UNIVERSIDAD AUTONOMA GABRIEL RENE MORENO

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y TECNOLOGIA

INVESTIGACION BIBLIOGRAFICA

METODOS CROMATOGRAFICOS

MATERIA: ANALISIS DE ALIMENTOS

SANTA CRUZ – BOLIVIA

INTRODUCCION

En 1906, el botánico Ruso M. Tswett realizó un experimento que condujo al

descubrimiento de lo que hoy conocemos como cromatografía. Colocó un extracto
de pigmentos vegetales en la parte superior de una columna de vidrio rellena de
carbonato de calcio (CaCO3). Al agregar éter, observó que la mezcla original se
separaba en diversas bandas coloridas que descendían a través de la columna a
diferentes velocidades.

Eligio el termino cromatografía procedente de las palabras griegas khromatos

(color) y graphops (escrito).

La cromatografía puede ser definida como cualquier método de separación que

depende de una absorción continua, partición o proceso de intercambio iónico;
agrupa un conjunto importante y diverso de métodos, que permite separar
componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas, lo que en
muchas ocasiones resulta imposible por otros medios.
Los métodos cromatográficos son hoy en día tan diversos que pocos de ellos
muestran alguna similaridad con la técnica original.
Las técnicas cromatográficos pueden clasificarse de acuerdo a la disposición de la
fase estacionaria como sigue:
 MÉTODO 1
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
PRINCIPIO:

Es una forma combinada de cromatografías de partición y adsorción en la que la

fase estacionaria es el agua absorbida presente en el papel, y el soporte es el
papel mismo. La fase móvil es una solución que consiste de un solvente o de una
mezcla de varios líquidos, incluyendo el agua. Las interacciones del soluto con el
papel hacen que los compuestos se desplacen a diferentes velocidades. Se deja
secar sobre el papel la muestra. Después de unos minutos cuando el disolvente
deja de ascender o ha llegado al extremo se retira el papel y se deja secar. Si el
disolvente elegido fue adecuado las sustancias tendran color propio y se verán las
manchas de distinto color separadas.

EQUIPAMIENTO:

Pese a no ser una técnica muy potente no requiere de ningún tipo de

equipamiento.

APLICACIONES:

La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para

realizar unos análisis cualitativos, es decir, que solo revelan la presencia de
componentes en una muestra. Un ejemplo que se hace sobre los vinos para saber
si les quedó ácido málico. Otro ejemplo en polvo que no se sabe si es droga, la
disuelves primero en un solvente adecuado y lo haces correr, el papel absorbe y
se van separando las sustancias, luego con un reactivo revelas y si sale positivo lo
que se estaba buscando aparece una mancha.

COSTOS:

Debido a su sencillez de análisis en el laboratorio esta es la técnica de más bajo

costo y eficiente.

NORMAS METODOLÓGICAS:
No se encontró normas que hagan uso de este método.

MÉTODO 2

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

PRINCIPIO:
La separación de mezclas de moléculas mediante la cromatografía de capa fina se
basa en el principio del reparto entre dos fases que es cuando una mezcla de
moléculas disueltas en un solvente determinado se pone en contacto con otro
solvente que sea inmicible con el primero, las moléculas disueltas se difundirán
hacia la nueva fase hasta alcanzar una concentración en cada fase que depende
de la solubilidad relativa de dicha molecula de fases.
Es una técnica cromatografica que utiliza una placa inmersa verticalmente. Este
placa consiste en una fase estacionaria polar (comúnmente se usa silica gel)
adherida a una superficie solida. La fase estacionaria es una capa uniforme de un
absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser vidrio, aluminio u otro
soporte.

EQUIPAMIENTO:

APLICACIONES:

Se utiliza este método principalmente para:

 Identificación de alguna sustancia conocida en una mezcla por su
comparación con un patrón de la sustancia pura.
 Medir el grado de pureza de una muestra, si existen varias manchas en el
cromatograma es señal de que existen varios componentes en la muestra.
 Obtener una medida semicuantitativa de algún componente. pichando la
misma cantidad en la placa cromatográfica, cuanto mayor sea la mancha
 obtenida en el cromatograma, la concentración de esa sustancia será
mayor.
COSTOS

Es un método muy útil, rápido de bajo costo en laboratorio.

NORMAS METODOLÓGICAS:

Algunas normas que hacen uso de este método son:

 NORMA ICONTEC 1232 Analisis de aflatoxina
 NORMA OFICIAL MEXICANA F163 S1980 Determinacion de aflatoxina en
cacao
 NORMA ICONTEC 4881 Analisis de zearalenona
 MÉTODO 3

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

PRINCIPIO
Las partículas cargadas negativamente se unen a la matriz solida cargada
positivamente, y son retenidas.
Las partículas cargadas positivamente son rechazadas por la matriz solida
cargada positivamente y son eluidas.
La elución de las partículas cargadas negativamente se consigue cambiando el ph
del solvente hasta igualarlo a su punto isoeléctrico o hasta invertir su carga neta.
La cromatografía de intercambio iónico conserva los analitos basándose en las
interacciones de Coulomb. La fase estacionaria muestra en la superficie grupos
funcionales iónicos (R-X) que interactúan con iones de carga opuesta del analito.
Este tipo de cromatografía se subdivide a su vez en dos técnicas. La
cromatografía de intercambio catiónico y la cromatografía de intercambio aniónico.

 La cromatografía de intercambio catiónico retiene cationes cargados

positivamente debido a que la fase estacionaria muestra un grupo funcional
cargado negativamente, como podría ser un ácido fosfórico.

 La cromatografía de intercambio aniónico retiene aniones usando

grupos funcionales cargados positivamente, como un catión de amonio
cuaternario.

EQUIPAMIENTO

 Equipo de cromatografía de intercambio ionico como el metrohm 850.

 Detector de conductividad
 Detector amperometrico de pulsos (PAD)

APLICACIONES
Es usada a menudo en purificación de proteínas, análisis de agua o control de
calidad.

 Utilidad clínica
La Cromatografía de intercambio iónico se emplea para medir los niveles de
Hemoglobina glucosilada, porfirinas y para purificación de agua y
producción de agua desionizada en pequeñas cantidades.
 Aplicaciones industriales
La Cromatografía de intercambio iónico permite el testeado cuantitativo de
los electrolitos y aditivos patentados de los baños de electrochapado. Esto
supone un avance en las pruebas de testeado cualitativo del
electrochapado o en pruebas menos precisas de testeo de UV. En estas
tanto los iones, como los catalizadores, como los abrillantadores, como los
aceleradores pueden ser medidos.

COSTOS

Normalmente se ocupa equipos como el HPLC marca Thermofinnigan. El costo

de análisis por cromatografía de intercambio ionico es 4.5 veces menor que por
métodos convencionales, la desventajas es el costo inicial del equipo y el costo
por el mantenimiento.

NORMAS METODOLOGICAS

Las normas que hacen uso de este método y que son avalados por la AOAC,
ASTM Y USEPA son:

 4110 APHA AWWAWPC Analisis de iones presentes en agua

 300.0 EPA Determinacion de iones presentes en agua
 MÉTODO 4

CROMATOGRAFÍA DE FILTRACION EN GEL

PRINCIPIO

Con la cromatografía de filtración en gel se separan moléculas en virtud de sus

diferencias de tamaño. La capacidad separadora reside en el gel cuya matriz
consta de un gran numero de esferas porosas microscópicas. Estas esferas están
constituidas por largas cadenas de polímeros unidas entre si por enlaces químicos
para formar una red tridimensional.

EQUIPAMIENTO Y MATERIAL

 Espectrofotómetro
 Cuvetas de espectrofotómetro
 Columnas
 Tubos de ensayo
 Pipetas

APLICACIÓN

• Se emplea para la determinación de pesos moleculares de proteínas.

• Desalinización: Largas moléculas de origen biológico son separadas de
especies ionizables o inorgánicas.
• La cromatografía en gel se utiliza para separar proteínas, péptidos, ácidos
nucléicos, polisacáridos, enzimas, hormonas y los químicos en polímeros,
para determinar distribuciones de pesos moleculares en mezclas de
polímeros.
COSTOS

Aunque es un método un poco mas complejo, la realización de este metodo no

tiene un costo extremo por el uso de equipos como el espectrofotómetro que son
accesibles de conseguir.

NORMAS METODOLOGICAS

No se encontró normas que hagan uso de este método cromatografico.

 MÉTODO 5

CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD

PRINCIPIO
Este método permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o
capacidad de unión a un determinado ligando.
Se basa en bolas de gel recubiertas de un ligando por el que tiene afinidad alguna
de las proteínas a aislar. Al pasar la mezcla compleja a través de la columna esta
proteína es retenida en la superficie de las bolas, eluyendose las demás.
Para eluir la proteína retenida por afinidad se suele aumentar la fuerza ionica de la
solución de solvente o incluir en este el ligando soluble a alta concentración de
forma que compita con el que esta unido a las bolas de gtel por la unión a la
proteína.

EQUIPAMIENTO

Serie de aditamentos que son necesarios para una corrida cromatografica:

 Bomba peristáltica
 Uvicord
 Recorder
 Colector de fracciones

APLICACIÓN

La cromatografía de afinidad se puede utilizar en un número de aplicaciones,

incluyendo la purificación de ácido nucleico, la purificación de proteínas a partir de
extractos libres de células, y la purificación de la sangre.

COSTOS
Se recomienda este método por su estabilidad química, resistencia mecánica pero
respecto a su equipamiento puede resultar de mediana accesibilidad.

NORMAS METODOLOGICAS

No se encontró norma que haga uso de este método.

 MÉTODO 6

CROMATOGRAFÍA DE GASES
PRINCIPIO

Es una de las técnicas más utilizadas e importantes, de forma que ha

revolucionado el campo de la química analítica.

En cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de

una columna cromatografica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil
que es un gas inerte, y a diferencia de la mayoría de los tipos de cromatografía, la
fase móvil no interacciona con las moléculas del analito, su única función es la de
transportar el analito a través de la columna.

EQUIPAMIENTO

 Cromatografo de gases
 Detector de captura electrónica
 Detector de ionización de llama

APLICACIÓN

 Medioambientales: análisis de pesticidas y herbicidas

 Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites, bebidas, alcoholes.
 Biociencia: drogas, fármacos y disolventes residuales.
 Derivados de petróleo: gas natural, gases permanentes , parafinas, etc

COSTOS

El equipo resulta costoso pero es solo la inversión al inicio y en el mantenimiento.

NORMAS METODOLOGICAS

Normas que hacen uso de este método:

 NMX AA 071 1981 Analisis de plaguicidas organoclorados

 NMX F490 1987 Determinacion de composición de acidos grasos
 COVENIN 4: 6-099 Analisis de gas de refinería
 NOM 028 ZOO 1995 Tecnica analítica: Cromatografia de gases
 METODO 7

CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCION

PRINCIPIO

Es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes

de una mezcla entre dos fases inmicibles, una fija estacionaria y otra móvil, la fase
móvil es un liquido que fluye a través de la columna que contiene a la fase fija.

En la HPLC isocratica el compuesto pasa por la columna cromatografica a través

de la fase estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeñas partículas
redondeadas con ciertas características químicas en su superficie) mediante el
bombeo de liquido (fase móvil) a alta presión a través de la columna.

La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidades y sus componentes

se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones químicas o físicas
con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna.

La utilización de presión en este método incrementa la velocidad lineal de los

compuestos dentro de la columna y reduce su difusión mejorando la resolución de
la cromatografía.

EQUIPAMIENTO

 Equipo HPLC
 Columnas de HPLC
 Bombas
 Reactores post columnas
 Filtros

APLICACIÓN

La cromatografía de líquidos de alta resolucion es la técnica analítica de

separación más ampliamente utilizada. Las razones son la sensibilidad, su fácil
adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas, es ideal para la
separación de especies no volátiles o termolábiles y por su gran aplicabilidad a
sustancias que son de interés en la industria. Algunos ejemplos son: aminoácidos,
proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, fármacos, terpenoides,
plaguicidas, antibióticos, esteroides, especies organometálicas y gran variedad de
sustancias inorgánicas.

COSTOS

Costo inicial del equipo alto y operacional medio, es uno de los métodos mas
costosos por todo el equipamiento que se necesita para realizarlo.

NORMAS METODOLOGICAS

Algunas normas que hacen uso de este método son:

 NTE INEN 15 63 determinacion de aflatoxina B1

 NMX F182 SCFI 2011 Determinacion de cafeína
 NTE INEN 2401 Analisis de glicomacropeptidos
 NTE INEN ISO 1050 Metodo por cromatografía de alta resolución
 METODO 8

CROMATOGRAFIA DE FLUIDOS SUPERCRITICOS

PRINCIPIO

La temperatura crítica de una sustancia es la temperatura por encima de la cual no

puede existir en la fase líquida independientemente de la presión. La presión
crítica es la presión de vapor de una sustancia a su temperatura crítica. Una
sustancia a temperaturas y presiones por encima de su temperatura y de su
presión crítica (punto crítico) se denomina fluido supercrítico.

La cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) es una modalidad híbrida entre la

cromatografía de gases y de líquidos que combina algunas características de cada
una de ellas. Esta técnica es una de los tres tipos importantes de cromatografía en
columna, ésta permite la separación y determinación de compuestos que no son
manipulados ni por la cromatografía de gases ni por la de líquidos: compuestos no
volátiles o térmicamente lábiles para los que la cromatografía de gases es
inaplicable y los compuestos que tienen grupos funcionales que no son
detectables por las técnicas espectroscópicas o electroquímicas empleadas en
cromatografía de líquidos.

EQUIPAMIENTO

 Equipo cromatografico
 Horno termostático
 Restrictor o dispositivo de contrapresión
 Detector de ionización de llama

APLICACION

El método de cromatografía de fluidos super críticos se aplica a una gran variedad

de compuestos, entre los que podemos citar drogas, alimentos, herbicidas,
tensioactivos, polímeros, aditivos, combustibles fosiles.

COSTOS

NORMAS METODOLOGICAS