Extracción y Clean-Up de Residuos de Pesticidas

Rápida y Simple con la Técnica QuEChERS

„ Incremente por cuatro la velocidad de tratamiento
„ Reduzca significativamente los costes de materiales
„ Productos preparados con productos ultra-puros y pre-pesados
Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, y Safe, el método QuEChERS para la extracción de
pesticidas en alimentos, se basa en el trabajo de investigación realizado por el Departamento
de Agricultura de Estados Unidos(1). Además de usar menos solventes y materiales frente a los
métodos tradicionales de Extracción en Fase Sólida, QuEChERS emplea un método nuevo y
mucho más rápido mediante Extracción en Fase Sólida Dispersiva (dSPE). Este método ha
sido aprobado por la AOAC (Método 2007.01) y en Europa bajo prEN-15662. Estos métodos
tienen varias etapas comunes:
PASO 1: Preparación y Extracción de la Muestra.
Se homogeneiza el producto con la cantidad de agua necesaria, ver TABLA 1. Se añade acetonitrilo
como solvente de extracción. Se añaden sales, ácidos, tampones para mejorar le eficacia de la
extracción y proteger compuestos sensibles. Se pueden añadir estándares de fortificación y/o patrones
internos para comprobar la eficiencia de la extracción.
PASO 2: Limpieza de la Muestra.
Una alícuota del extracto se limpia mediante Extracción en Fase Sólida Dispersiva (dSPE), elemento
clave en la técnica QuEChERS. Se preparan unos tubos de Polipropileno de centrífuga con cantidades
precisas de MgSO4 y sorbentes de Extracción en Fase Sólida para eliminar el exceso de agua y
contaminates no deseados de las muestras extraidas(2). Tras agitación y centrifugación, los extractos
limpios están listos para ser analizados por GC/MS o LC/MS.
PASO 3: Análisis de las Muestras
Se puede ajustar el pH de las muestras para proteger pesticidas sensibles y/o cambiar el solvente
para mejorar el análisis por GC/MS o LC/MS. Se pueden añadir patrones internos.

El procedimiento general descrito se basa en el “AOAC Official Method 2007.01, Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction
and Partitioning with MgSO4”(2). El método Europeo prEN-15662 sigue etapas similares. En la TABLA 2 se muestra un ejemplo de
tratamiento para fresas. La TABLA 3 muestra las tasas de recuperación obtenidas en fresas.

Extracción (ver QuEChERS adecuados en TABLA 4)
1. Homogeneizar el producto frío. Añadir
agua si el producto contiene poca agua
o es un producto seco(1) Ver TABLA 1.
Pesar el homogeneizado (8-15g) en un
tubo de centrífuga limpio de 50 mL.
Limpieza (ver QuEChERS adecuados en TABLA 4)
6. Tomar una alícuota del sobrenadante. La
cantidad dependerá del tipo de tubo de
dSPE seleccionado. Por cada mL a tratar
se necesitan 50mg PSA, 150mg MgSO4,
50mg C18, o 50mg de carbón grafitizado.

2. Añadir 15 mL de Acetonitrilo con un 1% 7. Transferir el volumen de extracto elegido a

de Ácido Acético y la cantidad uno de los tubos de limpieza de la TABLA 4.
adecuada de Patrón Interno

3. Añadir el contenido de un tubo 8. Agitar a mano o en VORTEX durante 30”.

CL2660 (o, en función del
método CL1510 o DO3380).

4. Agitar a mano o en VORTEX durante 9. Centrifugar a 3.000 rpm durante 3‘ para

30-60”. separar el material sólido.

5. Centrifugar a 3.000 rpm durante 3‘ para 10. Transferir la muestra a un vial para inyector
separar el material sólido. y analizar por GC o LC. Las etapas para el
análisis de analitos específicos se detallan
el “AOAC Official Method 2007.01”(2).

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 TABLA 1
Matriz Cantidad Muestra Dilución
Aceite 1,5 mL 1,5 mL C6(*)
Cereales 5g 10g H2O
Especias 2g 10g H2O
Frutas, Vegetales 25-80% Agua 10 g csp 10g H2O(**)
Frutas,Vegetales >80% Agua 10 g no
Frutos Secos 5g 7,5g H2O
Naranja, limón 15 g no(***)
Miel 5g 10g H2O
(*) Procedimiento especial con CL2680
(**) La cantidad de H2O a añadir depende del contenido original. El contenido en agua del homogeneizado ha de ser de 80% aprox.
(***) En extractos muy ácidos puede ser conveniente ajustar el pH con la adición de NaOH diluido al extracto final.

TABLA 2
Ejemplo de Tratamiento de Fresas con QuEChERs y Cálculo de las Tasas de Recuperación
Preparación y Extracción de la Muestra
Muestra: 10g de fresas se homogeneizan y se disponene en un tubo vacío de centrífuga de 50 mL de PP.
Solvente: Añadir 10mL de acetonitrilo al homogeneizado. Agitar durante 1 minuto hasta obtener una
dispersión homogénea.
Sales: Añadir 6 g MgSO4 Anhidro, 1.5g NaCl, 1.5g Citrato de Sodio dihidrato y 0.75g Citrato de Sodio
sesquihidrato. Producto DO3380 Agitar durante 1 minuto. Centrifugar y tomar el
sobrenadante para la limpieza de la muestra. Los estándares de Pesticidas (200ng/mL) se añaden ahora al
sobrenadante.
Limpieza de la Muestra
Tubo QuEChERS: 1mL del sobrenadante de la etapa anterior se vierte en varios tubos de PP para centrífuga de 2 mL
cada uno con las siguientes composiciones de sorbentes:
A. 50mg PSA + 150mg MgSO4 (CL2680)
B. 50mg PSA + 150mg MgSO4 + 50mg C18 (CL2690)
C. 50mg PSA + 150mg MgSO4 + 50mg GCB (CL2670)
Clean up: Agitar las muestras con los adsorbentes durante 30” (el que contiene carbón durente 120”), y
centrifugar para producir un sobrenadante claro apto para GCMS.
Patrón Interno: Pentacloronitrobenceno en solución de ácido fórmico pH 5 (o otros P.I. convenientes).
PSA. Material de intercambio basado en amina primaria y secundaria.
GCB. Negro de carbón grafitizado.

TABLA 3
Recuperación de Pesticidas en Extractos de Fresa tratados con C18 o GCB, frente solo PSA
Pesticida CAS Acción/Uso Clasificación C18 (1) GCB (2)
4,4-DDT 50-29-3 Insecticida Organoclorado 102 95
Acephate 30560-19-1 Insecticida Organofosforado 128 147
Bifenthrin 82657-04-3 Insecticida Piretroide 106 81
Captan 133-06-2 Fungicida Organoclorado 88 91
Carbaryl 63-25-2 Insecticida Carbamato 114 111
Chlorothalonil 1897-45-6 Fungicida Organoclorado 125 13(3)
cis-Permethrin 52645-53-1 Insecticida Piretroide 106 65
Deltamethrin 52918-63-5 Insecticida Piretroide 97 52
Diazinon 333-41-5 Insecticida Organofosforado 108 127
Dichlofluanid 1085-98-9 Fungicida Organoclorado 122 103
Dichlorvos 62-73-7 Insecticida Organofosforado 111 116
Dicofol 115-32-2 Acaricida Organoclorado 98 54
Dimethoate 60-51-5 Insecticida Organofosforado 124 151
Endrin 72-20-8 Insecticida Organoclorado 104 101
Fenhexamid 126833-17-8 Fungicida Organoclorado 118 77
Fenpropathrin 39515-41-8 Insecticida Piretroide 113 96
Folpet 133-07-3 Fungicida Organoclorado 108 63
Imazalil 35554-44-0 Fungicida Organonitrogenado 115 95
Iprodione 36734-19-7 Fungicida Organonitrogenado 118 90
Malathion 121-75-5 Insecticida Organofosforado 124 160
Metalaxyl 57837-19-1 Fungicida Organonitrogen 105 117
Methamidophos 10265-92-6 Insecticida Organofosforado 105 107
Mevinphos 7786-34-7 Insecticida Organofosforado 112 130
Myclobutanil 88671-89-0 Fungicida Organonitrogenado 119 114
o -Phenylphenol 90-43-7 Fungicida n/d 106 97
Omethoate 1113-02-6 Insecticida Organofosforado 120 119
Propargite 1 2312-35-8 Acaricida Organosulfurado 110 95
Propargite 2 2312-35-8 Acaricida Organosulfurado 121 114
Thiabendazole 148-79-8 Fungicida Organonitrogenado 88 14(3)
trans -Permethrin 51877-74-8 Insecticida Piretroide 109 71
Vinclozolin 50471-44-8 Fungicida Organoclorado 102 98
1. Recuperación 50mg C18 / 50mg PSA 2. Recuperación 50mg GCB / 50mg PSA 3. Muy retenidos por GCB. Requiere eluyente especial (Acetona:Tolueno 3:1)

TABLA 4
QuEChERs disponibles
Descripción Material Métodos Cantidad
Tubos Centrífuga PP, 50mL para Extracción de Muestra
DO3380 6 g MgSO4 Anhidro, 1.5g NaCl, 1.5g Citrato de Sodio Mini-Multiresiduo, EU prEN-15662 250
dihidrato y 0.75g Citrato de Sodio sesquihidrato
CL2660 6 g de MgSO4 Anhidro y 1.5g de Acetato de Sodio Anhidro AOAC 2007.1 250
CL1510 4 g de MgSO4 Anhidro y 1.5g de NaCl. Mini-Multiresiduo 250
Tubos Centrífuga PP, 15mL para Clean-Up de Muestra
CL2640 900 mg de MgSO4 Anhidro, 300 mg PSA y 150 mg C18 E AOAC 2007.1, Mini-Multiresiduo 50
CL1520 900 mg de MgSO4 Anhidro, 300 mg PSA y 150 mg GCB AOAC 2007.1, Mini-Multiresiduo 50
Tubos Centrífuga PP, 2mL para Clean-Up de Muestra
CL2680 150 mg de MgSO4 Anhidro y 50 mg PSA AOAC 2007.1, Mini-Multiresiduo 100
CL2690 150 mg de MgSO4 Anhidro, 50 mg PSA y 50 mg C18 E AOAC 2007.1, Mini-Multiresiduo 100
CL2670 150 mg de MgSO4 Anhidro, 50 mg PSA y 50 mg GCB AOAC 2007.1, Mini-Multiresiduo 100
Tubos EFS PP, 6mL para Clean-Up de Muestra. Variante de Schenck
CL2700 200 mg carbón, 400 mg de PSA frit de PTFE Variante de Schenck(3) 30
CL2710 250 mg carbón, 500 mg de PSA frit de PTFE Variante de Schenck(3) 30
CL2720 500 mg carbón, 500 mg de PSA frit de PTFE Variante de Schenck(3) 30

1. Michelangelo Anastassiades, Steven J. Lehotay, Darinka ‘tajnbaher, Frank J. Schenck. “Fast and Easy Multiresidue Method Employing
Acetonitrile Extraction/Partitioning and Dispersive Solid-Phase Extraction for the Determination of Pesticide Residues in Produce.” J. AOAC
International, 2003, vol. 86(22), pp.412-431.
2. AOAC Official Method 2007.01, “Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partitioning with Magnesium Sulfate.”
3. Schenck, F.J., SPE Cleanup and Analysis of PPB Levels of Pesticides in Fruits and Vegetables. Florida Pesticide Residue Workshop, 2002.

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