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La transmission synaptique
Nicola Kuczewski
Centre de Recherche en Neuroscience de Lyon
nicola.kuczewski@univ-lyon1.fr
Rappel des principes de base de neurophysiologie
Des stimuli:
-Chimiques (ex. neurotransmetteurs, molécules olfactives et gustatives...
-Physiques (ex. lumière, ondes sonores, pression, chaleur..)
Quel que soit le stimulus, celui-ci est converti en signal électrique (message nerveux)
par le neurone
Genèse de l’activité électrique
[Na+]ext=145 mM [K+]ext=5 mM [Cl-]ext=125 mM [Ca2+]ext=5 mM
1-Polarisation de la membrane 2 K+
+ + +
+ + + +
+ +
Extracellulaire +
+ ++ + + + + + + + + + + ++
+
+ + + + + + + + + + ++
Membrane neuronale
+ +
+
+
3 Na+
Intracellulaire + + [Na+]int=12 mM [K+]int=140 mM [Cl-]int=15 mM [Ca2+]ext=0,0001 mM
+
La polarisation est due à des transporteurs membranaire d’ions
La membrane neuronale est polarisée ( ex. pompe sodium potassium : 2 K+ vers l’intérieur 3 Na+ vers l’extérieur)
Potentiel membranaire (Vm) Création d’un gradient de concentration pour différents ions
≈ -60 ÷ -70 mV
a g
b
Vm
Potentiel Post Synaptique Excitateur (PPSE)
Temps (ms)
PA
La modification du Vm est proportionnelle à l’intensité du stimulus
Au delà d’un certain seuil, la dépolarisation active des canaux dépendant du voltage (Na+ et K+).
Genèse du Potentiel d’Action (PA)
Le PA est l’unité de codage de l’information neuronale
Soit directement
Voltage imposé
Dépolarisation du Vm Hyperpolarisation du Vm
Courant imposé
La synapse
Le site neuronal qui permet la transmission du signal électrique
du neurone présynaptique au neurone postsynaptique
Dendrite de la CM
+ -
Dendrite de la CG
-Électrique
-Chimique
La continuité spatiale est due à des jonctions serrées (gap junctions) entre les neurones
qui sont constituées par des hémi-canaux(protéines apparentées à la famille des connexines,CX)
Les synapses électriques sont présentes dans des populations
neuronales spécifiques (qui présentent aussi des synapses chimiques)
Ex :
Cellules horizontales de la rétine
Interneurones du cervelet
Loi d’Hom
U=RI
Vm=RmI
PA présynaptique
1-Rapidité
2-Transmission analogique
La dépolarisation post synaptique est proportionnelle
à la dépolarisation présynaptique.
Ne nécessite pas du PA
3-Bidirectionnalité
Fonction de la synapse électrique
Participe à la synchronicité de l’activité électrique de la population neuronale connectée
Neurone
Neurone
PA PA PA PA
Long et al 2002
Neurones du noyau olivaire inférieur
Dans le néocortex les interneurones de la même classe sont connectés
par des synapses électriques et chimiques
Neurone pyramidale
Synapse chimique
Terminaison présynaptique
Elément postsynaptique
7- Le NT active les récepteurs 8- Ouverture
post-synaptiques des canaux 9- Modification du potentiel
membranaire du neurone
Le neurotransmetteurs
Quatre classes de neurotransmetteurs (structure chimique)
I Amino acides :
Glutamate
Acide γ-aminobutyrique (GABA)
Aspartate
Glycine
II Amines :
Dopamine (DA)
Histamine (HIST)
Noradrénaline (NA)
Sérotonine (5-HT)
Acétyle Choline
IV Purines
Adénosine triphosphate (ATP)
Classification en fonction des effets cellulaires
GABA
Glycine
5-HT permeable aux cations a une action dépolarisante en agissant sur les récepteurs 5-HT3
Dans le SNC la transmission aminergique est cholinergique est organisé
principalement en noyaux de projections
Les NT sont synthétisés dans la terminaison nerveuse et chargés dans les vésicules de sécrétions
par des transporteurs spécifiques
Dans la vésicule de sécrétion
Amines : DA-ß-hydroxylase
Neurones NA
Catécholamines (NA et DA) : DBH
Aromatic acid NA
Tyrosine
hydroxylase(TH) decarboxilase
AADC
Tyrosine DOPA DA DA
Aromatic acid
Tyrptophane decarboxilase
hydroxylase AADC Neurones DA
Tryptophane 5-HTP 5-HT
Acétylcholine :
Synthèse des neurotransmetteurs
Les NT sont synthétisés dans la terminaison nerveuse et chargés dans les vésicules de sécrétion
par des transporteurs spécifiques
Amino acides :
Glutamate et GABA GABA oxoglutarate Glutamatergic acid
transaminase decarboxilase
Cycle de Krebs GABA-T GAD
Glucose α-ketoglutarate Glutamate GABA
Glutamine Glutaminase
La protéine GAD est utilisée en immunohistochimie pour mettre en évidence les synapses
GABAergiques
Transporteurs vésiculaires
Tous les transporteurs utilisent le gradient H+ produit par la proton ATPase pour échanger les
protons avec une molécule de NT
Transporteur NT
NT
H+ H+
H+
H+
Technique : optogénétique
Saunders et al 2015
Certains neurones co-expriment et libèrent plusieurs NT
Technique : optogénétique
Consiste à utiliser des protéines membranaires exogènes qui sont sensibles à la lumière (opsines)
Exemple :
Channelrhodopsine (algue) Halorhodopsine (bactérienne)
Dépolarisant Hyperpolarisant
Les opsines sont exprimées dans les neurones dont nous voulons contrôler l’activité
La ChR2 (associé à la EYFP) est exprimée de manière sélective dans les neurones cholinergiques
Enregistrement électrophysiologiques
des interneurones sur tranches de cortex
Saunders et al 2015
Certains neurones co-expriment et libèrent plusieurs NT
Ex. les terminaisons cholinergiques corticales libèrent de l’ACh et du GABA sur les interneurones
Mesure des courants ioniques produits par la stimulation des fibres cholinergiques
Stim.
optogénetique
- 0 mV potentiel d’inversion
- 70 mV potentiel d’inversion
de la transmission glutamatergique et
de la transmission GABAergique
cholinergique
NBQX +CPP antagonistes de
la transmission glutamatergique Transmission inhibitrice
MEC MLA, DHBE antagonistes de due à la stimulation
la transmission cholinergique
des fibres cholinergiques
Transmission excitatrice due
à la libération d’ACh Saunders et al 2015
Certains neurones co-expriment et libèrent plusieurs NT
Ex. les terminaisons cholinergiques corticales libèrent de l’ACh et du GABA sur les interneurones
Mesure des courants ioniques produits par la stimulation des fibres cholinergiques
- 0 mV potentiel d’inversion
de la transmission glutamatergique et Transmission inhibitrice
cholinergique est bloquée par un antagoniste
Transmission inhibitrice de la transmission GABAergique
due à la stimulation
des fibres cholinergiques
Saunders et al 2015
Certains neurones co-expriment et libèrent plusieurs NT
Ex. les terminaisons cholinergiques corticales libèrent de l’ACh et du GABA sur les interneurones
VGAT
GABA Le GABA est transporté dans les vésicules par VGAT
(gêne Slc31a1)
H+ H+ H+
H+
Sauvage KO
Saunders et al 2015
Certains neurones co-expriment et libèrent plusieurs NT
Conclusion
Saunders et al 2015
Certains neurones co-expriment et libèrent plusieurs NT
Quel rôle ?
Neuropeptides
Synthétisés dans le Golgi et transportés dans l’axone (mais libérés aussi par les dendrites)
AZ
PSD
AZ : Active Zone
PSD : Post Synaptic Density
La dimension particulièrement important du Calice de Held ( ~0,1 µm2) facilite l’analyse structurelle et
électrophysiologique
Seulement une partie des vésicules se trouvent dans la zone active
« Pool » de réserve
Redily releaseble pool
AZ (RRP)
AZ AZ
PSD
AZ
AZ
AZ
« Pool » de réserve
t-SNAREs membranaires :
Syntaxin
SNAP25
La sensibilité au Ca2+ est due à la protéine Synaptotagmin
Vésicule
Active zone
Sudhof 2013
La fonctionnalité des protéines SNARE est empêchée par le toxine botulique et
la toxine tétanique
Clostridium botulinum
Bactérie anaérobique du sol
Production de la toxine par les spores en conditions anaérobiques
Clostridium tetani :
Bactérie anaérobique du sol (retrouvée aussi dans les fèces animales)
Infection suite à blessures
Les deux toxines rentrent dans la terminaison axonales au niveau de la jonction neuromusculaire
Ca2+
RIM
Sudhof 2013
La libération du NT est proportionnelle à la [Ca2+] dans la terminaison synaptique
Flash de lumière UV
Ca2+
Ca2+
Calcium libre
Chélateur calcique
Fluorescence
Time (sec)
Exemple de réponse Ca2+ neuronale
Calcium uncaging + imagerie calcique + electrophysiologie
Miniature EPSC(mEPSC)
Ca2+ présynaptique
EPSC postsynaptique
0.1
PA physiologique PA artificiel
Diaz-Rojas et al 2015
Neurones du Purkinji connectées, en culture
Enregistrement somatique Diaz-Rojas et al 2015
(postsynaptique)
des PA de différents
amplitudes
Diaz-Rojas et al 2015
Sudhof 2013
Recyclage des vésicules synaptiques (endocytose)
Méthodes d’étude du recyclage vésiculaire
1 2
pH 5,5
Styryl Dyes
~100 sec sont nécessaires pour que le milieu des vésicules soit acidifié après libération
Burrone et al 2007
3 Mesure électrophysiologique de la variation de la capacitance membranaire
I
Cm=ϵ surface membranaire
Dépolarisation Dépolarisation
présynaptique présynaptique
-Pour de libérations importantes le temps de recyclage est de l’ordre de quelque dizaine des seconds
4 Méthode « flash and freeze »
Libération
Watanabe et al 2013
Après fusion le nombre des vésicules liées à la membrane diminue
Watanabe et al 2013
Deux types de endocytoses semblent exister
Endocytose
Ultrarapide
???
Récepteurs postsynaptiques
Neurotransmetteur
G
Activation canaux
Messager secondaire
Ionotrope Métabotropes
AMPA
mGluR 1-8
Glutamate (α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid)
NMDA
(N-methyl-D-aspartate receptor)
DA D 1-5
NA α 1-2 β 1-3
Transmission inotrope
Neurotransmetteur
Flux ionique
2- La force électromotrice
- - - - - - - -
-------- -------- +++++++ +++++++
Vm Vm
+++++++ +++++++ --------
--------
- - - -
- -
Change en fonction du Vm
Transmission inotrope
Le potentiel d’’inversion d’un ion X est le Vm pour le quel la force électromotrice contrebalance
la force osmotique
- - - -
+++++++ +++++++
= -------- --------
Vm
- -
-
Le potentiel d’’inversion d’un ion X est le Vm pour le quel la force électromotrice contrebalance
la force osmotique
Equation de Nerst
Potentiel d’équilibre
Que se passe-t-il lorsque les deux canaux sont activés en concomitance ?
Plested 2016
La majorité des récepteurs ionotropes désensibilisent rapidement une fois activés par le NT
La réponse postsynaptique produite par l’activation des récepteurs ionotropes
dépend de plusieurs facteurs
Quantité de NT libéré
Origlia et al 2006
La plasticité synaptique corticale nécessite l’activation des mAChR
Quels récepteurs ?
GABA
GABAB1 GABAB2
Canal K+ Canal Ca2+
K+ a g Ca2+
b
mV
GABA
GABAB1 GABAB2
PLC
+ b
a
g
DAG +IP3
PLC= phospholipase C
Interaction entre transmission inotrope et métabotrope
Le GABA peut sortir de la fente synaptique pour activer des terminaisons voisines (spill over)
Récepteur GABAB
Réduction de libération du NT
Canal K+ Terminaison
GABAergique Terminaison
glutamatergique
Canal Ca2+
GABA
Glutamate - -
Entrée Ca 2+ Entrée Ca 2+
Sortie K+
+
IPSP
+ Activation des canaux K+
postsynaptiques EPSP
(courant inhibiteur lent)
mV
Récepteurs présynaptiques (autorécepteurs)
De Mei et al 2009
Les récepteurs présynaptiques noradrénergiques sont cibles thérapeutiques
des traitements antidépressives
Augmentation libération NA
Dépression
Traitement:
Stephen M Stahl
Psychopharmacologie essentielle
Densité postsynaptique (PSD)
Matrice protéinique
Akula et al 2016
Agrégat protéinique maintenu par des filaments d’actine (~460 types de protéines)
Protéines d’adhésion cellulaire (ex.Neuroligin, N-cadherin)
Protéines d'échafaudage ( ex. PSD 95)
Protéines de signalisation (ex. CaMKII)
La protéine PSD-95 est spécifique des synapse glutamatergique
Marquage immunologique
PSD 95
Rôle :
Diffusion latérale
La motilité et stabilisation des récepteurs à la synapse sont ajustées par différents stimuli :
Activité neuronale
Hormones
Toxines
Synapses GABAergiques
Quel fonction?
Quel fonction?
Quel fonction?
Symptômes:
Perte de mémoire
Progression de la pathologie
Anhédonie
Irritabilité et agitation
Démence
La maladie d’Alzheimer est due à une
Whitehouse et al 1982
Système cholinergique
Neuromodulateur
«Gating » de l’information
Vigilance
sensorielle
Déficits cognitifs
Rivastigmine
Galantemine
http://peaknootropics.com
Action des
droguedes
Précurseurs s NT s des NT
Actionde
Inhibiteurs des droguedes
la synthèse s NT
Inhibition d’auto-récepteurs qui
Action des
inhibent droguedu
la libération s NT
Action
Bloqueurs des drogue
du remplissage s
de vésicules
ActionActivation
des drogued’auto-récepteurs qui
s
inhibent la libération du NT
Stimulateurs
Action desde la drogue
libérationsdu NT
Action des
Stimulateurs desdrogue s
récepteurs
Action des drogue
Bloqueurs de la recapture
s du NT
Action des
Inhibiteurs des drogue
récepteurss
EPSP
Aussi appelé paired pulse potentiation, PPT( potentialisation produite par stimulation apparié)
Plasticité synaptique à court terme
Dépression
stimulation
présynaptique
Aussi appelé paired pulse depression, PPD( dépression produite par stimulation apparié)
Site d’expression de la plasticité synaptique à court terme
Mécanismes
Pré-synaptiques
(facilitation et dépression)
Mécanismes
Post-synaptiques
(dépression)
Mécanismes pré-synaptiques (facilitation)
Modification de la disponibilité de Ca2+
VDCC
Dépolarisation
Ca 2+
La facilitation synaptique est produite lorsque une
activité présynaptique à haute fréquence
augment le Ca2+ synaptique
PA
VDCC
Ca 2+
1er PA 2em PA
PA
Ca2+
EPSP
Mécanismes aboutissant à une augmentation de disponibilité de Ca2+
Mécanisme 1: un élargissement des PAs se produit pendant une activité à haute fréquence
ce qui induit une augmentation de Ca 2+ dans la terminaison pré-synaptique
Na+ Na+
Na+ Na+
K+ K+
Si le PA suivant arrive avant la de-inactivation
des canaux K+, la repolarisation est retardée
Vm en mV
+ 40
Na+
- 40
K+
- 80
Temps (ms)
Les canaux K+ nécessitent un certain temps pour pouvoir être à nouveau activés (période réfractaire)
Mécanismes aboutissant à une augmentation de disponibilité de Ca2+
Mécanisme 2: Le Ca 2+ produit par les premiers PAs est tamponné par des protéines
du cytoplasme
( Calcium binding protein ; ex. Calbinding-D28K; parvalbumine)
1 er potentiel d’action 2 em potentiel d’action
PA PA
2 em EPSP
1 er EPSP
ER
mitochondrie
+
Mitocondre
Na
Ca2+
EPSP
+ 2+
Na -Ca excanger
échangeur 2+
Ca ATPase
Mécanismes aboutissant à une augmentation de disponibilité de Ca2+
Mécanisme 3:
Un partie du Ca 2+ n’arrive pas à être extrudée avant l’arrivée des PAs suivantes
(Ca 2+ résiduel)
PA
+ 2+
Na -Ca excanger 2+
Ca ATPase
échangeur
Mécanismes aboutissant à une augmentation de disponibilité de Ca2+
Mécanisme 3:
Un partie du Ca 2+ n’arrive pas à être extrudée avant l’arrivée des PAs suivantes
(Ca 2+ résiduel)
ER
mitochondrie
+
Mitocondre
Na
Ca2+
EPSP
+ 2+
Na -Ca excanger
échangeur 2+
Ca ATPase
Mécanismes pré-synaptiques (dépression)
Mécanisme1:
L’inactivation de canaux Na+ réduit les PAs pré-synaptiques
Na+
Ouvert
Fermé Na+
inactivé
Dépression de la
transmission post-synaptique
Période
réfractaire
Fermé
activable
Mécanismes pré-synaptiques (dépression)
1er PA PA
La libération du neurotransmetteur
est proportionnelle au Readily Releasable Pool
Reserve pool
2em PA PA
La libération de neurotransmetteur
Reserve pool est réduite
GABA
GABAB1 GABAB2
Canal Ca2+
a g Ca2+
b
L’activation des récepteurs GABAB, qui sont activés par le GABA libéré pendant le 1er PA,
réduit la probabilité de libération de GABA pendant le 2ème PA
1st Stimulus
2nd Stimulus
1st stimulus 2nd stimulus
GABAA
Cl-
GABAB
50 pA
100 ms
L’activation des récepteurs GABAB active une voie de signalisation intracellulaire aboutissant
à l’inactivation de canaux calciques pré-synaptiques
Mécanismes pré-synaptiques (dépression)
L’activation des récepteurs GABAB, qui sont activés par le GABA libéré pendant le 1er PA,
réduit la probabilité de libération de GABA pendant le 2ème PA
1st Stimulus
2nd Stimulus
1st stimulus 2nd stimulus
GABAA
Cl-
GABAB Crt
50 pA CGP 35348
100 ms Antagoniste des
récepteurs GABAB
Mécanisme1 :
Désensibilisation des récepteurs post-synaptiques
La fréquence d’activation
Facteurs modulateurs
PA présynaptiques