UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS MANUAL DE PRACTICAS DE

BIOQUIMICA

“AÑO DE LA INVERSIÓN PARA EL

DESARROLLO RURAL
Y LA SEGURIDAD ALIMENTARIA”

UAP ESCUELA : FARMACIA Y BIOQUIMICA

CURSO : BIOQUIMICA II

DOCENTE : ING. MILAGROS QUEZADA

CICLO :
VI
INTEGRANTES:

 BRICEÑO BALMACEDA ,ROSMERY

 BERNAL LEON CYNTHIA PAOLA
 RAMOS RIOS YOHANA

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HIDROLISIS DE LAS GRASAS POR ACCION DE LA LIPASA PANCREATICA

I. OBJETIVOS
 Determinar los meq-acido grasos liberados por
acción de la pancreática.
 Observar como es que actua y que efectos trae
las sales biliares sobre el aceite.
 Observar la actividad de la enzima lipasa
indirectamente por titulación de los acidos
grasos liberados utilizando en la titulación
usando la base de hidróxido de sodio

II. FUNDAMENTO TEORICO

Las grasas de la dieta incluyen triglicéridos,
fosfolípidos y colesterol. Los trigleceridos son una rica
fuente de calorías, y constituyen el mayor porcentaje
de las grasas incorporadas en la dieta. La digestión de
las grasas comprenden la hidrolisis de estos
triglicéridos a acidos grasos libres y monogliceridos
para que puedan ser captados por las células. Este
proceso comienza en el estomago, mediante la lipasa
gástrica que es secretada por las células principales
que también secretan pepsina. Esta lipasa gástrica es
especialmente importante en el recién nacido para
digerir la grasa de leche.
La lipasa pancreática es esencial para la absorción
normal de las grasas, pues en casos en que el
páncreas no funcione en mas de un 70%, la grasas no
se absorbe.
Las sales biliares también tienen un rol importante en
la digestión y absorción de las grasa no se absorbe.
Las sales biliares también tienen un rol importante en
la digestión y absorción de las grasas. Son
sintetizadas, a partir del colesterol, en el hígado en
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cantidad aproximada de 200 a 600mg. Por dia, y

excretadas en la bilis junto con los aminoácidos glicina
y taurina. La mayor parte de las sales biliares
conjugadas se absorben nuevamente en el ilion, y
luego de entrar a la vena porta, estan sujetas a la
llamada “circulación enterohepatica” (intestino-
higado).
Por este proceso, un 90% de las sales biliares que
llegan al ileon es reabsorbidos, como consecuencia,
unos 200 a 600 mg. De sales biliares son excretadas
en la materia fecal por dia, a pesar de que sean 3ó 4
gr. Que pasan a través del circulo enterohepatico
muchas veces por dia. Esto permite que pueda entrar
al duodeno ( a través de la via biliar principal unos 20
a 30 gr. De sales biliares por dia para participar
activamente, en la digestión de los alimentos.
Si el ileon esta enfermo o se lo ha removido en una
operación, se produce una significativa perdida de
sales biliares por materia fecal. Esto puede ocasionar
una mala absorción de las grasas y de las vitaminas
solubles en grasas, como las vitaminas A, D y K.
Los productos de la digestión y los trigleceridos
(acidos grasos libres y monogliceridos) pueden luego
penetrar en la celula intestinal ( enterocito). Allí son
sintetizados nuevamente y envueltos para ser
liberados a la circulación y distribuidos por todo el
organismo.

III. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

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 Aceite neutralizado
 Fenoltaleina
 NaOH
 Buffer fosfato 0.1 mol/L
 Sales biliares 1% en buffer fosfato
0.1 mol/L pH =8
Páncreas 1% en buffer fosfato 0.1
mol/ pH= 8
Pipetas

VI. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

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1. Primero cogemos tres recipientes, de los cuales agregamos cada

muestra de aceite, bilis y el páncreas.

Aceite Extraemos 1ml de Agregamos buffer

aceite 0.1mol/L

2. Cogemos un recipiente y colocamos a la bilis

Bilis Extraemos 1ml de Añadimos 0.1mol/L de

sales biliares buffer
3. En este caso trabajaremos con las páncreas, la cual será extraída
una cierta cantidad para experimentación.

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pancreas Extraemos 1ml de páncreas,

luego colocamos en otro
recipiente la cual añadimos
buffer fosfato 0.1 mol/L
4. para cada muestra de páncreas, sales biliares y aceite. se va a
medir el pH.

MUESTRA DE PANCREAS
Antes de medir cada muestra,
se tiene que calibrar el
pechimetro, para cada muestra

En esta imagen podemos

observar que estamos
agregando NaOH a la
muestra de páncreas para
suber el pH, y asi llegar
hasta pH=8

Agregamos poco a
poco NaOH a la
muestra de páncreas,
empezó a aumentar el
pH, luego logramos
nuestro objetivo pH=
8

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MUESTRA DE ACEITE

Observamos la
muestra de aceite,
medimos su pH, la
fue el inicio 7.12,
como no llego a
pH=8 tuvimos que
añadir unas cuantas
gotas de NaOH para
alcanzar el pH=8

Se agrega NaOH que es una base, solo se

añade a la muestra en caso que no llegue a
pH=8

Por ultimo habíamos

agregado 3 gotas de
NaOH a la muestra de
aceite y nos dio como
resultado
aproximadamente de
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pH=8.12
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Muestra de
aceite

MUESTRA DE SALES BILIARES

La muestra de la sales Por esta razón habíamos añadido

biliares tubo pH=7.97 inical NaOH como resultado se obtuvo
la cual no llego al pH=8 aproximadamente pH=8.03

5. En este procedimiento utilizaremos 4 tubos de ensayo para las

siguientes muestras páncreas, sales biliares y aceite.

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Tubo N°1 Agremos aceite neutralizado 1ml +

2ml de agua destilada + 5ml de
panceatina

Añadimos 2ml de
sales biliares en
buffer

TUBO N°2

Extraemos 1ml de aceite

neutralizado + 5ml de
pancreatina

Muestra de aceite
neutralizado

Añadimos 2ml de buffer fosfato 0.1mol/L

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También vamos agregar

2ml de agua destilada

Después agregamos 5ml

de pancreatina

TUBO N° B1

En el tubo N° B1 añadimos lo
siguiente:
Universidad 3ml de agua
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destilada
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2ml Sales biliares en

buffer

Añadimos 5ml de
pancreatina

Una vez que agregamos cada

solución, al tubo B2 empezamos
agitar

TUBO N°B2

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En el tubo N° B2 añadimos
2ml buffer fosfato 0.1mol/L

tubo N° B2 agregamos 3ml

de agua destilada
Agitamos la
muestra para
que se pueda
disolver bien

5ml de pancreatina

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIEMNTAL

Preparar tubos de ensayo según como se indica en la
siguiente tabla.

MUESTRAS tubos
Aceite neutralizado (ml) 1 B1 2 B2

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Buffer fosfato 0.1 mol/L 1 ≡≡≡ 1 ≡≡≡

pH8(ml) ≡≡≡ ≡≡≡ 2 2
Sales biliares en buffer 2 2 ≡≡≡ ≡≡≡
(ml)
Agua destilada (ml) 2 3 2 3
Pancreas (ml) 5 5 5 5

 Homogenizer y dejar incubar por 1 hora a 37°C

(baño maria)
 Agregar 3 gotas de fenoltaleina y homogenizar
 Luego titular con NaOH 0.05N (empezar con los
tubos blancos), hasta una coloración rosa,
anotarel gasto en ml.

RESULTADOS
Restar los blancos de sus respectivos tubos 1y 2, para
obtener el gasto de cada sistema.
G1=
GB1=
G1-GB1=
G2=
GB2=
G2-GB2=

Calcular los miliequivalentes de cada sistema.

Meq-ácido graso= Vol. NaOH X(NaOH)
Meq-ácido graso 1 = (G1-GB1)x 0.05 =0.195
Meq-ácido graso 2 = (G1-GB1)x 0.05 =0.041
En la parte de la titulación con NaOH señalaremos el
gasto del mismo en el siguiente cuadro:

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Volumen de NaOH gastados tubos

1 B1 2 B2

Realice un cuadro de comparación con las

otras mesas

Mesa m Eq 1 m Eq 2
1
2
3

VI. CUESTIONARIO
1. ¿CUAL ES LA ACCION DE LAS SALES BILIARES EN EL
SISTEMA DE REACCION?

2. ¿Por qué SE USO BUFFER FOSFATO 0.1M A PH8 EN

EL SISTEMA?

Por qué es una solución capaz de resistir cambios en el pH.

Consiste de una mezcla de ácidos y bases conjugados. Al
mezclarlos, se transforman en otra solución que gana y
pierde protones. Los sistemas buffer son utilizados cuando
existe la necesidad de mantener el pH de una solución a un
nivel constante

El sistema buffer de fosfato consiste en iones de fosfato de

dihidrógeno (H2PO4), el cual dona los iones de hidrógeno, y los

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iones de fosfato de hidrógeno (HPO42) los aceptan. Ambos

iones están en equilibrio el uno con el otro.. Cuando el fluido
celular llega a ser más ácido, HPO43 reacciona con iones extra
de hidrógeno para formar H2PO4 y el equilibrio se instala en la
izquierda. Cuando el fluido celular llega a ser alcalino, los iones
de hidróxido reaccionan con H2PO4 para formar HPO42 y el
equilibrio pasa a la derecha.

3. ¿PARA QUE SE USARON LOS TUBOS BLANCOS EN LA

PRACTICA?

4. EXPLIQUE EL PROCESO DE DIGESTION Y ABSORCION

DE LOS LIPIDOS.

El consumo diario de lípidos es de unos 60-100 g. En su mayor parte son triglicéridos y sólo una
pequeña porción se encuentra en forma de lecitinas, ésteres de colesterol o vitaminas liposolubles.

Emulsificación, digestión e incorporación a las micelas

La solubilización sólo es posible por incorporación a las micelas de la bilis. Cuando la bilis se
mezcla con las gotitas de lípidos en el intestino, los lípidos se absorben en las micelas y así se

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mantienen estables pasando de formar parte de gotas cuyo diámetro era de 0,5 a 1 μ, a micelas
cuyo diámetro es de 4 a 6 nm (aproximadamente 1.000 veces más pequeñas).

La digestión de los lípidos se lleva a cabo a nivel de intestino delgado gracias a la presencia de las
enzimas lipolíticas del páncreas. La lipasa pancreática, es la más importante, desdobla los
triglicéridos en monogliceridos y ácidos grasos; también parece existir una lipasa gástrica, capaz
de digerir triglicéridos de cadena corta, pero su actividad es muy reducida. La fosfolipasa disocia
las lecitinas en lisolecitinas y ácidos grasos. La colesterol-ésterhidrolasa hidroliza el colesterol
esterificado, originando ácidos grasos y colesterol libre.

Al mismo tiempo, la lipasa se absorbe también, manteniéndose anclada a los ácidos biliares
gracias a una proteína, la colipasa pancreática. Entonces se produce la hidrólisis de los
triglicéridos, con formación de monoglicéridos y ácidos grasos, que se incorporan a las micelas ya
que los productos de la hidrólisis de los lípidos son compuestos insolubles en el medio acuoso
intestinal.

Entrada al enterocito o célula epitelial intestinal

Una vez producida la incorporación a las micelas mixtas, los productos de la digestión de los
lípidos pueden ya ponerse en contacto con las microvellosidades y absorberse a través de la
membrana celular por difusión. Para penetrar en el interior de los enterocitos, las moléculas
lipídicas difunden primero a la zona de líquido que rodea a éstos y luego penetran a través de la
membrana epitelial. Las micelas difunden entonces en sentido retrógrado y vuelven a absorber
nuevos lípidos, que son transportados hacia las células de las vellosidades.

La absorción intestinal de los lípidos es un proceso muy eficaz. Más del 95% de los mismos se
recuperan, fundamentalmente a nivel duodenal, y sólo una pequeña cantidad se pierde cada día a
través de las heces.

Metabolismo celular y formación de quilomicrones

Una vez en el interior de las células intestinales, los productos de la digestión de los lípidos se
unen a una proteína transportadora de bajo peso molecular, la cual los lleva hasta el retículo
endoplasmático liso. En éste tiene lugar la resíntesis de triglicéridos, la de lecitinas y la de
colesterol esterificado.

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Los diferentes lípidos se agrupan posteriormente y se rodean de una cubierta de betalipoproteínas

formadas en el aparato de Golgi, dando lugar a la aparición de los quilomicrones. Su composición
aproximada sería: 87% de triglicéridos, 9% de fosfolípidos y colesterol libre, 3% colesterol
esterificado y 1% de vitaminas liposolubles y proteínas.

PROCEDIMIENTO ABSORCION Y DIGESTION

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5. REALICE UN ESQUEMA DE LA CLASIFICACION DE

LOS LIPIDOS

VII. CONCLUSIONES

VIII. RECOMENDACIONES

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 Mantenga la limpieza y el orden en los lugares

de trabajo.

Los reactivos deben estar siempre colocados
en el lugar que se indique.

Esta prohibido hacer experimentos no
autorizados por el profesor.

 Es obligatorio el uso permanente de la bata y

gafas de seguridad dentro del laboratorio.

 No toque con las manos directamente los

productos químicos, ni los pruebe.

IX. FUENTES DE CONSULTA

Laguna.fmedic,unam.mx/ evasquez/
…/triacilglecerido.html
www.doschivos.com/display.asp?ID=576&F
soco.com.ar/Biología/cuerpo…/Ap_dig.htm

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