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo min
BACHT RLF
Gráfico 7. Actividad enzimática para un reactor de lecho fijo

0,12
0,1
0,08
0,06
0,04
0,02
0
0 10 20 30 40 50 60 100
-0,02
Tiempo min
RLF
A partir del análisis que se puede evidenciar del grafico 7

podemos inferir que a partir de los 30 min y hasta los 100 min
de operación no hay cambios significativos en la actividad
enzimática de la enzima inmovilizada para un reactor de lecho

fijo.
Gráfico 8. Actividad enzimática para un reactor tipo Bacht
agitado.

0,0900
0,0800
0,0700
0,0600
0,0500
0,0400
0,0300
0,0200
0,0100
0,0000
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Tiempo min
BACHT
Siguiendo con el análisis que se puede deducir del grafico 8

que a partir de los 40 min y hasta los 120 min de operación no
hay cambios significativos en la actividad enzimática de la
enzima inmovilizada en un reactor tipo Bacht agitado.
Efectividad del conjunto inmovilizado.

Un parámetro que muestra la efectividad del conjunto
inmovilizado, es la constante de desactivación de la enzima,
la cual se obtiene asumiendo que el proceso de desactivación
de la enzima, sigue una función exponencial de pendiente
negativa
E=E0.e-k’t Ec.3
Donde
E:Actividad en el Tiempo t
E0: Actividad inicial
k’: constante de desactivacion de la enzima
t: Tiempo
Tomando logaritmos a ambos lados

Ln(E)=Ln(E0.e-k’t) Ec. 4
Obtenemos:
Ln(E0/E)=k’.t Ec. 5
Graficando Ln(Actividad enzimática) Vs Tiempo de operación, se

obtiene del gráfico 9, donde la pendiente de la recta es la
constante de desactivación de la enzima. Para obtener la vida
media de la enzima, se realizó el siguiente procedimiento:
E=E0/2 Ec.6
Luego en la ecuación 5 remplazamos la ecuación 6 y tenemos;
Ln(2.E0/E0)=k’.t
Ln(2)/k’= t1/2 = Vida Media
Vida media = 0,693/k’
Grafico 9. Linealización de estabilidad operacional
Estabilidad Operacional
0,000
Ln (Actividad enzimatica)
0 20 40 60 80 100 120 140
-0,500
-1,000
-1,500
y = -0,0167x - 0,356
R² = 0,8696
-2,000
-2,500
Tiempo de operacion min
Para este estudio se determinó que la Actividad en el Tiempo

t, esta dada por la siguiente ecuacion;
E=E0.ek’t, donde k’ tiene un valor de 0,0116 min-1
E=E0.e-0,0116.t
La vida media de la enzima es;
t1/2 = 0,693/k’
t1/2 = 0,693/0,0116 min-1
t1/2 = 59,74 min
CONCLUSIONES
La inmovilización correcta de una enzima nos permite
inmovilizar una gran cantidad de la enzima de interés por
unidad de volumen de biocatalizador y nos permite retener un
elevado porcentaje de actividad catalítica por molécula de
enzima inmovilizada. De este modo, se pueden preparar
catalizadores muy activos sin interferencias de otras
actividades enzimáticas indeseables.
También se puede concluir que a partir de los 30 min y hasta

los 100 min de operación no hay cambios significativos en la
actividad enzimática de la enzima inmovilizada para un reactor
de lecho fijo, mientras que a partir de los 40 min y hasta los
120 min de operación no hay cambios significativos en la
actividad enzimática de la enzima inmovilizada en un reactor
tipo Bacht agitado
Adicionalmente se identificó la existencia del efecto del

tiempo de operación sobre la actividad enzimática, dado que la
actividad enzimática fue disminuyendo, en función del aumento
del tiempo de operación.
La Constante de desactivación (k’) y la Vida Media (t1/2 ) de

la enzima amiloglucosidasa inmovilizada obtuvieron un valor
de 0,0116 min-1 y 59,74 min respectivamente.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Guisán, J. M., Bastida, A., Sabuquillo, P., Armisen, P.,
Fernández-Lafuente, R., Huguet, J. (1998). A single step
purification immovilization and hiperactivation of lipases via
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Enzymol. 57: 179-249.

Inmovilizacion de Glucoamilasa Por Atrapamiento y Determinacion de Actividad Enzimatica en Un Reactor Discontinuo Agitado y Un Reactor de Lecho Fijo

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INMOVILIZACION DE GLUCOAMILASA POR ATRAPAMIENTO Y

La investigación sobre inmovilización de enzimas ha generado

Aspectos Generales Sobre la Inmovilización de Enzimas

La inmovilización de enzimas es un proceso en el que se confina

 El aumento de la estabilidad de la enzima;

 La posible reutilización del derivado, por lo que

 La posibilidad de diseñar un reactor enzimático de fácil

Los principales inconvenientes del proceso de inmovilización

 La alteración de la conformación de la enzima respecto de

 La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte donde

 Siempre suele haber una pérdida de actividad de la enzima

 El biocatalizador es más caro que la enzima nativa.

La encapsulación es un proceso mediante el cual sustancias

En términos generales, la encapsulación constituye un medio de

Los alginatos son hidrocoloides extraídos de algas, los cuales

Los materiales que tienen como base proteínas, como las

La selección del método de encapsulación dependerá del tamaño

encapsular; las aplicaciones para el material micro

A menudo, la inmovilización altera significativamente el

Generalmente se observa un incremento en la estabilidad de las

 Una estabilización conformacional de la enzima debido a

 Se evita la agregación intermolecular al mantener las

 Existe una alteración del microentorno del enzima debida

Efectos en la actividad enzimática

Tras una inmovilización, la actividad de la enzima puede

 La unión al soporte se produce de tal forma que el paso

 Los grupos reactivos del soporte reaccionan con algún

 La inmovilización puede originar un cambio conformacional

 Las condiciones experimentales del proceso causan la

Enzima Glucoamilasa EC 3.2.1.3

Se prepararon 500 ml de solución de Alginato de sodio al 2%,

Se mezclaron la solución de Alginato de sodio y el extracto

previamente la solución de cloruro de calcio. Esta última

(figura 1) Montaje de goteo (figura 2) esferas enzima

Sacarificación enzimática de maltodextrinas

Con el fin de evaluar el efecto de la concentración de enzima

cada uno de los reactores en diferentes tiempos (0, 10, 20,

(figura 3) reactor tipo BACHT con (figura 4) reactor de lecho fijo

Determinación de azúcares reductores

La determinación de azúcares reductores se realizó por el

En la Figura 2 se muestran las esferas de Alginato obtenidas,

Figura 5. Formación de esferas de

Con la realización de la práctica fue posible comprobar el

Construcción de la Curva patrón

Gráfico 1. Recta de calibración generada con concentraciones

Curva patron asorbamcia

0,3 y = 0,0003x - 0,0149

Es a partir de esta gráfica que se obtiene por el método de

Cálculo de la concentración de la muestra incógnita de la

Gráfico 2. Recta de velocidad e reacción para una concentración

Velocidad de reaccion Mn/min mL

Cuadro 3. Absorbancia de la muestra en una dilución de 0,1:12

Sustrato Tiempo Absorbancia P DILUCION PRODUCTO U Mm/min

Gráfico 3. Recta de velocidad e reacción para una concentración

velocidad de reaccion Mm/min mL

0,150 y = 0,0004x + 0,1616

Gráfico 4. Recta comparativa de velocidad e reacción para una

VELOCIDAD DE REACCION Mm/mL min

BACHT RLF Lineal (RLF) Lineal (RLF)

Gráfico 5. Recta comparativa de velocidad e reacción para una

VELOCIDAD DE REACCION Mm/mL min

Haciendo una revisión de la velocidad de obtención del producto